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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒strand-specific荧光定量RT-PCR检测方法的建立
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作者 杨莘 周艳君 +3 位作者 单同领 姜一峰 童武 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期872-876,共5页
为了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的复制和转录机制,准确定量其在复制过程中基因组不同类型RNA(v RNA和c RNA)的含量,本研究根据PRRSV基因组Nsp12基因设计含有链特异性标签的特异性引物,建立了一种针对病毒基因组不同链RNA... 为了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的复制和转录机制,准确定量其在复制过程中基因组不同类型RNA(v RNA和c RNA)的含量,本研究根据PRRSV基因组Nsp12基因设计含有链特异性标签的特异性引物,建立了一种针对病毒基因组不同链RNA的strand-specific荧光定量RT-PCR方法。结果表明,以重组质粒标准品构建的标准曲线在101拷贝/μL^107拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,对v RNA和c RNA的检测下限为7.40拷贝/μL和6.52拷贝/μL,能够特异性的区分病毒复制过程中产生的v RNA链和c RNA链,具有很高的特异性、灵敏性和重复性。HP-PRRSV感染MARC-145细胞后不同时间段检测v RNA和c RNA含量显示,病毒不同链RNA含量在感染过程中持续增加,v RNA和c RNA含量在感染后24 h约为7.0×107拷贝/μL和7.2×106拷贝/μL。本研究建立的方法可以用于区分和定量PRRSV在复制过程中产生的不同链RNA,为研究病毒的复制和致病机理提供了一种有效的检测手段。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 strand-specific荧光定量rt-pcr 不同链RNA
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A FORMAL SPECIFICATION LANGUAGE FOR DYNAMIC STRAND SPACE MODEL
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作者 LIU Dong-xi(刘东喜) +3 位作者 LI Xiao-yong(李晓勇) BAI Ying-cai(白英彩) 《Journal of Shanghai Jiaotong university(Science)》 EI 2002年第1期23-25,35,共4页
Specification language is used to provide enough information for the model of the cryptographic protocol. This paper first extends strand space model to dynamic strand model, and then a formal specification language f... Specification language is used to provide enough information for the model of the cryptographic protocol. This paper first extends strand space model to dynamic strand model, and then a formal specification language for this model is defined by using BNF grammar. Compared with those in literatures, it is simpler because of only concerning the algebraic properties of cryptographic protocols. 展开更多
关键词 DYNAMIC strand SPACE CRYPTOGRAPHIC protocols FORMAL specification LANGUAGE
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The application of sequence specific primer and RT-PCR to LRRK2 gene polymorphism typing
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作者 Biao G Gaisheng T +1 位作者 Qinxue L Fengrui L 《Discussion of Clinical Cases》 2019年第2期17-19,共3页
Objective:To establish a new detecting method for disease susceptibility loci R1628P and G2385R of Parkinson’s disease(PD)related gene LRRK2.Methods:Sequence specific primers were designed to make a genotyping of DNA... Objective:To establish a new detecting method for disease susceptibility loci R1628P and G2385R of Parkinson’s disease(PD)related gene LRRK2.Methods:Sequence specific primers were designed to make a genotyping of DNA markers with known genotypes by use of quantitative fluorescence real-time PCR(RT-PCR).100 cases of PD samples with unknown genotypes were tested,and verified by use of polymerase chain reaction linked restriction fragment length polymorphism(PCR-RLFP).Results:The genotyping results of DNA markers proved to be correct,and 100 cases of samples to be tested had a completely consistent genotyping result with PCR-RLFP genotyping result.Conclusions:Sequence specific primer and quantitative fluorescence RT-PCR can successfully make a genotyping for disease susceptibility loci R1628P and G2385R of LRRK2. 展开更多
关键词 Parkinson’s disease LRRK2 gene Sequence specific primer Quantitative fluorescence rt-pcr GENOTYPE
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Cloning of cDNA Encoding COMT from Chinese White Poplar ( Populus tomentosa ), Sequence Analysis and Specific Expression 被引量:12
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作者 魏建华 赵华燕 +3 位作者 卢善发 王台 马庆虎 宋艳茹 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第3期326-328,共3页
The cDNA fragment encoding caffeic acid 3_O_methyltransferase (COMT) in Chinese white poplar ( Populus tomentosa Carr.) was isolated and cloned by RT_PCR technique. The size of the cDNA fragment is 1 080 bp, which alm... The cDNA fragment encoding caffeic acid 3_O_methyltransferase (COMT) in Chinese white poplar ( Populus tomentosa Carr.) was isolated and cloned by RT_PCR technique. The size of the cDNA fragment is 1 080 bp, which almost covers the whole cDNA_encoding region. Authors’ cDNA fragment in P. tomentosa shares 98.7% homology with the reported corresponding cDNA in the P. tremuloids at nucleotide level, 99.4% homology at amino acid level, respectively. The analysis of Northern dot hybridization showed that COMT is expressed specifically in the developing secondary xylem of stem during the season of xylem differentiation, which means the linkage between the gene expression for a monolignol biosynthetic enzyme and seasonal regulation of xylem development in woody plant. 展开更多
关键词 Chinese white poplar caffeic acid 3-O-methyltransferase (COMT) gene rt-pcr specific expression
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Construction and Identification of Intestine-specific Expression Vector of Xylanase Gene(XynB)
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作者 Sheng GAO Yulong WANG +1 位作者 Zhe CHEN Hui KE 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2020年第5期1-4,8,共5页
The Aspergillus niger XynB gene and core promoter region of porcine RELMβgene were cloned into pcDNA3.1(-),and an intestine-specific expression vector pcDNA3.1-RELMβ-XynB-Myc-GFP carrying green fluorescence and Myc ... The Aspergillus niger XynB gene and core promoter region of porcine RELMβgene were cloned into pcDNA3.1(-),and an intestine-specific expression vector pcDNA3.1-RELMβ-XynB-Myc-GFP carrying green fluorescence and Myc double tags was constructed.The vector was transfected into human colon cancer cells(HT29)and human liver cancer cells(Bel7402)using liposomes.Fluorescence microscopy revealed that the vector could specifically express green fluorescent protein(GFP)in HT29 cells.RT-PCR and Western Blot were performed on the HT29 cells transfected with the expression vector,and the results showed that the XynB gene was normally transcribed in HT29 cells,and the target protein expression was detected in the cells. 展开更多
关键词 XYLANASE specific expression vector Resistin-likeβgene WB detection rt-pcr detection
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The Distribution and Substrate Specificity of Extracellular Nuclease Activity in Marine Fungi
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作者 Larissa A. Balabanova Michael V. Pivkin Valery A. Rasskazov 《Open Journal of Marine Science》 2012年第4期188-195,共8页
The distribution and specificity of extracellular nucleases produced by marine fungi belonging to eleven genera, namely: Alternaria, Aspergillus, Aureobasidium, Chaetomium, Fusarium, Gliomastix, Humicola, Penicillium,... The distribution and specificity of extracellular nucleases produced by marine fungi belonging to eleven genera, namely: Alternaria, Aspergillus, Aureobasidium, Chaetomium, Fusarium, Gliomastix, Humicola, Penicillium, Scopulariopsis, Wardomyces, Periconia, have implied its important function in the organic phosphorus and nitrogen circle in the Ocean. The fungal nucleases of 64 isolates tested were more or less specific for single-stranded DNA with a high preferential specificity towards poly-U substrate with forming of 5’-phosphate mononucleotides. A couple of the nucleases were capable of RNA digesting. The highest level of extracellular nucleolytic ability was observed in Penicillium spp. isolates. The tight correlation found between extracellular nuclease activity and the rate of thymidine uptake by actively growing and sporulating marine fungus Penicillium melinii suggests that this nuclease is required for fulfilling the nucleotide pool of precursors of DNA biosynthesis during transformation of hyphae into the aerial mycelium and conidia in stressful environmental conditions. 展开更多
关键词 MARINE Fungi MARINE Environment Single-strand-specific NUCLEASE DNASE RNAse SSDNA THYMIDINE Uptake
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口蹄疫病毒链特异性荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 王洪梅 贾春涛 +4 位作者 胡桂学 夏咸柱 于力 刘文浩 何洪彬 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第11期159-163,共5页
为了定量检测口蹄疫病毒(FMDV)的正链和负链RNA,揭示FMDV复制的分子机制,试验采用链特异性荧光定量RT-PCR(ssqRT-PCR)方法提取了FMDV的RNA,在FMDV链特异性反转录引物的5'端引入非病毒基因序列标签进行反转录,再经链特异性ssqRT-PCR... 为了定量检测口蹄疫病毒(FMDV)的正链和负链RNA,揭示FMDV复制的分子机制,试验采用链特异性荧光定量RT-PCR(ssqRT-PCR)方法提取了FMDV的RNA,在FMDV链特异性反转录引物的5'端引入非病毒基因序列标签进行反转录,再经链特异性ssqRT-PCR扩增进行灵敏性、特异性、重复性检测。结果表明:FMDV基因组正链、负链RNA的链特异性ssqRT-PCR方法构建成功,该方法对FMDV正链和负链RNA检测的灵敏度达到1×101拷贝,具有较好的重复性和特异性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒(FMDV) 链特异性 非病毒基因序列标签 荧光定量rt-pcr(ssqrt-pcr) 基因组RNA 检测方法
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Establishment and Application of Digital RT-PCR Assay for Detection of Avian Influenza Virus H9 Subtype 被引量:1
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作者 Bin Wu Lin Zhang +2 位作者 Liming Su Huijun Zhao Xiaoping Cai 《Advances in Microbiology》 2017年第11期760-768,共9页
A digital RT-PCR method for rapid detection of H9 subtype influenza was established by comparing the two methods of digital RT-PCR and real-time quantitative RT-PCR. The sensitivity, specificity and reproducibility of... A digital RT-PCR method for rapid detection of H9 subtype influenza was established by comparing the two methods of digital RT-PCR and real-time quantitative RT-PCR. The sensitivity, specificity and reproducibility of the two methods for H9 were determined by gradient dilution using the same pair of primers and probes. Both methods were able to detect 104 times diluted H9 pathogens, while digital RT-PCR could detect H9 in single droplets, and its sensitivity was higher than real-time quantitative RT-PCR. At the same time, the specificities of both methods were very strong, with no amplification reactions for H3N2, H4N2, H6N2. The reproducibility of the two methods were also good. Digital RT-PCR has a higher sensitivity than real-time quantitative RT-PCR and could play an important role in the rapid detection of H9 subtype influenza virus. 展开更多
关键词 AVIAN Influenza Virus H9 SUBTYPE (H9) DIGITAL rt-pcr Real-Time Quantitative rt-pcr Sensitivity specificity
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链特异性RT-PCR方法检测口蹄疫病毒负链RNA 被引量:2
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作者 王继华 信爱国 +5 位作者 朱明旺 苗海生 胡骑 廖德芳 李乐 李华春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期130-133,144,共5页
旨在建立一种快速、灵敏、特异的检测口蹄疫病毒在复制过程中产生的负链RNA的方法。根据口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒5'-非编码区(5'-UTR)基因序列,设计了5条引物链特异性RT-PCR引物,建立检测口蹄疫病毒... 旨在建立一种快速、灵敏、特异的检测口蹄疫病毒在复制过程中产生的负链RNA的方法。根据口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒5'-非编码区(5'-UTR)基因序列,设计了5条引物链特异性RT-PCR引物,建立检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法。提取FMD病毒RNA,应用设计的正向引物T1-H1做反转录引物,经反转录和RNA酶A消化后,再经两轮链特异性PCR扩增,可特异性地检测FMDV在复制过程中产生的负链RNA。所建立的检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法是一种可靠的方法,在确定细胞培养物和动物感染FMDV的病毒复制和了解病毒的致病性研究中具有应用前景。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 链特异性rt-pcr 复制中间体 负链RNA 感染
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一种甲型肝炎灭活疫苗灭活验证试验方法的建立 被引量:2
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作者 刘令九 徐晓霞 +7 位作者 王桂荣 李娜 孔雪 段雪峰 邵燕 尚瑞琴 于海龙 夏青娟 《微生物学免疫学进展》 2015年第4期26-30,共5页
目的探讨细胞培养/链特异性RT-PCR方法可否作为甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗(L-A-1减毒株)的病毒灭活验证试验方法。方法根据甲肝病毒(HAV)L-A-1株基因组序列,设计5条基因特异性引物,提取HAV基因组RNA,应用设计的正向引物进行反转录,再进行两... 目的探讨细胞培养/链特异性RT-PCR方法可否作为甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗(L-A-1减毒株)的病毒灭活验证试验方法。方法根据甲肝病毒(HAV)L-A-1株基因组序列,设计5条基因特异性引物,提取HAV基因组RNA,应用设计的正向引物进行反转录,再进行两轮PCR扩增,通过检测HAV复制过程中的负链中间体,对甲肝灭活疫苗灭活验证试验方法进行探讨,并与《中华人民共和国药典》甲肝灭活疫苗HAV灭活验证试验方法进行比较。结果细胞培养/链特异性RT-PCR方法对HAV负链RNA特异、敏感。通过方法学验证试验表明,该方法的特异性、敏感性和重复性均良好。利用此方法对5批甲肝灭活疫苗(L-A-1减毒株)进行检测,结果全为阴性,与《中华人民共和国药典》甲肝灭活疫苗HAV灭活验证试验测定结果相同。结论细胞培养/链特异性RT-PCR方法快速、灵敏可靠,可作为检测甲肝灭活疫苗(L-A-1减毒株)HAV灭活验证试验的方法。 展开更多
关键词 甲型肝炎灭活疫苗 细胞培养/链特异性rt-pcr 灭活验证试验
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鳜胰蛋白酶基因外显子3上SNP G169A位点鉴定和四种不同检测方法的比较 被引量:1
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作者 于海静 梁旭方 +2 位作者 方荣 彭敏燕 朱滔 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2011年第6期9-14,共6页
采用PCR产物直接测序法(DS)对鳜(Siniperca chuatsi)胰蛋白酶基因(TRY)进行单核苷酸多态性(SNPs)分析,发现外显子3上的G169A多态性。对312个样品进行分析,共发现三种基因型GG、GA、AA,其基因型频率分别为0.26、0.54、0.20,两个等位基因G... 采用PCR产物直接测序法(DS)对鳜(Siniperca chuatsi)胰蛋白酶基因(TRY)进行单核苷酸多态性(SNPs)分析,发现外显子3上的G169A多态性。对312个样品进行分析,共发现三种基因型GG、GA、AA,其基因型频率分别为0.26、0.54、0.20,两个等位基因G和A的基因频率分别为0.53和0.47。用创造限制性酶切位点法PCR(CRS-PCR)、单管双向等位基因专一性扩增(SB-ASA)和单链构象多态性分析(PCR-SSCP)对该SNP位点进行验证。结果表明,CRS-PCR法不能对该SNP位点分型,PCR-SSCP和SB-ASA法可以且准确度分别为100%和96.67%。 展开更多
关键词 单核苷酸多态性 直接测序法 单链构象多态性分析 单管双向等位基因专一性扩增法 创造限制酶切位点法
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口蹄疫病毒3D基因的真核表达及其表达产物的功能分析 被引量:6
12
作者 鲁彬 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期800-804,共5页
利用RT-PCR技术扩增口蹄疫病毒(FMDV)编码RNA依赖的RNA聚合酶的3D基因,经测序确认后将其克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)中,重组质粒pcDNA3.1(+)-3D经HindⅢ、XbaⅠ双酶切后转染至BHK-21细胞,用纯化的目的蛋白进行Western-blotting鉴... 利用RT-PCR技术扩增口蹄疫病毒(FMDV)编码RNA依赖的RNA聚合酶的3D基因,经测序确认后将其克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)中,重组质粒pcDNA3.1(+)-3D经HindⅢ、XbaⅠ双酶切后转染至BHK-21细胞,用纯化的目的蛋白进行Western-blotting鉴定,并预测该3D基因表达产物的三级结构。结果显示,获得分子质量约55 ku的单一3D基因表达产物,其三级结构较为保守。利用RNA细胞内复制体系和荧光定量RT-PCR技术,证明3D基因表达产物在细胞内可促进口蹄疫病毒基因组的复制。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 RNA依赖的RNA聚合酶 真核表达 链特异性荧光定量RT—PCR
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系统性红斑狼疮患者自身抗体联合检测的意义 被引量:4
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作者 王蓉 杜琴 《临床和实验医学杂志》 2008年第11期50-51,共2页
目的探讨抗核抗体(ANA),抗双链DNA(dsDNA)抗体,抗Smith(Sm)抗体和抗核小体抗体(AnuA)四种自身抗体单项及联合检测在系统性红斑狼疮(SLE)的诊断中的价值。方法测定56例SLE患者,108例其他结缔组织病患者及50例健康人群血清中的自身抗体。... 目的探讨抗核抗体(ANA),抗双链DNA(dsDNA)抗体,抗Smith(Sm)抗体和抗核小体抗体(AnuA)四种自身抗体单项及联合检测在系统性红斑狼疮(SLE)的诊断中的价值。方法测定56例SLE患者,108例其他结缔组织病患者及50例健康人群血清中的自身抗体。以间接免疫荧光法测定ANA,抗dsDNA抗体;以免疫印迹法测定抗Sm抗体,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定AnuA。结果56例SLE患者血清自身抗体检测中:ANA、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA阳性率分别为:91.0%、44.6%、35.7%、64.3%;特异性分别为:70.9%,100%,98.7%,98.1%。在抗dsDNA抗体,抗Sm抗体,AnuA三者中,任何一项检测结果阴性时,其他两种自身抗体均出现一定阳性率,并以AnuA在抗dsDNA抗体、抗Sm抗体阴性时阳性检出率最高,达51.6%和61.1%。三者联合检测阳性率为83.9%。结论在检测的四种自身抗体中以ANA敏感性最高,其他三种特异性均可达97%以上,除AnuA敏感性稍高,其他两项检测值均低于50%。三者联合检测可较大程度提高SLE检测阳性率,并且特异性也与单独检测差异无显著性,且三者具有明显的互补作用。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 抗核抗体 抗双链DNA抗体 抗Smith抗体 ANUA 敏感性 特异性
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JG161—2016《无粘结预应力钢绞线》修订简介
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作者 朱莹 陈茜 董建伟 《施工技术》 CAS 北大核心 2017年第9期121-125,共5页
介绍了JG161—2016《无粘结预应力钢绞线》修订的概况、修订的主要内容、修订的意义。本次修订是针对无粘结预应力钢绞线生产、检测及工程应用中出现的各种问题,并结合我国预应力技术发展的趋势,在参考国际先进标准的基础上全面修订而成。
关键词 标准规范 无粘结 预应力 钢绞线 修订
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定向RNA-Seq技术在铜绿假单胞菌的应用
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作者 张樱 陈昊 +1 位作者 罗燕萍 金守光 《解放军医学院学报》 CAS 2013年第6期647-649,共3页
目的探讨定向转录组测序技术在铜绿假单胞菌的应用,为研究基因组的注释和表达调控提供重要手段。方法抽提菌体RNA并去除rRNA,连接接头后用特异性引物反转录成cDNA,PCR扩增后测序;所得数据采用Bowtie和rSeq软件分析。结果在所有26 557 65... 目的探讨定向转录组测序技术在铜绿假单胞菌的应用,为研究基因组的注释和表达调控提供重要手段。方法抽提菌体RNA并去除rRNA,连接接头后用特异性引物反转录成cDNA,PCR扩增后测序;所得数据采用Bowtie和rSeq软件分析。结果在所有26 557 654条读段中,除去无效读段209 928条,与基因组匹配的读段为26 347 726条,测序结果能覆盖几乎99%的基因组,78.7%的基因来源于两个方向转录本映射读段,读段数最高的基因是ssrA,发现新的基因2 283个。结论成功建立了铜绿假单胞菌中的定向RNA-Seq技术。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 定向高通量测序 转录组
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ESN、AES在IGSS试验中作为dsDNA底物特异性的进一步研究
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作者 季晓辉 袁淑云 +1 位作者 杜文平 荣漪雯 《徐州医学院学报》 CAS 1993年第3期163-167,共5页
对酶处理人精子头核(ESN)、酸洗脱鼠肝、胃印片(AES-肝/肾)在免疫金银染色(IGSS)试验中作为双链DNA(dsDNA)底物的特异性作了进一步研究。结果显示,血清经组白蛋、RNA吸收,底物经加热、胰/糜蛋白酶及RNA酶处理,对检测结果影响不大;而血清... 对酶处理人精子头核(ESN)、酸洗脱鼠肝、胃印片(AES-肝/肾)在免疫金银染色(IGSS)试验中作为双链DNA(dsDNA)底物的特异性作了进一步研究。结果显示,血清经组白蛋、RNA吸收,底物经加热、胰/糜蛋白酶及RNA酶处理,对检测结果影响不大;而血清经DNA吸收及底物经DNA酶处理,对检测结果影响极大;ESN/AES-IGSS检测结果与并行对照的抗RNA抗体检测结果差异有显著性,其滴度间亦无直线相关性。这表明底物中主要是dsDNA与血清中相应抗体发生反应。抗精子抗体阳性血清及输精管结扎后血清亦均不能使ESN呈阳性反应。因而ESN、AES作为dsDNA底物的特异性应予肯定。 展开更多
关键词 免疫学检测 抗原底物 双链 DNA
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口蹄疫病毒诱导BHK-21细胞产生凋亡的研究
17
作者 鲁彬 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2007年第7期20-23,共4页
试验利用口蹄疫病毒感染BHK-21细胞,通过MTT法、Hoechst 33258染色、原位末端标记技术(TUNEL)、流式细胞术和链特异性荧光定量RT-PCR,分别就口蹄疫病毒对BHK-21细胞生长的抑制作用、凋亡细胞的形态学和分子生物学特征、凋亡峰的出现和... 试验利用口蹄疫病毒感染BHK-21细胞,通过MTT法、Hoechst 33258染色、原位末端标记技术(TUNEL)、流式细胞术和链特异性荧光定量RT-PCR,分别就口蹄疫病毒对BHK-21细胞生长的抑制作用、凋亡细胞的形态学和分子生物学特征、凋亡峰的出现和细胞周期的变化以及口蹄疫病毒基因组在BHK-21细胞内的复制情况进行了检测。结果表明:口蹄疫病毒可抑制BHK-21细胞的生长并诱导其产生凋亡,呈现典型的凋亡细胞特征,出现细胞凋亡峰并且细胞周期明显被阻滞在G1/G0期,同时对凋亡率和口蹄疫病毒基因组复制的关系做了初步研究。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 凋亡 原位末端标记 流式细胞术 链特异性荧光定量RT—PCR
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Leber遗传性视神经病变线粒体DNA突变的研究
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作者 郑梅玲 贺江梅 +2 位作者 张桂林 化爱玲 张月莲 《中国优生与遗传杂志》 2007年第8期23-24,共2页
目的探讨Leber遗传性视神经病变患者的线粒体DNA突变类型及特点。方法分别应用等位基因特异性PCR(MSP-PCR)、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)联合DNA测序的方法,对12个家系中21位... 目的探讨Leber遗传性视神经病变患者的线粒体DNA突变类型及特点。方法分别应用等位基因特异性PCR(MSP-PCR)、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)联合DNA测序的方法,对12个家系中21位临床症状疑诊为LHON的患者及其19位无明显眼疾的母系亲属进行线粒体DNA检测。结果40例受检者中35例发生11778位点突变,2位成员有3460位点突变,有1例发现有4258位点突变(A→G)。结论11778是LHON患者常见的突变位点,3460突变少见,新发现的突变位点4258可能是新的继发突变或基因多态性。 展开更多
关键词 LEBER遗传性视神经病变 线粒体DNA突变 等位基因特异性PCR、限制性片段长度多态性 单链构象多态性 DNA序列分析
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基于三明治SERS结构和酶剪切技术的肿瘤标志物miRNA-21的高灵敏检测 被引量:4
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作者 洑颢 吕炜烽 +4 位作者 高永峰 王哲 邹祖全 张鑫 周骏 《光子学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第7期180-189,共10页
采用Langmiur-Bloggt膜技术和磁控溅射技术制备Ag覆盖聚苯乙烯小球六方密堆积阵列(Ag/PS HCA)基底,再将合成的海胆状Au纳米粒子与4-巯基苯甲酸(4-Mercaptobenzoic acid,4MBA)链接得到Au@4MBA探针,然后将单链寡核苷酸DNA21分别与基底和Au... 采用Langmiur-Bloggt膜技术和磁控溅射技术制备Ag覆盖聚苯乙烯小球六方密堆积阵列(Ag/PS HCA)基底,再将合成的海胆状Au纳米粒子与4-巯基苯甲酸(4-Mercaptobenzoic acid,4MBA)链接得到Au@4MBA探针,然后将单链寡核苷酸DNA21分别与基底和Au@4MBA探针链接,构建Au@4MBA-DNA21-Ag/PS HCA三明治结构,在DNA21与miRNA-21杂交后使用双链特异性剪切酶(DSN)剪切DNA磷酸二酯键,最后进行表面增强拉曼散射信号检测.实验结果表明,基于上述三明治表面增强拉曼散射结构和酶剪切技术进行肿瘤标志物miRNA-21的检测,在100pmol·L^-1到1fmol·L^-1的浓度范围内,检测极限达到0.853fmol·L^-1,具有极高的灵敏度和优良的特异性. 展开更多
关键词 聚苯乙烯小球 表面增强拉曼散射 三明治结构 双链特异性剪切酶 肿瘤标志物
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苯丙酮尿症患者突变基因的检测
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作者 魏丽珠 刘光陵 张仙球 《南京部队医药》 1999年第1期13-15,共3页
目的 检测苯丙酮尿症(phenyl—ketonuria,简称PKU)患者的基因突变类型。方法采用PCR-SSCP(聚合酶链反应单链构象多态)银染和PCR-ASO(聚合酶链反应等位基因特异性寡核苷酸)探针杂交,分别检测了8个PKU家庭中10名患者和6名双亲。PCR—SSCP... 目的 检测苯丙酮尿症(phenyl—ketonuria,简称PKU)患者的基因突变类型。方法采用PCR-SSCP(聚合酶链反应单链构象多态)银染和PCR-ASO(聚合酶链反应等位基因特异性寡核苷酸)探针杂交,分别检测了8个PKU家庭中10名患者和6名双亲。PCR—SSCP银染应用了3对引物,外显子7、11、12。PCR-ASO探针杂交应用了外显子7、10、11、12、4对探针。结果 王氏家系姐弟俩(表1中编号7,10)通过PCR-SSCP方法发现E_7区域有异常电泳带,经PCR-ASO方法证实他们和附图编号8均为苯丙氨酸羟化酶E7R243Q位点的纯合子突变;沈氏家系姐妹俩通过PCR-ASO法检出E12R413P位点为纯合子突变,另一例PKU患者为E12R413P位点的杂合子。结论 上述突变位点为PKU患者的产前基因诊断提供了依据。 展开更多
关键词 苯丙酮尿症 苯丙氨酸羟化酶基因 PCR-SSCP(聚合酶反应-单链构象多态性) PCR-ASO(聚合酶链反应-寡核苷酸探针)
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