真菌诱导子对白术悬浮细胞生长与次生代谢的影响

为探讨不同真菌诱导子对白术悬浮细胞生长和次生代谢的影响,于无菌状态下培养白术无菌苗,诱导愈伤组织,并构建悬浮细胞培养体系,记录悬浮细胞干质量,绘制生长曲线,添加不同内生真菌诱导子溶液后共培养,用高效液相色谱法测定悬浮细胞中白术内酯Ⅰ、白术内脂Ⅲ与苍术酮含量。结果表明,MS+6-BA(6-苄氨基嘌呤)1.0 mg/L+NAA(1-萘乙酸)0.5 mg/L是白术愈伤组织诱导的最适培养基,MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L是悬浮细胞增殖的最适培养基;白术悬浮细胞生长呈现S形曲线生长特征,对数生长期培养体系pH值稳定在4.8~5.0;真菌诱导子显著影响悬浮细胞生长与次生代谢,其中AM478真菌诱导子和AM393真菌诱导子对悬浮细胞生长具有显著促进作用,AM569真菌诱导子对白术内酯Ⅲ与苍术酮积累具有显著促进作用。综上,筛选得到的AM569菌诱导子可作为白术悬浮细胞生物转化的备选诱导子,以促进白术有效成分积累。

辐照西洋参培养物皂苷次生代谢调控的研究

研究了不同前体、前体浓度、前体加入时期、前体作用时间、ATP浓度、烟酸浓度对西洋参芽胞愈伤组织生长及皂苷合成的影响。结果表明 :0 1 %甲羟戊酸对生长有抑制作用 ,对皂苷合成有明显的促进作用 ;1 0 0mg L亮氨酸对生长无明显影响 ,对皂苷合成有促进作用 ;444mg L的醋酸镁对培养物生长和皂苷合成都有促进作用 ;在继代开始时加入前体皂苷含量最高 ;甲羟戊酸作用 6h皂苷产量最高 ;1 60mg LATP对生长和皂苷合成均有促进作用 ;1 0mg L烟酸利于培养物生长和皂苷合成 ;用6 0 Coγ射线辐照培养物 ,剂量为 40 0 0Gy时得到皂苷含量高于原愈伤组织 1倍的细胞系。

油樟悬浮培养及次生代谢产物的诱导

以油樟(Cinnamomum longepaniculatum)叶片为外植体在附加6-BA和NAA不同激素浓度组合的MS培养基上筛选质地疏松、生长旺盛的愈伤组织,分别接种在MS、B5、WPM三种液体培养基中进行细胞悬浮培养,并检测诱导产生的次生代谢产物。结果表明:2mg.L-16-BA+0.5mg.L-1NAA能诱导质地疏松、生长旺盛的愈伤组织,B5基本培养基中细胞长势最好;愈伤组织在B5+2mg.L-16-BA+0.5mg.L-1NAA中悬浮培养,继代2次后形成均一的单细胞;从油樟悬浮培养物中检测出50%以上的成分是苯甲醇。

人参属植物的悬浮培养及次生代谢调控的研究进展

通过对国内外人参属药用植物的悬浮培养及次生代谢调控研究的总结分析,结果表明:(1)2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和萘乙酸(NAA)对悬浮细胞的诱导有促进作用,多胺(PA)和赤霉素(GA3)是体细胞胚诱导的关键,Rhizobium rhizogenes KCTC 2744质粒能诱导人参愈伤组织产生毛状根;(2)茉莉酸及其衍生物能激发原人参二醇型皂苷合成酶的信号传导从而促进悬浮培养物中人参皂苷的产生和积累,PA也促进人参悬浮培养物中皂苷含量的提高;(3)适度的氧(O2)、二氧化碳(CO2)和乙烯能调节培养物相关酶的活性,对其生长和次生代谢物的积累有促进作用;(4)一定浓度的铜和有机锗对人参皂苷的积累有促进作用,充足的氮有利于培养物的增长,相对较少的碳元素有利于皂苷的积累。依据上述研究结果,提出了人参属药用植物悬浮培养未来研究方向。

连翘悬浮细胞系的建立及不同理化因子对细胞生长和次生产物积累的影响

在MS培养基中建立了连翘细胞悬浮培养,并研究了接种量、碳源、渗透胁迫及丙酮酸钠的影响.结果表明,接种量为90 g·FW·L^(-1)左右对连翘悬浮细胞生长和连翘甙合成有利,细胞的生长周期为18 d.碳源以蔗糖最合适,蔗糖浓度为30 g·L^(-1).渗透胁迫条件下以补加蔗糖和甘露醇最佳,细胞生长量和连翘甙的积累分别比对照增加了33.3%和89.9%.培养过程中添加20 mL 5 mmol·L^(-1)的丙酮酸钠对细胞生长和连翘甙的积累有促进作用.

氮源和磷源对金铁锁毛状根悬浮培养的影响

以生物量和总皂苷两个参数为指标,研究了氮源(NH+4,NO-3)与磷源(PO3-4)浓度对金铁锁毛状根悬浮培养过程中的影响。培养基中NH+4与NO-3的浓度比为1∶2时,毛状根生物量和总皂苷的收获量都达到最高值,PO3-4的浓度在6.25mmol/L时具有同样的效果;毛状根对培养液中NO-3和PO3-4吸收利用与其生长周期基本一致,它们的含量在20d左右下降到最低;综合考虑,氮源和磷源的最佳组合为NH+410mmol/L,NO-320mmol/L,PO3-46.25mmol/L。