Quantitative Determination of Adrenaline Hydrochloride Injection and Noradrenaline Bitartrate Injection by a New HPLC Method via Substitute for Reference Substance

An HPLC method for quantitative determination of adrenaline hydrochloride injection and noradrenaline bitartrate injection was established and validated with a substitute for the reference substance.Phenylephrine hydrochloride was selected as the substitute for the reference substance of adrenaline and noradrenaline bitartrate.The correction factor of phenylephrine hydrochloride with respect to the reference substance of adrenaline and noradrenaline bitartrate was determined under defined conditions.Adrenaline hydrochloride injection and noradrenaline bitartrate injection were quantified by assaying phenylephrine hydrochloride and a correct factor.The results indicate that the HPLC method with the substitute for reference substance was reliable and feasible for quantitative determination of drugs.

替代对照品法用于石杉碱甲片含量测定的研究

目的建立HPLC替代对照品测定石杉碱甲片含量的测定方法。方法在不同的条件下测定替代对照品西咪替丁对石杉碱甲对照品的校正因子,利用校正因子和替代对照品西咪替丁进行石杉碱甲片的含量测定。结果石杉碱甲和西咪替丁分别在2.5～160mg.L-1(r=1.0000)和0.1～20.0mg.L-1(r=1.0000)内与峰面积呈良好的线性关系(n=7),测得校正因子f=2.3624,用替代对照品测定方法测得回收率为97.0%(n=5),RSD=1.7%。结论本实验首次在高效液相色谱仪上使用替代对照品测定了石杉碱甲片含量,结果证明,用替代对照品进行药品质量控制是可行的、实用的。

替代对照品法用于丹参和复方丹参片含量测定的研究

目的:建立HPLC替代对照品法测定丹参和复方丹参片的含量。方法:选取对羟基苯甲酸甲酯作为丹参和复方丹参片含量测定对照品丹酚酸B的替代对照品,在不同的条件下测定替代对照品相对对照品的校正因子,利用校正因子和替代对照品对羟基苯甲酸甲酯进行丹参和复方丹参片中丹酚酸B的含量测定。结果:丹酚酸B和对羟基苯甲酸甲酯进样量分别在0.09～2.71μg(r=1.0000)和0.015～0.45μg(r=1.0000)内与峰面积呈良好的线性关系(n=7),测得校正因子f=5.2884,用替代对照品测定方法测得回收率为100.5%(n=9)。结论:本文首次在高效液相色谱仪上使用替代对照品测定了丹参和复方丹参片中丹酚酸B的含量,结果证明用替代对照品对于丹参和复方丹参片进行药品质量控制是可行的、实用的。

药品标准中替代对照品研究技术要求探讨

近年来,以标准物质为对照而建立的各种色谱技术在中药和天然药物分析方面有广泛的应用,但是对照物质的缺乏严重妨碍了中药及天然药物质量控制工作的顺利开展。研究并寻找适当的替代品是解决以上问题的有效途径之一。为了统一并规范药品标准中替代对照品的研究,本文对对照品替代法的应用情况及相关技术要求进行了探讨,以供开展此项研究工作参考。

替代对照品法测定淫羊藿中淫羊藿苷的含量

目的:建立HPLC替代对照品法测定淫羊藿中淫羊藿苷的含量。方法:选取芦丁作为淫羊藿中淫羊藿苷的替代对照品,在不同的条件下测定替代对照品相对对照品的校正因子,利用校正因子和替代对照品芦丁进行淫羊藿中淫羊藿苷的含量测定。结果:淫羊藿苷和芦丁进样量分别在0.13～3.20μg(r=0.999 6)和0.34～8.50μg(r=0.999 7)内与峰面积呈良好的线性关系(n=6),测得校正因子f=2.586 1,用替代对照品测定法测得回收率为96.01%(n=9),RSD=1.42%。结论:在高效液相色谱仪上用替代对照品测定淫羊藿中淫羊藿苷的含量是可行的、实用的。

替代对照品法同时测定前胡炮制品中主要香豆素成分

以白花前胡甲素为标准对照品,计算出白花前胡乙素和白花前胡E素的相对校正因子(f),建立HPLC替代对照品法含量测定方法同时测定前胡药材中白花前胡甲素、乙素和E素含量,并在此基础上考察不同前胡炮制品中主要香豆素类成分的含量变化,为前胡药材及炮制品质量标准的制定及其临床应用提供科学依据。采用Welch Materials Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长322 nm。该条件下测得前胡中白花前胡乙素和白花前胡E素相对于白花前胡甲素的相对校正因子分别为0.787 2和0.969 0,通过对15批药材进行含量测定,结果证明,替代对照品法与外标法测定的结果无明显差异,说明本研究建立的替代对照品法测定含量,方法准确可靠,可用于前胡及其不同炮制品中主要香豆素的含量测定。用该法测定各炮制品中香豆素总含量均低于生前胡。

替代对照品法测定复方甘草口服溶液中甘草苷和甘草酸含量

目的建立以橙皮苷为替代对照品测定复方甘草口服溶液中甘草苷和甘草酸含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法采用替代对照品法,以橙皮苷为替代对照品,测定甘草酸铵与橙皮苷、甘草苷与橙皮苷的相对校正因子,利用相对校正因子计算复方甘草口服溶液中甘草酸和甘草苷含量。色谱柱采用Welch Ultimate C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%三乙胺溶液(用磷酸调pH至2.5)-乙腈(梯度洗脱),检测波长分别为276 nm(甘草苷)、284 nm(橙皮苷)、252 nm(甘草酸铵),柱温为30℃,流速为1.0 m L/min。结果橙皮苷、甘草苷、甘草酸铵的进样量分别在0.033 2~0.498 3μg(r=0.999 5),0.049 3~0.740 2μg(r=0.999 2),0.443 0~6.495 1μg(r=0.999 3)范围内与峰面积线性关系良好;甘草苷和甘草酸铵与橙皮苷的相对校正因子分别为1.081 4和0.449 2;甘草苷和甘草酸的平均回收率分别为98.94%和99.19%(n=6)。结论该方法成本低,试验时间短,仪器噪音小,适用于测定复方甘草口服溶液中甘草苷和甘草酸含量。

替代对照品法测定复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量

目的:建立替代对照品测定复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量的方法。方法:以水杨酸为替代对照品,采用HPLC法,采用Welch Ultimate C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%三乙胺溶液(用磷酸调节pH值为2.3)(38:62)为流动相,在检测波长252 nm(甘草酸苷)/304 nm(水杨酸),柱温30℃的条件下,测定水杨酸与甘草酸苷的相对校正因子(f),利用相对校正因子(f)计算复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量。结果:水杨酸与甘草酸苷分别在35.23~352.32μg·mL-1(r=0.9999)和55.42~554.20μg·mL-1(r=1.0000)浓度范围内与峰面积有良好的线性关系;甘草酸苷的平均回收率为100.47%;水杨酸与甘草酸苷的相对校正因子(f)为1.7621。结论:以水杨酸作为替代对照品,用HPLC测定复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷的含量的方法经济、快速、可行,可作为复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量的测定方法。

替代对照品法测定甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量

目的建立以橙皮苷为替代对照品测定甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量的高效液相色谱法。方法采用替代对照品内加入法,以橙皮苷为替代对照品,通过测定甘草酸铵与橙皮苷、甘草苷与橙皮苷的相对校正因子(f值),利用f值计算甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量。色谱条件:Welch Ultimate C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%三乙胺溶液(用磷酸调pH值为2.5)为流动相,梯度洗脱,检测波长为284 nm(橙皮苷)、276 nm(甘草苷)、252 nm(甘草酸铵),柱温为30℃,流速为1.0 mL/min。结果橙皮苷、甘草苷、甘草酸铵进样量分别为0.0332~0.4983、0.0493~0.7402、0.4330~6.4951μg,与其峰面积具有良好的线性关系(r=0.9995、0.9992、0.9993);甘草苷和甘草酸铵与橙皮苷的f值分别为1.0814、0.4492;甘草苷和甘草酸的平均回收率分别为98.96%、97.67%。替代对照品法样品含量测定数据与外标法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论以橙皮苷为对照品,测定甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量的高效液相色谱法具有成本低、实验时间短、操作过程和仪器噪音影响小等特点。

加校正因子的替代对照品法测定注射用头孢硫脒聚合物

目的建立加校正因子的替代对照品法测定注射用头孢硫脒中的聚合物。方法以头孢噻吩作为替代对照品,以紫外吸光系数比值法确定校正因子,以AKTA Prime LC高分子杂质分析仪测定聚合物含量;色谱柱:Sephadex G-10柱(14.0 mm×400 mm);流动相A:pH 8.0的0.2 mol·L^(-1)磷酸盐缓冲液[0.2 mol·L^(-1)磷酸氢二钠溶液-0.2 mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液(61∶39)],流动相B:超纯水;检测波长:254 nm;流速:0.9 mL·min^(-1)。结果头孢噻吩对照品在50~1000 ng·mL^(-1)内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9991),校正因子为0.7804。结论本方法能较好分离头孢硫脒与其聚合物杂质,为加校正因子的替代对照品法在抗菌药物聚合物定量中的应用做了有益探索。

对照品替代法用于绿原酸含量测定的研究

目的建立对照品替代法测定中药饮片或中成药中绿原酸含量的方法。方法以对乙酰氨基酚为对照品替代,采用高效液相色谱法(HPLC),Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液,梯度洗脱,检测波长240 nm,流速1.0 ml/min,柱温30℃。利用相对斜率法测定对乙酰氨基酚与绿原酸的相对校正因子(f),计算供试品中绿原酸的含量。结果对乙酰氨基酚和绿原酸分别在5.36~107.19μg/ml(r=1.0000),5.13~102.60μg/ml(r=0.9999)浓度范围内线性关系良好;对照品替代法和外标法的平均回收率分别为98.33%,98.65%;RSD分别为1.34%,1.30%;相对校正因子f=0.5119;不同仪器及色谱柱、流速、柱温、不同测定波长对f值无显著影响;将两法的结果进行对比无显著性差异。结论以对乙酰氨基酚替代绿原酸作为对照品,采用HPLC测定绿原酸的含量进行质量控制是可行的,可用于含绿原酸成分的中药饮片及中成药的含量测定。

替代对照品法测定当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量

建立HPLC替代对照品法测定当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量。采用资生堂CAPCELL PAK C_(18)色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),以甲醇-乙腈-水(15∶35∶50)为流动相,柱温30℃,流速1.0 mL/min,丹皮酚的检测波长为274 nm,藁本内酯的检测波长为327 nm。以丹皮酚作为藁本内酯的替代对照品,在不同条件下测定相对校正因子,利用相对校正因子和替代对照品测定当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量。结果显示,藁本内酯和丹皮酚进样量分别在0.106 4~2.129 0μg(r=0.999 9)和0.063 6~2.544 4μg(r=0.999 9)范围内与峰面积呈良好的线性关系(n=7),测得相对校正因子f为1.978 5,不同条件下相对校正因子的重现性良好,通过相对校正因子f计算得到当归腹痛宁滴丸中藁本内酯含量与外标法实测值之间无明显差异。本方法经济、实用、快速、高效,可用于当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量测定和产品质量控制,同时可解决因对照品缺乏与不稳定而给含量测定带来的困难,极大降低了分析检测的成本。

中药标准物质替代测定法技术指导原则

中药标准物质替代测定法是符合中药特点的多指标质量控制的一种有效模式。为了指导该法的建立,统一并规范该法的研究及在国家药品标准中的应用,并证明采用的方法是否适合于相应的检测要求,探讨并提出本技术指导原则。本指导原则从该法的定义与分类、定量的原理与方法、色谱峰的定位与确认、技术要求四个方面进行论述。当中药指纹图谱(特征图谱)鉴别项或多指标含量测定项采用中药标准物质替代测定法时,按照本原则进行方法学验证研究。

对照提取物在中药整体质量控制中的应用

基于中医理论指导下的全面药效物质基础研究是中药质量标准体系构建的基石,对照提取物法为其提供了一种新的分析思路。本文综述了定性和定量对照提取物在中国药典2010年版、美国药典36版、欧洲药典8.0和日本药局方16版中的应用,提出了对照提取物的制备流程,分析了该方法在研究中存在的问题,并以大黄定性对照提取物和重楼总皂苷定量对照提取物为例,阐述了对照提取物在中药整体质量控制中的应用,为对照提取物法的后续研究及实现中药整体质量控制提供了有益的参考。

双标多测法Ⅰ-双标线性校正技术用于色谱峰的定性

目的:建立一种新的替代对照品模式的多指标含量测定技术——双标多测法,并应用于大黄及其制剂中5种蒽醌的分析。方法:在5台不同的高效液相色谱仪和14根不同品牌和型号的C18色谱柱上,测定大黄中5种游离蒽醌的峰面积和保留时间,再进行数据分析。定量方面,以芦荟大黄素为参照物,测得与大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的相对校正因子。定性方面,以芦荟大黄素和大黄素甲醚2个成分,使用双标线性校正法预测保留时间。结果:定量方面,相对校正因子可耐受柱温、流速和流动相比例在一定范围内的变动。定性方面,14根色谱柱的验证结果表明,双标线性校正法的预测效果明显优于相对保留时间法。结论:双标多测法在中药多指标含量测定方面有较好的实用价值和应用前景。

双标多测法Ⅲ—4种定性定量模式及紫外-可见光谱、质谱辅助定性

目的:以建立乳香中11-羰基-β-乙酰乳香酸(AKBA)和11-羰基-β-乳香酸(KBA)的含量测定法为例,探讨双标多测法的多种定性定量模式和色谱峰辅助定性方法。方法:使用HPLC-PDA色谱仪建立含量测定法,以AKBA为参照物考察不同检测波长、流动相比例和pH下KBA的相对斜率(相对校正因子的倒数)变异情况,考察在10根不同C18色谱柱上使用AKBA和乳香对照药材定性KBA的准确度。结果:含量测定方法的线性和回收率均良好。以AKBA为参照物,KBA的相对斜率平均值为0.920,且在不同条件下保持稳定。使用AKBA和乳香对照药材结合紫外光谱定性KBA色谱峰的准确度高。结论:建立的乳香双标多测法为乳香及含乳香制剂提供了一种有效且成本低廉的含量测定方法模式;4种不同的定性定量模式具有良好的实用性和可行性,扩展了双标多测法的适用范围。

替代对照品法测定连翘中连翘酯苷A和连翘苷的含量

目的:建立HPLC替代对照品法同时测量连翘中连翘酯苷A和连翘苷的含量。方法:选取连翘苷作为连翘含量测定对照品连翘酯苷A的替代对照品,在不同条件下测定替代对照品相对对照品的校正因子,利用校正因子和替代对照品连翘苷进行连翘中连翘酯苷A的含量测定。色谱条件:采用Agilent ZORBAX SB-C18(2)(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,以乙腈(A)-0.3%的醋酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱[0～5 min,A-B(15∶85)→A-B(17∶83);5～10 min,A-B(17∶83)→A-B(20∶80);10～15 min,A-B(20∶80)→A-B(23∶77);15～20 min,A-B(23∶77)→A-B(25∶75)],流速0.8 mL·min-1,柱温25℃,检测波长230 nm。结果:连翘酯苷A和连翘苷进样浓度分别在0.08～0.62 mg·mL-1(r=0.9995)和0.012～0.08 mg·mL-1(r=0.9995)内与峰面积呈良好的线性关系,测得校正因子f=0.4761,用替代对照测定方法测得回收率(n=6)为99.20%。结论:本法使用替代对照品法测定了连翘中连翘酯苷A的含量,结果证明了替代对照品法用于连翘药材质量控制可行、实用。

替代对照品法同时测定川芎中丁苯酞和藁本内酯的含量

目的:建立HPLC替代对照品法同时测定川芎中丁苯酞和藳本内酯。方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(52∶48)为流动相,流速1.0 mL.min-1,丁苯酞检测波长228 nm,藁本内酯检测波长330nm,柱温35℃。以丁苯酞作为藁本内酯的替代对照品,在不同条件下测定相对校正因子,利用相对校正因子和替代对照品同时测定川芎中丁苯酞和藁本内酯的含量。结果:丁苯酞和藁本内酯进样量分别在0.01～0.2μg(r=0.9999)和0.1～2.0μg(r=0.9999)范围内与峰面积呈良好的线性关系,测得相对校正因子f’为1.0806,不同条件下相对校正因子的重现性良好,利用相对校正因子计算川芎中待测成分含量与外标法实测值之间没有明显差异。结论:用丁苯酞替代藁本内酯作为对照品,同时测定川芎中丁苯酞及藁本内酯的含量,解决了藳本内酯对照品不稳定的难题,该方法可用于川芎的质量控制。

替代对照品法在中药多指标含量测定中的应用与技术要求探讨

本文分析和归纳了替代对照品法的国内外应用情况及研究中存在的问题,定量方面提出相对校正因子为物质百分吸光系数之比,并以此为基础分析了影响定量准确度的因素,认为波长和对照品为影响定量的关键因素;比较了相对保留时间法和对照提取物定性法等7种定性方法的优缺点;在方法实用性方面,提出色谱仪校正和色谱柱相似度评价等可能的研究方向;为该法的后续研究提供参考。

黄芪异黄酮对照提取物的制备及其在黄芪药材含量测定中的应用

目的：制备黄芪异黄酮对照提取物，探讨选择对照提取物替代单体成分对照品测定黄芪药材中异黄酮类成分的可行性。方法：提取、制备黄芪异黄酮对照提取物，并进行毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素4个异黄酮成分的定值；采用HPLC法测定黄芪药材中4个异黄酮成分的含量，使用色谱柱为PhenomenexC18（250mm×4．6mm，5μm），以乙腈-0.3％甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱（0～20min，10％A→30％A；20—25min，30％A；25—35min，30％A→60％A；35～45min。60％A→10％A）。流速1．0mL·min^-1，检测波长260nm，柱温25℃。结果：黄芪异黄酮提取物中4个主成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素浓度分别在4．93—394．4μg·mL^-1（r=0．9997）、2．68—214．4μg·mL^-1（r=0．9992）、3．09～247．2μg·mL^-1（r=0．9999）、1．53～122．4μg·mL^-1（r=0．9999）范围内与色谱峰面积值呈良好的线性关系；平均回收率（n=6）分别为100．0％、99．8％、99．6％、100．1％，RSD均小于2．0％。结论：黄芪异黄酮对照提取物可替代相应的对照品，用以同时测定黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素4个黄芪异黄酮成分的含量。