实时荧光定量PCR检测沙门菌flor基因和sul2基因方法的建立

目的建立一种fl or基因和sul2基因的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,为检测沙门菌的耐药性以及耐药基因分子流行病学调查奠定基础。方法以氟苯尼考、复方磺胺甲噁唑抗性的沙门菌菌株为材料,根据Gen Bank中登陆的沙门菌fl or和sul2基因序列,设计并合成引物,建立基于SYBR Green I染料技术的Real-Time PCR检测体系,绘制出标准曲线并对其溶解曲线进行分析。结果以pMD18-T为载体构建的标准品的Ct值与样品的浓度的对数在一定范围内呈现良好的线性关系,两基因的检测域值较小,fl or基因可以检测到102 copies/μL的样品,sul2基因可以检测到103 copies/μL的样品,经耐药性与基因表达量相关分析,耐药性较高的菌株其fl or基因、sul2基因表达量也较高。结论建立的检测沙门菌中fl or基因和sul2基因的荧光定量PCR方法具有很好的灵敏性、特异性和重复性,可以广泛用于临床中fl or和sul2两种基因的检测以及沙门菌耐药分子流行病学的调查。

嗜麦芽窄食单胞菌sul1、sul2基因与复方新诺明耐药关系

目的检测sul1与sul2基因在嗜麦芽窄食单胞菌中分布情况,并探讨其分布与耐复方新诺明的关系。方法利用K-B纸片法筛选嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明的耐药菌株,同时,用微量肉汤稀释法测定复方新诺明对耐药菌株最低抑菌浓度(MIC)、PCR法扩增全部菌株的sul1与sul2。结果102株嗜麦窄食单胞菌有8株表现为耐复方新诺明,耐药率7.8%,8株中有4株sul1阳性,1株合并sul2阳性,并表现为复方新诺明高MIC。结论嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明的高度耐药性可能与sul1与sul2的存在有关。

吉林省部分地区猪源大肠杆菌磺胺耐药基因Sul2的分布研究

对吉林省部分地区分离的20株猪源大肠杆菌进行药物敏感性检测的结果表明:20株猪源大肠杆菌对磺胺类药物均耐药;耐药菌株的质粒检出率达100%。应用Sul2基因的特异性引物,以检出的质粒为模板,均成功地扩增出特异性目的条带。随机抽取3株猪源大肠杆菌的目的片断,克隆、测序的结果表明:3株猪源大肠杆菌的质粒上均含有磺胺耐药Sul2基因,且基因序列与文献报道相一致。含Sul2基因的质粒在吉林省部分地区分离的20株猪源大肠杆菌中广泛存在,且在吉林省部分地区猪源大肠杆菌对磺胺类药物的耐药性方面起到较为重要的作用。

嗜麦芽寡养单胞菌sul1、sul2基因与复方新诺明耐药关系

目的检测sul1与sul2基因在嗜麦芽寡养单胞菌中的分布,并探讨其分布与耐复方新诺明的关系。方法利用K-B纸片法筛选嗜麦芽寡养单胞菌对复方新诺明的耐药菌株,同时耐药菌株用微量肉汤稀释法测定复方新诺明最低抑菌浓度(MIC),PCR法扩增全部细菌的sul1与sul2基因。结果102株嗜麦芽寡养单胞菌有8株表现为耐复方新诺明,耐药率7.8%,8株中有4株sul1阳性,1株合并sul2阳性,并表现为对复方新诺明高MIC。结论嗜麦芽寡养单胞菌对复方新诺明的高度耐药性可能与sul1与sul2的存在有关。

临床分离大肠杆菌磺胺敏感性及磺胺抗性相关基因的检测

对分离自中国东北牛(n=181)、猪(n=182)、鸡(n=146)和鹌鹑(n=55)的粪便及病变器官的564株大肠杆菌菌株进行磺胺敏感性与磺胺抗性基因检测。分别用肉汤微量稀释法和聚合酶链式反应检测磺胺敏感性和磺胺抗性基因。结果表明:在564株菌株中,235(41.7%)株对磺胺试剂敏感,329(58.3%)株对磺胺甲恶唑有抗性,190(33.7%)株对甲氧苄啶-磺胺甲恶唑有抗性;不同动物分离株的磺胺抗性比例不同,从牛、猪、鸡和鹌鹑中分离到的菌株int1基因的比例分别是12.2%、44.5%、40.4%、18.2%,sul1基因比例分别是5.5%、37.4%、28.1%、3.6%,sul2基因比例分别是39.2%、25.3%、29.5%、10.9%,但在牛、鸡、鹌鹑源菌株中未检测到sul3基因,在182株猪源大肠杆菌中检测到13株(7.1%)sul3基因阳性菌株。菌株的磺胺抗性与其包含的抗性基因之间不完全吻合。

耐复方新诺明嗜麦芽窄食单胞菌耐药基因检测及同源性分析

目的探讨嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株耐复方新诺明的耐药机制及同源性。方法 2013年1月至2013年12月共分离获得126株嗜麦芽窄食单胞菌,药敏试验采用K-B法。PCR法检测sul1、sul2、ISCR2、I类整合子。并对I类整合子PCR扩增阳性产物进行测序分析,确定基因型,ERIC-PCR对其同源性进行分析。结果嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明的耐药率为17.4%。22株耐药菌有16株sul1阳性,15株I类整合子阳性;未发现sul2、ISCR2阳性株。22株耐药株分为21个基因型。结论本院嗜麦芽窄食单胞菌耐复方新诺明与sul1和I类整合子高度相关,与sul2、ISCR2无关,耐药菌株之间无遗传相关性。

嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明耐药的机制研究

目的：检测 I类整合酶基因（intI 1）及 qacE△1-sul1和 sul2基因在耐复方新诺明的嗜麦芽窄食单胞菌中的分布情况，并探讨基因分布与细菌耐药性的关系。方法收集临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌，煮沸法提取总 DNA，采用 PCR法检测 intI 1，qacE△1-sul1和 sul2基因在复方新诺明敏感菌株和耐药菌株中的分布情况。结果28株耐复方新诺明嗜麦芽窄食单胞菌中有25株检出 I类整合酶基因，检出率为89.29％；21株检出 qacE△1-sul1基因，检出率为75％；15株检出sul2基因，检出率为53.57％；18株复方新诺明敏感的嗜麦芽窄食单胞菌中有5株检出 I 类整合酶基因，检出率为27.78％，4株检出 qacE△1-sul1基因，检出率为22.22％，均未检出 sul2基因。结论耐复方新诺明嗜麦芽窄食单胞菌大部分携带有 intI 1，qacE△1-sul1和 sul2基因，嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明的耐药性与 intI 1，qacE△1-sul1和 sul2的存在有关。

鸭源多杀性巴氏杆菌对磺胺类药物的耐药性检测及耐药基因分析

为明确鸭源多杀性巴氏杆菌对磺胺类药物的耐药性及耐药基因的分布特征,试验采用琼脂二倍稀释法对分离自福建、广东和江西等地的89株鸭源多杀性巴氏杆菌进行甲氧苄啶/磺胺甲噁唑的耐受性检测,用PCR法检测各耐药菌株的磺胺类耐药基因(sul1、sul2和sul3),并利用多位点序列分型(MLST)分析耐药菌株间的亲缘关系。结果显示,33株鸭源多杀性巴氏杆菌对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐受,耐药率为37.1%(33/89);在耐药菌株中,sul1、sul2和sul3基因检出率分别为100%(33/33)、97.0%(32/33)和21.2%(7/33),其中sul1和sul2基因同时检出率为97.0%(32/33),sul1、sul2和sul3基因同时检出率为21.2%(7/33);所有耐药菌株均属于ST129型。以上结果表明,鸭源多杀性巴氏杆菌对磺胺类药物具有一定的耐药性,其中的耐药菌株都属于同一序列型ST129,均携带有sul1耐药基因,且绝大多数耐药菌株同时携带sul1与sul2两种耐药基因,提示在福建、广东和江西等地需慎用磺胺类药物来防治该细菌的感染。

气候变化条件下东北森林主要建群种的空间分布

全球气候模型HADCM2SUL和CGCM1分别预测100a后全球年均温增加3.7℃和5.2℃,年降水增加30.7%和25.1%。为了研究东北森林对这两种预测方案的反应,使用logistic回归模型分析了东北森林8个建群种与11种环境因子之间的相关关系。结果表明,除了山杨和蒙古栎之外,年均温是决定其它树种存在与否的重要因子。采用模型结果预测现行气候条件下8个树种的分布并与其现实分布比较,发现针叶树种的总正确率、敏感度、指定度和错误肯定率均比阔叶树种的要高,而错误否定率比后者低,说明模型对针叶树种的拟合程度要优于对阔叶树种的拟合程度。在此基础上,预测了8个树种在两种气候变化方案下100a后的分布图。结果表明,在HADCM2SUL方案下,兴安落叶松、白桦、冷杉和云杉的覆盖率分别下降91.2%、67.4%、11.9%、10%;长白落叶松、红松和蒙古栎的覆盖率分别增长87.8%5、4.6%、31.3%;在CGCM1方案下,兴安落叶松、白桦、云杉、冷杉和红松的覆盖率分别下降99.2%8、9.9%、85.9%、83.2%、4.9%;长白落叶松、蒙古栎的覆盖率分别增长93.3%、27.5%;山杨在这两种方案下数量不变。