马钱子减毒增效途径及机制研究进展

本文综述马钱子减毒增效的主要途径及其减毒增效的机制研究进展。马钱子减毒增效的主要途径包括炮制、配伍、新剂型与制剂新技术等;减毒增效的机制主要包括生物碱成分含量发生变化、生物碱药代动力学行为改变、影响CYP450酶的mRNA表达和酶活性、诱导血脑屏障上P-糖蛋白外向转运加速生物碱外排、缓释及靶向控制药物浓度梯度等。关于马钱子减毒增效的途径研究较多,但对其减毒增效的机制和原理研究较少且不甚深入,建议后续研究从毒性物质基础、体内暴露和体内过程、分子机制、量-时-毒-效关联性及转化规律等方面对马钱子减毒增效的机制进行深入研究。

基于半定向转化策略的马钱子模拟炮制方法研究

目的:以马钱子为例,提出一种优化中药炮制方法的半定向转化策略,建立更高效、可标准化的现代炮制方法,获得药效更优、毒性更低的马钱子炮制品。方法:搭建通氧加热炮制装置,以加热温度、加热时间、加样量为考察因素,以士的宁、马钱子碱、士的宁氮氧化物、马钱子碱氮氧化物含量的总评归一值(OD)为监测指标,采用Box-Behnken响应面法优化炮制工艺。结果:马钱子的最优通氧炮制工艺为加样量4.8 g、加热温度180℃、加热时间1 h。经3次验证,所得平均OD为93.15 (RSD=1.68%),与预测OD (97.20)的相对误差为4.17%。结论:提出了一种半定向转化策略,并成功建立了马钱子通氧炮制方法,有效提高了士的宁氮氧化物和马钱子碱氮氧化物在马钱子炮制品中的含量,可为中药炮制现代化研究提供新的思路。

不同批次马钱子种仁生品及醋制品中生物碱含量测定

目的比较不同批次马钱子种仁生品及醋制品中生物碱含量,为马钱子醋制工艺的科学性提供一定参考依据。方法收集12批次的马钱子种仁,使用高效液相色谱法测定12批次马钱子种仁生品及其醋制品中士的宁及马钱子碱含量,比较炮制前后两种生物碱成分含量变化。结果12个批次马钱子种仁生品中士的宁含量为1.68%~2.11%,马钱子碱含量为0.99%~1.43%;经醋制后,12个批次马钱子种仁醋制品中士的宁含量为1.21%~1.48%,马钱子碱含量为0.65%~0.94%;两者比例分别降低21.47%~38.89%和27.35%~50.35%。结论马钱子种仁经醋制后士的宁和马钱子碱含量均显著降低,可能是马钱子炮制减毒的原理。

马钱子对三种软骨细胞凋亡模型的影响

目的:观察中药马钱子对三种软骨细胞凋亡模型的影响。方法:在兔软骨细胞培养体系中分别加入2mmol/L硝普钠(SNP)、2mmol/LSNP+马钱子、10-4mol/L全反式维甲酸(ATRA)、10-4mol/LATRA+马钱子;在人胚胎软骨细胞培养体系中加入30ng/L肿瘤坏死因子α(TNFα)、TNFα+马钱子,各组培养24h后,采用AnnexinV/PI双参数法对软骨细胞凋亡进行定量检测。结果:软骨细胞在加入SNP、ATRA、TNFα发生凋亡时,加入马钱子能降低SNP、ATRA诱导的软骨细胞凋亡率(P<0.01,P<0.05),但对TNFα诱导的软骨细胞凋亡,无明显抑制作用(P>0.05)。结论:中药马钱子对部分软骨细胞凋亡有一定抑制作用。

马钱子若干组分治疗实验性关节炎的比较研究

将马钱子提取物分离成 4部分 ,即马钱子粉 (A)、非生物碱 (B)、非士的宁生物碱 (C)、士的宁 (D) ,观察各部分对大鼠棉球肉芽增生及角叉菜胶引起足跖肿胀的影响。实验表明 :A和 C均明显抑制棉球肉芽的增生 ,给药后第 5 h明显抑制足跖肿胀 (P<0 .0 5 ) ,B和 D则几乎无作用。提示 A具有抗实验性关节炎作用 ,且有效部位为 C。

马钱子减毒总生物碱的制备及毒性

目的制备去除大部分士的宁的马钱子减毒总生物碱,并考察马钱子总生物碱减毒前后成分及毒性的变化。方法用不同体积分数的乙醇溶解马钱子总生物碱,经磁力搅拌、离心后制备得到马钱子减毒总生物碱,HPLC法测定马钱子减毒总生物碱中马钱子碱和士的宁的量。用Q-TOF-MS技术比较鉴定了马钱子总生物碱减毒前后的主要生物碱类成分。通过小鼠口服急性毒性试验考察了马钱子总生物碱减毒前后的毒性变化情况。结果以20%乙醇为溶剂制备的马钱子减毒总生物碱去士的宁效果最好,同时不影响其他19种生物碱类含有量。小鼠口服急性毒性LD50实验表明马钱子减毒总生物碱与马钱子总生物碱的LD50分别为31.08 mg/kg、10.92 mg/kg。结论马钱子总生物碱中士的宁占38.49%,减毒后仅占14%,减毒工艺提高了马钱子总生物碱临床使用的安全性。

Box-Behnken响应面法优化马钱子提取工艺

目的采用Box-Behnken实验设计优选马钱子生物碱的提取工艺。方法采用HPLC法测定马钱子碱及士的宁含有量,以马钱子碱及士的宁提取率的总评综合效应为指标,通过Box-Behnken试验考察液料比、提取时间、乙醇体积分数对提取工艺的影响,对结果进行二项式方程拟合,利用响应面法优化提取工艺并进行预测分析。结果最佳提取工艺为液料比14∶1,提取时间2 h,乙醇体积分数55%。验证结果表明,预测值与验证值偏差较小(<5%)。结论Box-Behnken响应面法用于优化马钱子的提取工艺是可行的,建立的数学模型和实验数据相符。

6种真菌发酵对马钱子降毒保效作用的初步研究

观察6种不同真菌发酵对马钱子毒性和镇痛、抗炎作用的影响。选择对马钱子药材适应性较强、菌丝生长旺盛的6种真菌菌种——裂褶菌、竹黄、单色云芝、鸡油菌、白僵菌和蝉花,在适生条件下对马钱子进行固态发酵,形成6种相应的马钱子发酵品——褶马菌质(SCSS)、竹马菌质(SBSS)、单马菌质(CUSS)、油马菌质(CCSS)、白马菌质(BBSS)和花马菌质(CGSS);以半数致死量(LD50)为指标,测定马钱子生品(RMSS)和炮制品(PSS)及6种不同发酵品经灌胃给药对小鼠的急性毒性;以双氯芬酸钠(DSE)和RMSS为阳性对照,观察6种不同发酵品对腹腔注射醋酸所致小鼠扭体反应的抑制(镇痛)作用以及对外涂巴豆油所致鼠耳壳肿胀的减轻(抗炎)作用。结果表明,马钱子通过6种真菌发酵后毒性降低,与炮制品基本一致;且它保持了马钱子原有的镇痛和抗炎作用,提示发酵可以为马钱子的降毒保效提供一条新途径。

基于UPLC-Q-TOF-MS法砂烫马钱子化学成分定性研究

目的应用超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)对砂烫马钱子提取物的主要化学成分进行定性研究。方法采用Agilent SB-C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.2 mL·min^(-1),柱温为35°C;质谱分析采用信息关联模式(IDA)正、负离子分别采集。结果共鉴定出砂烫马钱子提取物中24个化学成分,其中有8个为马钱子文献中首次报道,并在负离子模式下发现3个新化合物;主要成分包括生物碱、脂肪酸酯、糖苷、甾醇等。结论该方法精确、可靠、高效,适用于砂烫马钱子成分的快速鉴定,能为马钱子炮制品的开发利用以及阐明其药效物质基础提供参考。

烘法与砂烫法炮制马钱子的比较研究

目的考察应用烘法替代砂烫法炮制马钱子的可行性。方法分别采用烘法和砂烫法炮制马钱子。采用HPLC法测定炮制品中马钱子碱、士的宁和马钱子碱氮氧化物;采用酸性染料比色法测定总生物碱;应用HPLC指纹图谱技术进行聚类分析。结果两种炮制品中主要生物碱含有量、总生物碱含有量均没有显著性差异;根据聚类分析结果,烘烤条件为215℃,烘烤15 min,制品和砂烫制品属于一类。结论优选烘烤的条件为加热215℃烘烤15 min;烘法可以代替传统的砂烫法炮制马钱子。

马钱子组分对人HaCaT细胞毒性作用的比较

目的研究马钱子生物碱及其不同组分对人永生化表皮细胞系Ha Ca T细胞的毒性作用。方法体外培养Ha Ca T细胞,加入相同质量浓度的马钱子碱、士的宁、马钱子碱与士的宁的混合物,和马钱子总生物碱作用于细胞24 h后,采用MTT比色法测定不同生物碱的细胞增殖抑制作用;流式细胞仪检测对Ha Ca T细胞的凋亡,比较马钱子生物碱不同组分对Ha Ca T细胞的毒性作用。结果士的宁对Ha Ca T细胞的抑制率和细胞凋亡率大于马钱子碱;马钱子碱和士的宁混合物组对Ha Ca T细胞的抑制率和细胞凋亡率大于马钱子总生物碱。结论马钱子生物碱组分均对Ha Ca T细胞存在细胞毒作用,呈剂量依赖关系,但马钱子碱的细胞毒性明显小于士的宁。

响应面法优化超声辅助提取马钱子中生物碱的工艺研究

采用响应面法对超声波辅助提取马钱子中生物碱的工艺进行了优化,在单因素试验的基础上,选择提取溶剂中乙醇体积分数、超声功率、提取时间为随机因素,进行三因素三水平的Box-Behnken中心组合设计,采用响应面法(RSM)分析了3个因素对响应值的影响。结果表明,超声波法提取马钱子中生物碱的最佳工艺条件为:马钱子颗粒度为20～40目,溶剂中乙醇体积分数为32.3%,溶剂pH值为5,超声功率300W,提取时间为37min,液料比为10:1。在此条件下,士的宁、马钱子碱的提取量分别达到18.75、9.24mg/g,与理论预测值基本吻合,说明该优化方法可行。

HPLC法测定马钱子及其炮制品中士的宁和马钱子碱的含量

目的:用HPLC法对马钱子的江西炮制方法及其改良法炮制品中士的宁和马钱子碱含量进行测定。方法:色谱柱填料为硅胶,流动相为正己烷-二氯甲烷-甲醇-浓氨溶液(47.5:47.5:5:0.35),检测波长为254 nm。结果:江西法炮制品中士的宁和马钱子碱的含量较低。结论:该法精确、简便、重现性好。

马钱子总碱中2种成分的平衡溶解度、油水分配系数、体外透皮特性

目的考察马钱子Strychni Semen总碱中马钱子碱和士的宁的平衡溶解度、油水分配系数、体外透皮特性。方法饱和溶解法测定2种成分在乙醇(10%、20%、30%、60%、90%、无水乙醇)、三氯甲烷、正辛醇、表面活性剂(0.5%吐温、0.5%去氧胆酸钠、0.5%油酸)中的平衡溶解度;摇瓶法测定两者在PBS(pH 2.5、4.0、5.0、5.8、6.8、7.0、7.4、9.0)中的油水分配系数;改良Franz扩散池法评价其在PBS、20%乙醇、无水乙醇中的体外透皮特性。结果马钱子碱、士的宁均在三氯甲烷中的平衡溶解度最高,表面活性剂中最低;在体积分数大于20%的乙醇或pH小于8.0的PBS中,士的宁平衡溶解度高于马钱子碱,并分别在60%乙醇和pH 2.5 PBS中达到最高。2种成分油水分配系数相近,均随pH增加而升高,在pH9.0时最高。两者分别在无水乙醇、pH9.0 PBS中的累计透皮吸收率最高。结论溶剂种类对马钱子碱和士的宁的平衡溶解度、油水分配系数、透皮吸收均有明显影响。本研究可为马钱子总碱经皮给药生物利用度的改善及相关制剂的开发提供参考。

不同粒径马钱子粉中马钱子碱、士的宁的含量分析与比较

为考察粒径对马钱子粉中活性(毒性)成分含量的影响,制备了20～200目下的马钱子粉样品;采用扫描电子显微镜(SEM)观察各样品的微观形貌,利用薄层色谱法(TLC)对各样品进行定性鉴别并用高效液相色谱法(HPLC)测定各样品中马钱子碱、士的宁含量。结果表明:不同粒径下马钱子粉样品微观形态组成比例存在差异,而且马钱子碱、士的宁含量不同,马钱子碱(或士的宁)在部分样品中的含量存在显著性差异。因此在马钱子药粉入药时,应严格控制其粒径,结果显示宜将马钱子粉的粒径控制在100～200目之间。

马钱子药材HPLC指纹图谱的研究

目的建立马钱子药材的HPLC指纹图谱分析方法,为马钱子的质量控制提供新方法。方法以甲醇-水-浓盐酸(50∶50∶1)为提取溶剂,超声波震荡30min,制备马钱子药材样品溶液;采用RP-HPLC(DAD)法,选用Kro-masilKR100-5C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),体积流量1.0mL/min,检测波长254nm,流动相为乙腈(B)-0.2%三乙胺-0.2%乙酸水溶液(A),线性梯度洗脱:0min时8%∶92%,30min时17%∶83%,60min时60%∶40%。结果对10批马钱子药材进行测定,以士的宁为参照物,确定了马钱子药材指纹图谱中的12个共有峰;通过方法学考察,精密度、稳定性、重现性试验RSD均小于3%;采用相似度作为指纹图谱的评判参数,计算了不同批次与对照指纹图谱之间的相似度,均大于0.9,表明10批药材质量均一、稳定。结论该方法适用于马钱子药材的质量控制。

花仙子胶囊有关的急性毒性试验研究

为了探讨花仙子胶囊的毒性,进行了小鼠急性毒性实验、对药物主要组分急性毒性相互作用的观察,及小鼠的耐受性试验。结果表明,小鼠灌胃花仙子胶囊的LD50为1.51g/kg;且有一定的耐受性;洋金花与马钱子配伍,减低了马钱子的毒性。提示该配方对毒性有拮抗作用,为该药配方的合理性提供了实验依据。

正交设计法优选童便炮制马钱子的工艺

目的:优选童便炮制马钱子的工艺。方法:通过L_9(3~4)正交设计考察童便种类、童便用量、童便浸泡时间、烘干温度4个因素,以高效液相色谱法测定马钱子碱和士的宁含量作为考察指标,进行加权综合评分。采用方差分析对童便炮制马钱子工艺进行优选。结果:童便炮制马钱子的影响因素中浸泡时间的影响最明显,其余三因素对马钱子碱和士的宁含量无明显影响。最佳炮制工艺为A_1B_1C_3D_3。结论:童便炮制马钱子的最优工艺为选用3岁童便,3倍童便量,浸泡时间为10 d,烘干温度为90℃。本方法稳定,可靠,可用于马钱子的炮制新工艺。