球孢白僵菌降解昆虫体壁蛋白酶基因CDEP-1的克隆与序列分析

构建了球孢白僵菌不同诱导时间的混合cDNA文库。根据丝氨酸类蛋白酶的保守区域设计引物 ,以构建cDNA文库同样的mRNA为模板 ,采用RT PCR法得到长度为 5 94bp的片段BbP。序列测定表明BbP是球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶Pr1的一部分。以BbP为探针 ,从上述cDNA文库筛选得到长度为 15 5 7bp的克隆CDEP 1。CDEP 1含有一个 1134bp的开放阅读框 (ORF) ,编码 377个氨基酸、分子量为 386 16、PI=8.30 2的蛋白酶前体。CEDP 1的核苷酸序列与蛋白酶K、金龟子绿僵菌Pr1、球孢白僵菌Pr1的同源性分别为 :5 7.9%、5 4 .7%、83.3%。根据cDNA序列扩增到CDEP 1的基因组序列 ,分析表明其中含有 3个内含子。Southern杂交表明CDEP 1在球孢白僵菌是单拷贝。