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福建省狂犬病毒街毒株分离鉴定及生物学特性研究 被引量:2
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作者 张建明 邓艳琴 +3 位作者 王灵岚 林代华 杨秀惠 严延生 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期684-687,共4页
目的分离福建省狂犬病毒街毒株,了解病毒株的生物学特性。方法采集疑似狂犬的脑组织,通过细胞培养和乳鼠脑接种分离狂犬病毒,用直接免疫荧光和RT-PCR等方法进行鉴定,并对病毒的分子生物学特性进行研究。结果从疑似狂犬的脑组织中分离出... 目的分离福建省狂犬病毒街毒株,了解病毒株的生物学特性。方法采集疑似狂犬的脑组织,通过细胞培养和乳鼠脑接种分离狂犬病毒,用直接免疫荧光和RT-PCR等方法进行鉴定,并对病毒的分子生物学特性进行研究。结果从疑似狂犬的脑组织中分离出狂犬病毒,TCID50的测定结果显示,细胞毒滴度不高,病毒株对BHK-21细胞的适应性不强,LD50的测定结果显示,病毒株为狂犬病毒强毒株。结论从福建省家犬中成功分离到狂犬病毒街毒株,为狂犬病的实验室研究奠定基础。 展开更多
关键词 狂犬病毒 街毒株 分离鉴定 生物学特性
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CTN株疫苗对中国狂犬病病毒街毒代表株的保护性 被引量:3
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作者 程满荣 吴杰 +1 位作者 孟胜利 徐葛林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第9期786-787,共2页
目的研究人用狂犬病病毒CTN株疫苗对中国狂犬病病毒街毒代表株的保护性,为评估该疫苗的适用性提供依据。方法用CTN株疫苗免疫昆明小鼠,用3株具有代表性的街毒株CQ92、HN06、J和标准攻击毒株CVS经脑内和肌肉攻击,以未免疫小鼠进行脑内和... 目的研究人用狂犬病病毒CTN株疫苗对中国狂犬病病毒街毒代表株的保护性,为评估该疫苗的适用性提供依据。方法用CTN株疫苗免疫昆明小鼠,用3株具有代表性的街毒株CQ92、HN06、J和标准攻击毒株CVS经脑内和肌肉攻击,以未免疫小鼠进行脑内和肌肉攻击为对照,观察CTN株疫苗的保护效果。结果原倍和5倍稀释的疫苗免疫的小鼠经3株街毒肌肉攻击后,均得到100%的保护,与对照组比较,差异均有极显著意义;经3株街毒脑内攻击后,原倍疫苗免疫的小鼠均得到100%的保护,5倍稀释的疫苗免疫的小鼠对3株街毒CQ92、HN06、J的保护率分别为85%、75%和77.8%,与对照组比较,差异均有极显著意义。结论CTN株疫苗总体上能有效预防我国目前狂犬病的流行。 展开更多
关键词 狂犬病疫苗 CTN株 街毒株 保护性
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狂犬病病毒街毒株对体外培养小鼠海马神经元的损伤作用及其机制 被引量:1
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作者 宋艳 宋颖 +1 位作者 侯金利 张茂林 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期525-528,I0002,共5页
目的:探讨狂犬病病毒街毒株(RV)感染神经细胞的形态学表现,揭示狂犬病病毒致神经功能异常的机制。方法:体内实验,20只C57/BL小鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组小鼠脑内接种30μL RV病毒液(10TCID50),对照组小鼠脑内接种等量... 目的:探讨狂犬病病毒街毒株(RV)感染神经细胞的形态学表现,揭示狂犬病病毒致神经功能异常的机制。方法:体内实验,20只C57/BL小鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组小鼠脑内接种30μL RV病毒液(10TCID50),对照组小鼠脑内接种等量细胞维持液,利用抗RV抗体检测病毒抗原在小鼠脑组织的分布。体外实验,培养原代海马神经细胞,培养1周后,感染狂犬病病毒,免疫荧光检测感染72、96和120h后病毒的增殖情况。结果:体内实验,狂犬病病毒感染4d后,在海马CA1区锥状神经元胞体和树突中均能检测到狂犬病毒抗原;狂犬病病毒感染7d后,仅在海马CA1区胞体中检测到狂犬病病毒抗原。体外实验,狂犬病RV感染体外培养的原代神经细胞120h后,感染的神经元数量最多,且感染的神经元树突数量减少。结论:狂犬病RV可感染、损伤海马CA1区树突,从而引起小鼠神经功能异常。 展开更多
关键词 狂犬病病毒街毒株 神经元 神经功能异常 C57 BL小鼠
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山羊痘病毒疫苗株与野毒株PCR-RFLP鉴别方法的建立及应用
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作者 朱伟 熊毅 +1 位作者 付薇 刘棋 《动物医学进展》 CSCD 2008年第12期17-19,共3页
为了建立区分疫苗株与广西分离株的检测方法,根据GenBank上的山羊痘病毒序列设计1对引物,用来扩增山羊痘病毒P32基因,通过对国内疫苗株及6株广西分离株的P32基因进行克隆、测序比较发现,所有广西分离株核苷酸651位的碱基全部由T变为... 为了建立区分疫苗株与广西分离株的检测方法,根据GenBank上的山羊痘病毒序列设计1对引物,用来扩增山羊痘病毒P32基因,通过对国内疫苗株及6株广西分离株的P32基因进行克隆、测序比较发现,所有广西分离株核苷酸651位的碱基全部由T变为C,647位~652位核苷酸构成由TGTATA变异为TGTACA,多了1个限制性内切酶Bsp 1407Ⅰ位点,因此用特异性引物扩增出739bp的目的片段后,再用限制性内切酶BsP1407 Ⅰ进行酶切分析。疫苗株可以切成135hp和604bp3个片段,广西分离株可以切成135、226、378bp3个片段。结果表明,所建立的PCR—RFLP方法可以区分疫苗株和广西分离株。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 野毒株 疫苗株 聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测法
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3株我国狂犬病病毒街毒株在细胞和乳鼠脑内的培养及生长特性 被引量:1
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作者 李露 王化磊 +10 位作者 赵国星 齐瑛琳 郑学星 冯娜 赵永坤 王铁成 李忠义 高玉伟 冯烨 杨松涛 夏咸柱 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第5期612-616,共5页
目的比较3株来自我国不同地区的狂犬病病毒街毒株在细胞和乳鼠脑内的生长特性,为建立狂犬病病毒感染模型奠定基础。方法分别通过乳鼠脑内接种和细胞培养法进行连续传代,测定不同代次SXYQ、YN01和GDMMD57株狂犬病病毒街毒株的病毒滴度,... 目的比较3株来自我国不同地区的狂犬病病毒街毒株在细胞和乳鼠脑内的生长特性,为建立狂犬病病毒感染模型奠定基础。方法分别通过乳鼠脑内接种和细胞培养法进行连续传代,测定不同代次SXYQ、YN01和GDMMD57株狂犬病病毒街毒株的病毒滴度,计算半数细胞感染量(TCID50)。结果 SXYQ、YN01和GDMMD57株病毒乳鼠脑内接种传代至10代,病毒滴度随传代次数的增加,呈上升趋势,至第8代后,病毒滴度趋于稳定,分别为105.85、105.63和105.97 TCID50/g,不同毒株间病毒滴度存在差异。SXYQ、YN01和GDMMD57株病毒接种N2a细胞后,随着传代次数的增加,病毒对细胞的适应性不断增强,病毒滴度呈上升趋势,至第15代后,病毒滴度趋于稳定,不同毒株间病毒滴度存在差异;第20代SXYQ株病毒的滴度在感染后2.5 d达到峰值(106.80 TCID50/ml),YN01和GDMMD57株病毒滴度在感染后3 d达到峰值(均为107.30 TCID50/ml)。结论 3株病毒在细胞和乳鼠脑内经连续传代后均能达到较高滴度,可用于狂犬病病毒感染模型的建立及新型疫苗的研究。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 街毒株 细胞培养 生长特性
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2018年福建省首例疑似狂犬病病例的病毒分离鉴定及G基因序列分析 被引量:1
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作者 孟胜利 李茜 +5 位作者 颜长护 庄鸿志 麦健仪 吴杰 王文辉 王泽鋆 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第9期983-988,共6页
目的对2018年福建省首例疑似狂犬病病例进行病毒分离鉴定及G基因序列分析。方法收集2018年福建晋江送检的疑似狂犬病患者的血液、唾液及脑脊液样本,进行实验室诊断,昆明乳鼠颅内接种唾液及脑脊液样本,酶联免疫法检测狂犬病病毒(rabies v... 目的对2018年福建省首例疑似狂犬病病例进行病毒分离鉴定及G基因序列分析。方法收集2018年福建晋江送检的疑似狂犬病患者的血液、唾液及脑脊液样本,进行实验室诊断,昆明乳鼠颅内接种唾液及脑脊液样本,酶联免疫法检测狂犬病病毒(rabies virus,RABV)抗原;免疫荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测血液样本中抗RABV中和抗体;提取接种唾液的乳鼠脑悬液RNA,RT-PCR扩增G基因序列,将其与国内外疫苗株、福建省及相邻省分离的街毒株序列构建NJ(Neighbor-Joining)分子系统进化树,并进行同源性分析。结果血液样本中未检出抗RABV中和抗体;经乳鼠颅内接种及RT-PCR法,仅唾液样本检测出RABV,确诊患者为狂犬病病例,新分离的街毒株命名为18FJ01。该毒株G基因开放阅读框全长1575 bp,编码524个氨基酸,属基因Ⅰ型RABV,与山东省CTN-33疫苗株的亲缘关系最近,与国内PV、aG、HEP-Flury及ERA疫苗株亲缘关系相对较远;与福建邻近省份街毒株核苷酸及氨基酸序列的同源性分别为84.3%~97.8%和92.9%~98.8%,与国内外疫苗株核苷酸及氨基酸序列的同源性分别为80.1%~93.2%和88.9%~96.9%。结论成功对该病例进行了病毒分离及鉴定,该毒株与CTN-33疫苗株同源性较高。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 街毒株 G基因序列 进化分析
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一例人狂犬病病例的病毒分离及鉴定
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作者 王月 任亮 +14 位作者 吴杰 周亦武 郑新雄 解庭波 黄思佳 刘良 王荣帅 屈国强 明平刚 翟珑山 王泽鋆 霍玉奇 季雅琦 徐葛林 严家新 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第3期305-310,共6页
目的对2013年武汉市新发生的一例疑似狂犬病死亡病例的脑组织进行病毒分离及鉴定。方法采用直接荧光抗体法(DFA)和ELISA法检测狂犬病病毒(rabies virus,RABV)抗原;提取病毒RNA,设计12对引物,分段扩增全基因组,克隆后测序,应用DNAStar软... 目的对2013年武汉市新发生的一例疑似狂犬病死亡病例的脑组织进行病毒分离及鉴定。方法采用直接荧光抗体法(DFA)和ELISA法检测狂犬病病毒(rabies virus,RABV)抗原;提取病毒RNA,设计12对引物,分段扩增全基因组,克隆后测序,应用DNAStar软件包中的MegAlign模块对基因所编码的氨基酸进行对位分析;Clustal X 1.83软件和GENEDOC软件用于序列比对;MEGA 4.1软件以Kimura two-parameter模型邻位相连法(Neighbor-Joining,NJ)构建系统进化树(Bootstrap-l000),并与国内外疫苗株及近期湖北省及周边地区分离的代表性街毒株进行同源性分析。结果分离的街毒株13WH10的RABV抗原呈阳性;13WH10街毒株基因组全长11 924 bp,属基因Ⅰ型狂犬病病毒;13WH10与湖北省及周边街毒株处于同一亚群,与CTN-1疫苗株及东南亚地区的街毒株同源性较高,高于欧美国家疫苗株。结论成功对武汉市2013年新发生的一例疑似狂犬病死亡病例的脑组织进行了病毒分离及鉴定;CTN-1与RABV国内分离株同源性较高,系统进化关系较近,提示采用CTN-1疫苗株生产的狂犬病疫苗可有效预防中国狂犬病的流行。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 街毒株 同源性分析
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