嵌合体真核表达质粒pVAX1-SPG的构建及表达研究

目的:构建含变异链球菌表面蛋白Spa P的P区编码基因spap-P和葡聚糖结合蛋白Gbp A的葡聚糖结合区编码基因gbd的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并观察其在哺乳动物细胞293T中的表达。方法:通过基因工程技术构建嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并采用脂质体转染法将其转染至293T细胞中;然后分别采用免疫组化SABC法和Western-blot检测嵌合蛋白Spa P/P-GBD在真核细胞中的表达。结果:重组真核表达质粒p VAX1-SPG经酶切、测序鉴定证实,其所携带的外源基因片段为2.4 kb的目的基因片段,序列同源性为99%;免疫组化染色结果显示,经p VAX1-SPG转染的293T细胞胞质呈棕褐色染色;Western-blot检测结果显示,分子量为72 k Da的嵌合蛋白Spa P/P-GBD能够被正确表达。结论:构建成功的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG能在真核细胞293T中正确表达目的蛋白。