Analysis of Expressed Sequence Tags from Liver Tissue in Swine

In order to study the expression of function gene and its effect on metabolic control and other physiological function in liver, 438 expressed sequence tags (ESTs) were determined, which were from a cD-NA library of porcine liver tissue. The results showed that the nucleotide sequences of 186 ESTs have already presented in GenBank database, and 37 ESTs could be found the homology with human and other species, while the others were not identified. 45 full length insertion of the clones randomly isolated from cDNA library were also completely sequenced with different size, and the results showed that 19 of them were function-known genes, 11 had no open reading frame ( ORF )at all and 15 had ORF but the function were not elucidated yet.

双光纤Nd:YAG激光消融新鲜离体猪肝

目的观察以双光纤Nd:YAG激光消融(LA)新鲜离体猪肝的价值。方法将45件新鲜离体猪肝随机分为15组,每组3件;分别以不同消融功率(4、5、6 W)和作用时间(1、2、3、4、5 min)组合行双针双点LA,观察各组消融灶大小和温度,分析以双光纤Nd:YAG激光对猪肝行LA的价值。结果消融时间设为1 min时,消融灶横径(TD)随功率增加而增大(P均<0.05);消融时间为1、5 min时,消融灶纵径(LD)及体积(V)均随功率增加而增大(P均<0.05)。不同功率下,消融灶TD、LD及V均基本随消融时间增加而增大,消融灶温度则随消融时间增加而升高;不同消融时间下,消融灶温度基本随消融功率增加而升高。结论双光纤Nd:YAG用于激光消融新鲜离体猪肝升温迅速且消融范围稳定。

实验性急性非洲猪瘟肝组织损伤及相关机制的研究

为探讨非洲猪瘟病毒(ASFV)对肝的组织损伤及其病理机制,本试验人工接种ASFV(Pig/HLJ/18毒株,剂量为210 HAD50/mL),复制急性非洲猪瘟病例,观察13头死亡猪肝脏的剖检变化和组织学变化,采用原位PCR方法,对肝内ASFV病毒VP73蛋白进行定位,以免疫组织化学方法对肝组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ和凋亡因子Bax、Bcl-2的表达进行检测。结果表明,ASFV可对肝的组织结构造成明显损伤,随病程的延长病变逐渐加重,剖检见肝脏淤血、出血,灰白色花斑状炎症灶,胆囊水肿,充血出血。组织学病变以出血和病毒性肝炎为主,肝细胞水肿、坏死和凋亡,淋巴细胞浸润;ASFV主要分布于肝窦、肝小叶汇管区、小叶间质的巨噬细胞;TNF-α、IL-1β、IFN-γ主要在巨噬细胞、肝细胞、血管内皮细胞和少量淋巴细胞中呈阳性表达,其表达强度随损伤程度加重而显著升高(P<0.01);Bax表达升高(P<0.01)的同时Bcl-2表达下降(P<0.01),诱导了细胞凋亡发生。本研究结果提示ASFV通过对肝内单核-巨噬细胞系统的破坏,诱导炎症因子大量释放并激活炎症级联反应,从而造成严重的肝组织损伤。

微血流成像诊断猪闭合性肝创伤

目的观察微血流成像(MFI)诊断猪闭合性肝创伤的价值。方法采用自制撞击器对全麻状态下的15只健康猪撞击其肝脏部位建立闭合性肝创伤猪模型;之后分别以常规超声、MFI及超声造影(CEUS)观察撞击后肝脏损伤部位、范围及程度;最后处死动物并取出肝脏,根据所见评估MFI诊断猪闭合性肝创伤的效能。结果大体病理显示,撞击共对15只猪造成29处肝创伤。常规超声、MFI及CEUS诊断猪闭合性肝创伤的准确率分别为37.93%(11/29)、82.76%(24/29)及96.55%(28/29),常规超声与MFI及CEUS差异均有统计学意义(P均<0.05),而MFI与CEUS差异无统计学意义(P>0.05)。MFI于多数猪肝创伤处未见明显血流信号,于1只创伤处显示“泉涌状”、5只显示散在血流信号。CEUS中,15只猪肝创伤处均表现为低或无灌注区,1只损伤处造影剂呈“喷射状”、5只呈“泉涌状”自肝脏损伤部位溢出并于肝周或腹腔内形成液性暗区。结论MFI对诊断猪闭合性肝损伤具有一定价值,可与CEUS相媲美。

高效液相色谱法快速检测猪组织中泰妙菌素残留

应用高效液相色谱法测定猪组织中泰妙菌素残留。试样经磷酸盐缓冲液(pH8.0)-乙酸乙酯混合提取,离心后加0.1%酒石酸,40℃旋转蒸发,除尽有机相,加正已烷除脂,HLB柱净化后,氮气吹干,0.0125%甲酸溶解后HPLC检测。流动相为乙腈-0.0125%甲酸(42∶58,V/V)。紫外检测波长为210 nm。对猪肉(猪肝)进行15(25)～500μg/kg的药物添加回收实验,结果表明,泰妙菌素的平均回收率为80.1%～92.7%;日内相对标准偏差为2.0%～10.2%;日间相对标准偏差为5.9%～13.9%。按信噪比S/N=3计算,猪肉和猪肝中泰妙菌素的检出限(LOD)分别为4.5和7.5μg/kg。

优化射频消融术参数设置的离体猪肝实验研究

背景与目的:经皮射频消融术作为一种微创治疗手段,目前广泛应用于肝癌的治疗中。最初的射频技术只能在离体猪肝上取得1.4～1.6cm的消融直径,今经过多方面的改进,射频消融范围明显增大。射频消融范围是否足够、能否完全包围整个肿瘤是治疗成败的关键。本实验通过优化射频工作方式的研究,探讨能增大单针射频消融范围,同时能减少射频进针次数,从而降低针道转移机会,并提高小肝癌射频消融疗效的方法。方法:第一步采用方式A(起始功率为10W,每分钟步升10W)、B(起始功率为50W,每分钟步升10W)和C(起始功率为90W,持续至功率自动下降至10W),对经加工后的共22例离体圆柱形正常猪肝进行消融;第二步采用射频工作方式A,调整针尖到电极板距离分别为3、8和13cm,对22例离体圆柱形正常猪肝进行消融。比较各种参数设置下消融灶的特征(消融灶平衡径、垂直径、类圆率、消融体积、能量输出和消融时间等)。结果:采用方式A进行消融所得消融灶大小平均为2.5cm×2.7cm,比采用方式B和C进行消融时大(方式B、C的消融灶大小分别为1.6cm×1.8cm和2.0cm×1.5cm)。方式A的消融体积是10.0cm3,明显大于方式B和C(分别是3.1cm3和2.1cm3),而消融时间也明显延长(分别是281.9、79.4和61.4s),而且采用方式A消融时所得病灶比方式C更接近圆球形。消?

免疫亲和色谱-气相色谱/质谱法(IAC-GC/MS)检测猪肝中的沙丁胺醇与克伦特罗

制备出抗沙丁胺醇的抗血清,提取、纯化IgG制备免疫亲和色谱柱,针对沙丁胺醇与克伦特罗的动态柱容量分别为400 ng/mL基质和416 ng/mL基质。猪肝样品匀浆后用稀盐酸提取,经免疫亲和色谱柱纯化,再用GC/MS检测,即为IAC-GC/MS法。对沙丁胺醇的检测限为0.5 ng/g,定量限为2 ng/g,对克伦特罗的检测限为0.8ng/g,定量限为2.5 ng/g。空白组织按照1、5、10、20 ng/g的浓度添加药物,沙丁胺醇在空白肝中的添加回收率为78.4%-106.9%,克伦特罗的添加回收率为77.1%-102.9%。本研究建立的检测猪肝中沙丁胺醇与克伦特罗的IAC-GC/MS法乃国内首次报道。

肝源性磷脂酰胆碱的分离纯化及其对肝癌细胞抑制作用的评价

采用氧化铝柱色谱法以95%乙醇作为洗脱剂分离纯化了肝源性磷脂酰胆碱(PC),并采用GF254硅胶板薄层色谱法以氯仿-甲醇-水(65∶25∶4,体积比)为展开剂测定了PC的纯度。结果表明以95%乙醇洗脱氧化铝色谱柱中的磷脂时,PC可完全与磷脂酰乙醇胺分离,其纯度和得率均高于80%。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定了不同浓度的PC对大鼠肝癌CBRH-7919细胞增殖的影响,并与人白血病K562细胞做比较,发现肝源性PC对肝癌细胞的生长具有明显的抑制作用,且存在时间-剂量依赖关系。

猪肝和猪尿中沙丁胺醇和克伦特罗残留的酶联免疫吸附检测法研究

采用混合酸酐法将沙丁胺醇与牛血清白蛋白偶联,并免疫家兔制备抗沙丁胺醇抗血清。以间接ELISA法测定血清效价,测得抗血清最佳工作浓度为1∶6400,该抗沙丁胺醇抗血清对克伦特罗有110%的交叉反应性。建立了能够同时检测SAL和CL的间接竞争ELISA方法,该方法对沙丁胺醇的检测范围为0148ng/mL～8.0μg/mL,对克伦特罗的检测范围为0143ng/mL～7.3μg/mL,对沙丁胺醇的检测灵敏度为0148ng/mL,对克伦特罗的检测灵敏度为0143ng/mL。在猪肝和猪尿中添加1～50ng/g(ng/mL)的沙丁胺醇,添加回收率为72.2%～8418%,变异系数为4.2%～28.3%,在猪肝脏和猪尿中添加1～50ng/g(ng/mL)的克伦特罗,添加回收率为8413%～103.4%,变异系数为013%～35.5%。

猪肝脏组织表达序列标签(ESTs)的初步分析

构建了猪肝脏组织cDNA文库 ,并对文库中随机挑选的 4 38个克隆的表达序列标签 (ESTs)进行了研究。结果表明 ,在所研究的 4 38个ESTs中 ,186个在猪种中已有匹配序列 ,37个在人类及其它物种中可以找到同源序列 ,2 15个为未知功能基因。试验还测定了文库中 4 5个cDNA克隆的全长插入序列 ,结果表明 ,19个为已知功能基因 ,11个没有发现开放阅读框 ,其它 15个具有开放阅读框 ,但基因的功能未知。这些结果初步代表了肝脏组织的功能基因表达谱。

超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法同时测定猪肝中非甾体类抗炎药残留

采用超高效液相色谱-四极杆串联质谱仪(UPLC-MS/MS)同时测定了猪肝中18种非甾体类抗炎药(NSAIDs)的残留量。对NSAIDs多残留同时提取、净化技术进行了研究,对UPLC-MS/MS检测参数进行了优化。均质后的猪肝样品采用酸化乙腈提取,正己烷液-液分配(LLP)脱脂,经硅胶固相萃取(SPE)柱净化后,采用UPLC-MS/MS电喷雾电离(ESI),多反应监测(MRM)模式检测,以保留时间和子离子比定性,外标法定量。方法检出限(LOD)为0.2～10μg/kg;定量限(LOQ)为1.0～50μg/kg。在添加浓度在1.0～200μg/kg范围内,NSAIDs的回收率在53.8%～92.7%之间,相对标准偏差(RSD)小于10.3%。方法操作简便,对动物肌肉、内脏、鸡蛋及牛奶中NSAIDs残留的检测具有普遍适用性。

同位素稀释高效液相色谱串联质谱法测定猪肝中地塞米松和倍他米松残留量

建立了同位素稀释高效液相色谱串联质谱法测定猪肝中地塞米松和倍他米松残留量的分析方法。样品经酶解后用乙腈提取,再经C18固相萃取和碳酸钠溶液液液萃取净化,净化后的样品经氮气吹干后用流动相溶解。采用Hypercarb C18柱,以乙腈-水-甲酸(95∶5∶0.5,V/V)混合溶液为流动相,进行高效液相色谱串联质谱分析,同位素内标法定量分析。地塞米松和倍他米松的检出限为别为0.12和0.14μg/kg,定量限分别为0.42和0.47μg/kg。在添加浓度0.75～2.0μg/kg范围内,平均添加回收率为97.3%～111%,批内和批间相对标准偏差(RSD)分别为1.85%～5.65%和2.78%～7.98%。待测物定量离子对峰面积与内标物峰面积比值与标样浓度在10～500μg/L范围内呈良好的线性关系,线性回归系数大于0.9997。

肝源性磷脂酰乙醇胺的分离及其诱导肝癌细胞凋亡的研究

采用氧化铝柱色谱法以95%乙醇-氯仿为洗脱剂分离纯化了肝源性磷脂酰乙醇胺(PE),并采用GF254硅胶板薄层色谱法以氯仿-甲醇-水(65:25:4,体积比)为展开剂检测PE。结果表明,以95%乙醇-氯仿顺序洗脱氧化铝色谱柱中的磷脂时,PE与磷脂酰胆碱(PC)可实现完全分离。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定了在不同时间点25μmol/LPE对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,并与子宫颈癌细胞Hela、正常人肝细胞HL7702做比较,发现肝源性PE对肝癌细胞的生长具有明显的抑制作用,且能诱导其发生凋亡。

超高效液相色谱―串联质谱法检测猪肝中乙酰异戊酰泰乐菌素残留

本研究建立了猪肝中乙酰异戊酰泰乐菌素残留的超高效液相色谱―串联质谱检测方法(UPLC-MS/MS)。样品经EDTA-McIlvaine’s缓冲液提取,HLB固相萃取柱净化后,采用C18色谱柱分离,以乙腈―0.1%甲酸(7∶3,V/V)为流动相洗脱,电喷雾正离子模式电离,选择离子监测模式检测。结果表明,药物浓度与峰面积在5～2000ng/mL范围内呈现良好的线性关系,相关系数大于0.99,对空白猪肝组织进行5～500μg/kg的药物添加回收试验,经统计分析获得平均回收率约为84.9%～88.1%,批内变异系数为8.2%～15.1%,批间变异系数为14.7%～16.5%。本方法对乙酰异戊酰泰乐菌素的检测限为0.76μg/kg,定量限为2.51μg/kg,方法灵敏、准确,适用于猪肝脏中乙酰异戊酰泰乐菌素残留的检测。

薄层扫描法测定猪肝中克伦特罗残留量

采用薄层扫描法测定猪肝中克伦特罗残留量,用GF254板作载体,乙酸乙酯-甲醇-醋酸(8:l:0.8)为展开剂,克伦特罗的Rf值为0.8l。线性范围0.004～0.050μg,回收率为86.5%～94.9%,RSD为5.0%～5.8%(n=6)。

活体猪肝第一,二肝门区的单极灌注式射频消融的安全性观察

背景与目的:肿瘤在累及肝门区域时,外科切除的难度大,肿瘤易复发。射频消融作为一种成熟的方法在累及肝门区肿瘤治疗中是否具有更大优势,是临床关注的问题。本实验观察单极射频消融时间与消融范围的相关性;对第一和第二肝门区组织消融处理,了解消融对血管及胆管系统的影响及其病理改变。方法:选用健康家猪6只,体重(47.0±2.5)kg/只。常规麻醉,开腹,在每一肝脏实质内共确定3个位点进行射频消融,射频消融基础功率设定为60W,时间分别为3min、5min、10min。对第二肝门的部位和第一肝门的位置分别进行5min和10min射频消融处理,然后关闭腹部伤口,继续饲养7～10天,将猪放血处死,完整取出肝脏。结果:大体标本上不同时间产生的结果为组织消融范围不同,均呈椭圆型。3min、5min、10min消融时间产生坏死区长径分别为(2.7±0.2)cm、(4.6±1.1)cm、(5.8±0.7)cm;在大体标本上第一和第二肝门区消融坏死范围宽径分别为(3.2±1.1)cm、(3.3±0.4)cm,第一肝门区和第二肝门区血管壁、胆管系统未见有明确破坏,病理结果显示血管壁和胆管壁有炎症细胞浸润。第二肝门区消融,病理结果显示:5只邻近血管壁的消融区域完全坏死,1只显示在邻近血管壁正常肝组织中合并有大片状坏死。第一肝门区消融结果,病理分析消融中心部位肝组织完全坏死,4只邻近血管壁的消融区域完全坏死,2只显示在邻近血管壁正常肝组织中合并有大片状坏死。结论:射频消融时间影响消融组织的坏死范围。消融对门静脉、肝动脉、肝门区胆管系统影响较少,在肝门区组织中实行消融是安全的。

植入式射频毁损活体猪肝实验研究

目的探讨植入式射频毁损活体肝组织的优化工作方式,了解射频毁损肝组织的病理特征.方法应用 RF2000型射频治疗仪及 LeVeen 电极针,术中对5只实验猪肝脏分别进行了30,50,70及90W,递升式单相(50W起始,每分钟升10W～90W)、递升式双相(单相毁损完成30s以70W 继续毁损)几种方式毁损,观察肝毁损灶的范围、形状、温度、术中可能的并发症及 HE.染色和 NADH 肝细胞活力染色即刻评定肝细胞坏死程度.结果射频毁损中央区为均匀一致彻底的球形凝固性坏死,外围为大约2 mm 的出血带,尚存部分活力;以递升式双相毁损产生的毁损灶较大,可达4.0 cm×3.5 cm×3.5 cm,毁损灶中心温度可达132℃.以90W 毁损产生的坏死灶较小约1.5 cm×1.5 cm×1.0cm;以30W 毁损阻抗始终不上升,但中心温度仍达60℃,产生的毁损灶约0.7 cm×0.5 cm×0.5 cm.术中可见自限性腹腔出血、膈肌或胃灼伤.结论植入式射频以递升式双相毁损方式可有效、理想地毁损肝组织,值得推广应用.

猪腹部火器伤肠管穿透后肝脏功能和形态的变化

目的:观察腹部火器伤肠管穿透后肝脏功能和形态的变化。方法:健康长白仔猪42头随机分为对照组以及伤后1h、2h、4h、8h、12h和24h组,实验组建立腹部火器伤肠管穿透模型后,分别测定伤后1h、2h、4h、8h、12h和24h各组动物血清中ALT、AST水平,并与对照组比较,观察实验组各时间点肝脏组织学变化。结果:伤后各组血清ALT、AST水平均高于对照组,并于伤后2h和12h出现2个高峰。伤后1h、2h、4h组出现逐渐加重的肝细胞水肿、变性,伤后8h、12h、24h组出现逐渐加重的肝细胞点状坏死、灶状坏死、炎细胞浸润。对照组光镜下未见明显的损伤性变化。结论:腹部火器伤肠管穿透导致肝脏出现功能和形态的损伤性变化,随着伤后时间的延长而加重。

反相高效液相色谱法分离肝源性磷脂酰胆碱分子种

建立了反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分离肝源性磷脂酰胆碱(PC)分子种的有效方法。考察了流动相中有机溶剂的种类、配比及流速对分离肝源性PC的影响。研究发现,在以甲醇为主的流动相中加入正己烷和醋酸铵有利于肝源性PC分子种的分离;甲醇-乙腈-水梯度洗脱不适于分离肝源性PC分子种。结果表明,采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm),以甲醇-正己烷-0.05 mol/L醋酸铵-甘油(84∶6∶8∶0.6,体积比)为流动相,在流速1.0 mL/min、检测波长206 nm、柱温35℃的条件下,实现了肝源性PC各组分的分离。所建立的方法灵敏,重复性高,为进一步采用液质联用技术研究肝源性PC不同分子种的结构奠定基础。

八眉猪肝脏及其附属管道解剖学研究与异种移植设想

对 60只体重 (1 2 .5± 2 .5) kg陕西八眉猪肝脏及其附属管道进行解剖学测定和分析。结果显示 ,八眉猪肝脏各管道及其叶、段划分与人肝基本一致 ;各叶、段由同名的门静脉分支、肝动脉分支供应血液 ,肝静脉汇合入肝内后腔静脉 ,胆汁由各叶同名肝管汇流入肝总管。除肝前后腔静脉、肝后后腔静脉与人同名血管管径有显著性差异外 ,其余管道直径无显著性差异。说明八眉猪肝和人类肝脏在解剖特性上有一定的相似性。