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基因芯片分析芜菁雌蕊退化突变体tpa及野生型开放花的转录组差异 被引量:4
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作者 吴剑锋 张海娟 +2 位作者 卢海宇 王芳展 余小林 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期972-981,共10页
【目的】基于转录组水平分析芜菁雌蕊退化突变(turnip pistil aborted,tpa)发生的可能原因,为揭示芸薹属作物雌蕊发育的分子遗传调控机制提供研究依据。【方法】利用tpa及其野生型植株的开放花制备的mRNA反转录成cDNA与拟南芥ATH1芯片... 【目的】基于转录组水平分析芜菁雌蕊退化突变(turnip pistil aborted,tpa)发生的可能原因,为揭示芸薹属作物雌蕊发育的分子遗传调控机制提供研究依据。【方法】利用tpa及其野生型植株的开放花制备的mRNA反转录成cDNA与拟南芥ATH1芯片进行杂交,筛选出在tpa及其野生型植株中表达有差异的基因,并利用RT-PCR技术对芯片筛选出的基因进行验证。【结果】获得了152个在野生型(W1)和完全退化株(M3)转录组中差异表达的基因,61个在W1和部分退化株(I2)转录组中差异表达的基因,以及24个在I2和M3转录组中差异表达的基因,上述差异基因分别属于细胞壁合成与调控、防卫与胁迫反应、转录调控、蛋白质代谢以及普通新陈代谢等9个不同的功能类别。通过对41个基因的RT-PCR验证,获得了At2g42840、At1g57750、At5g20630、At2g03090、At3g08030、At5g08000、At2g28790、At5g63310和At2g24270等9个在tpa及野生型植株中具显著不同的时空表达特性的基因。【结论】拟南芥cDNA芯片可用于分析tpa及其野生型基因的转录差异,筛选获得的9个显著差异基因不但在雌蕊发育等生殖发育过程起重要作用,还参与了植物营养生长的生理生化过程。 展开更多
关键词 芜菁 拟南芥cDNA芯片 雌蕊发育 基因表达 转录
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芸薹类蔬菜基因组DNA遗传多样性的RAPD分析 被引量:32
2
作者 陈云鹏 曹家树 +1 位作者 缪颖 叶纨芝 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期131-136,共6页
采用随机引物扩增多态性 DNA( RAPD)技术 ,对芸薹类 ( 2 n=2 0 )蔬菜作物的 3 3个品种进行了遗传多样性检测 .从 70个引物中筛选出 3 7个引物 ,共扩增出 3 53带 .其中 ,多态带有 2 60条 ,扩增片段长度大多数集中在 0 .9~ 1 .6kb之间 .... 采用随机引物扩增多态性 DNA( RAPD)技术 ,对芸薹类 ( 2 n=2 0 )蔬菜作物的 3 3个品种进行了遗传多样性检测 .从 70个引物中筛选出 3 7个引物 ,共扩增出 3 53带 .其中 ,多态带有 2 60条 ,扩增片段长度大多数集中在 0 .9~ 1 .6kb之间 .不同引物的检测效率相差很大 .运用 5个引物扩增的 1 0条RAPD特征带 ,可以作为一组 DNA指纹 ,区分所有供试 展开更多
关键词 芸薹类蔬菜 遗传多样性 RAPD DNA
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大白菜雄性核不育基因的染色体定位及AFLP分子标记筛选 被引量:15
3
作者 袁鹤 张成合 +3 位作者 刘海河 轩淑欣 李晓峰 申书兴 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期2061-2067,共7页
【目的】基因定位是遗传研究的重点内容,也是育种工作的重要基础。本研究以大白菜雄性不育两用系‘大阳AB系’和大白菜系列初级三体为材料,对决定大白菜雄性不育性的核基因(ms)进行染色体定位和分子标记筛选,旨在为其分子克隆和遗传利... 【目的】基因定位是遗传研究的重点内容,也是育种工作的重要基础。本研究以大白菜雄性不育两用系‘大阳AB系’和大白菜系列初级三体为材料,对决定大白菜雄性不育性的核基因(ms)进行染色体定位和分子标记筛选,旨在为其分子克隆和遗传利用奠定基础。【方法】基因的染色体定位采用初级三体遗传分析和χ2测验法,分子标记采用AFLP分析方法。【结果】大白菜‘大阳AB系’的雄性不育系(msms)×大白菜系列初级三体(Tri-1、Tri-2、Tri-3、Tri-4、Tri-5、Tri-6、Tri-7、Tri-8、Tri-9)的9个杂交组合中,F1均为可育株;从F1选出三体植株进行自交和测交,其自交子代(F2)和测交子代(Tc)中可育株与不育株的分离比例,只有Tri-4表现为15.5﹕1(F2)和3.24﹕1(Tc)、不符合孟德尔的单基因遗传分离比例(3﹕1和1﹕1),其它三体在2.60﹕1~3.76﹕1(F2)和0.81﹕1~1.48﹕1(Tc)、均符合孟德尔的单基因遗传分离比例(3﹕1和1﹕1),这表明该雄性不育性的遗传与Tri-4的遗传表现一致,即确定该雄性不育性的基因位于大白菜4号染色体上。基于染色体和染色单体分离的三体遗传分析表明,该雄性不育基因位于4号染色体的近着丝点区域,通过对124个AFLP引物组合的筛选,初步获得了一个与雄性核不育基因位点连锁的AFLP标记E34M49(398bp),遗传距离约为1.2cM。【结论】利用初级三体遗传分析首次将大白菜雄性核不育基因定位在第4号染色体上。 展开更多
关键词 大白菜 初级三体 雄性不育 基因定位 AFLP标记
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大白菜与紫甘蓝种间杂种的获得与鉴定 被引量:10
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作者 乔海云 李菲 +3 位作者 张淑江 章时蕃 张慧 孙日飞 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期407-414,共8页
以不同类型的大白菜与紫甘蓝为材料,运用蕾期授粉结合胚挽救技术获得大白菜与紫甘蓝的种间杂种,并对其进行细胞学鉴定。结果表明,大白菜与紫甘蓝杂交,获得了57株F1代幼苗;对根尖染色体数量进行观察和杂种花粉特性调查发现,其中47株具有... 以不同类型的大白菜与紫甘蓝为材料,运用蕾期授粉结合胚挽救技术获得大白菜与紫甘蓝的种间杂种,并对其进行细胞学鉴定。结果表明,大白菜与紫甘蓝杂交,获得了57株F1代幼苗;对根尖染色体数量进行观察和杂种花粉特性调查发现,其中47株具有预期的染色体数目,2n=19,鉴定为真杂种,其花粉败育;另有6株具有38条染色体,鉴定为种间异源双二倍体,应该是发生了染色体自然加倍,其花粉可育。可育的杂种F1代与大白菜回交,获得了大白菜—紫甘蓝BC1代材料。田间观测结果显示,杂种F1代植株综合性状均介于双亲之间,BC1代植株包球明显,综合性状偏向母本大白菜。 展开更多
关键词 大白菜 紫甘蓝 种间杂交 胚挽救 细胞遗传
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SSR作为锚定标记构建白菜×芜菁分子遗传图谱 被引量:6
5
作者 赵凡 于拴仓 +4 位作者 石岭 张凤兰 余阳俊 赵岫云 张德双 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第2期375-382,共8页
为了将已有的大白菜分子遗传图谱和已发表的A基因组参考图谱对应起来,本研究利用国际上发表的大白菜和甘蓝型油菜A基因组特异SSR标记作为锚定标记,重新构建了白菜×芜菁分子遗传图谱。利用双亲和F1对326个SSR标记进行了筛选,共获得8... 为了将已有的大白菜分子遗传图谱和已发表的A基因组参考图谱对应起来,本研究利用国际上发表的大白菜和甘蓝型油菜A基因组特异SSR标记作为锚定标记,重新构建了白菜×芜菁分子遗传图谱。利用双亲和F1对326个SSR标记进行了筛选,共获得86个多态性分子标记。在此基础上整合了已有的400个标记,最终构建了一张由10个连锁群组成,包含了347个标记的分子连锁图谱,图谱总长度为1008.7cM,标记间的平均图距为2.91cM。此图谱上包含了已在A基因组参考图谱上定位的56个SSR标记,分布于10个连锁群上,从而将各个连锁群与参考图谱的连锁群对应起来。每个连锁群上的标记数在25~58个之间,连锁群长度在60.6~177.0cM范围内,平均图距在1.33~4.92cM之间。该图谱为白菜重要性状的遗传定位奠定了良好基础。 展开更多
关键词 大白菜 芜菁 遗传图谱 SSR 锚定标记
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白菜雄性不育相关基因BcMF4基因功能的RNAi验证 被引量:11
6
作者 刘乐承 向珣 曹家树 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1428-1434,共7页
BcMF4(Brassica campestris Male Fertility 4)是前一阶段从普通白菜(Brassica campestris ssp.chinensis var.communis,syn.B.rapa ssp.chinensis var.communis)核雄性不育两用系的可育株中分离到的雄性不育相关基因。本研究根据... BcMF4(Brassica campestris Male Fertility 4)是前一阶段从普通白菜(Brassica campestris ssp.chinensis var.communis,syn.B.rapa ssp.chinensis var.communis)核雄性不育两用系的可育株中分离到的雄性不育相关基因。本研究根据BcMF4基因的cDNA序列设计两对特异引物,从普通白菜花蕾cDNA中扩增出两个片断后连接至双元载体pBI121中,得到了RNAi(RNA interference)植物表达栽体pBI-B4R,并导入了农杆菌LBA4404菌株中;通过组织培养途径转化菜心(B.campestris ssp.chinensis var,parachinensis),72.2%的菜心转基因植株中45.8%的花粉为缩小而空瘪的畸形,而且这些植株的花粉离体萌发率降低至23.7%;Northern杂交显示,转基因植株的花粉畸形,是由于BcMF4基因片段的插入使BcMF4基因的表达受到了抑制。结果表明,采用RNAi技术下调了BcMF4基因的表达,导致了菜心转基因植株部分花粉的不育,证明BcMF4基因在普通白菜和菜心等白菜植物的花粉发育中起着重要作用。 展开更多
关键词 普通白菜 BcMF4 菜心 花粉 RNAi(RNA interference)
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大白菜SRAP反应体系的建立与优化 被引量:21
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作者 杨琦 张鲁刚 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期119-123,共5页
以大白菜基因组DNA为模板,通过正交试验设计,从Mg2+、Taq酶、dNTPs、引物、模板5种因素4个水平对大白菜SRAP(Sequence-related amplified polymorphism,序列相关扩增多态性)反应体系进行优化,建立了适合于大白菜的SRAP-PCR优化反应体系... 以大白菜基因组DNA为模板,通过正交试验设计,从Mg2+、Taq酶、dNTPs、引物、模板5种因素4个水平对大白菜SRAP(Sequence-related amplified polymorphism,序列相关扩增多态性)反应体系进行优化,建立了适合于大白菜的SRAP-PCR优化反应体系,该体系为25μL:Mg2+浓度为3.0 mmol/L,dNTPs为0.2mmol/L,Taq酶1.5 U,引物为0.2μmol/L,模板DNA73.2 ng。PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,35℃复性1 min,72℃延伸1 min,5个循环;94℃变性1 min,50℃复性1 min,72℃延伸1 min,35个循环,72℃延伸10 min。 展开更多
关键词 大白菜 SRAP 优化 正交试验
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大白菜的马铃薯蛋白酶抑制剂基因转化及抗菜青虫性的鉴定 被引量:3
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作者 张军杰 刘凡 +3 位作者 罗晨 姚磊 赵泓 黄玉碧 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期193-198,共6页
以大白菜(B.campestrtis ssp.pekinensis)‘北京80号’生长3 d无菌苗的带柄子叶为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的叶盘法导入马铃薯蛋白酶抑制剂基因(pin Ⅱ)。通过抗性株的真叶在不定芽诱导培养基上的再生, ... 以大白菜(B.campestrtis ssp.pekinensis)‘北京80号’生长3 d无菌苗的带柄子叶为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的叶盘法导入马铃薯蛋白酶抑制剂基因(pin Ⅱ)。通过抗性株的真叶在不定芽诱导培养基上的再生, 证实了嵌合体的存在,并通过此方法来消除嵌合体。获得的转基因植株经PCR、PCR-Southern杂交以及植物基因组Southern杂交证实,目的基因已经整合入植物基因组中。对菜青虫(Pieris rapae L.) 进行了转基因大白菜叶片的连续离体饲喂,结果表明:受试的转基因大白菜对菜青虫的生长发育有较明显的抑制作用。 展开更多
关键词 大白菜 马铃薯蛋白酶抑制剂基因 基因转化 菜青虫 抗性鉴定
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菜心cDNA-AFLP分析体系的优化与建立 被引量:2
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作者 肖旭峰 王恒 +1 位作者 黄敏 雷建军 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期296-300,共5页
以菜心的顶端分生组织为试材,对影响菜心cDNA-AFLP体系的关键因子进行了探讨,以期建立适于菜心转录组差异表达的cDNA-AFLP分析体系。结果表明:Trizol法适用于菜心总RNA提取;SMART双链cDNA合成法效率较高,其中第二链cDNA合成的最佳循环数... 以菜心的顶端分生组织为试材,对影响菜心cDNA-AFLP体系的关键因子进行了探讨,以期建立适于菜心转录组差异表达的cDNA-AFLP分析体系。结果表明:Trizol法适用于菜心总RNA提取;SMART双链cDNA合成法效率较高,其中第二链cDNA合成的最佳循环数为24个;Taq I/Ase I分步各酶切3 h可使双链cDNA酶切完全;预扩增体系以模板稀释20倍,27个循环扩增效果较好,退火温度对扩增结果影响不大,但Mg2+对PCR扩增影响较大,经比较加入2.5μL Mg2+(25 mmoL/L)的预扩及选扩电泳的效果均最佳;预扩产物稀释20倍用于选择性扩增,其PAGE电泳可以获得丰富且重复性好的带型。cDNA-AFLP分析体系的优化与建立为菜心抽薹开花分子机理进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 菜心 CDNA-AFLP 分析体系
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A Genetic Linkage Map of Brassica campestris L.ssp. pekinensis (syn. B. rapa L. ssp. pekinensis) 被引量:8
10
作者 YU Shuan-cang, WANG Yong-jian and ZHENG Xiao-yingBeijing Vegetable Research Center, Beijing 100089 , P. R. China 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2003年第1期49-55,共7页
A molecular genetic map of Chinese cabbage was constructed with a 102 recombinant inbred (RI) population from a cross of two cultivated Chinese cabbage lines 177 and 276, using AFLP and RAPD markers. 352 markers inclu... A molecular genetic map of Chinese cabbage was constructed with a 102 recombinant inbred (RI) population from a cross of two cultivated Chinese cabbage lines 177 and 276, using AFLP and RAPD markers. 352 markers including 265 AFLP markers and 87 RAPD markers were integrated into 17 linkage groups. It covered a total of 2 665. 7 cM with an average interval of 7. 6 cM. AFLP marker is efficient for map construction while it easily forms clusters to cause big gaps in map. A total of 13.92 % abnormal segregation markers distributed in the map. The molecular genetic map is fundamental for gene localization, comparative genomics, and QTL mapping of important agronomic traits. 展开更多
关键词 Brassica campestris L. ssp. pekinensis(syn. B. rapa L. ssp. pekinensis) Genetic linkage map AFLP RAPD
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Differential Expression Analysis of Genie Male Sterility A/B Lines in Chinese Cabbage-Pak-Choi (Brassica campestris ssp. chinensis Makino) 被引量:3
11
作者 WANGYong-qin CAOJia-shu 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2003年第2期195-199,共5页
To determine differential expression of genie male sterility A/B lines in Chinese cabbage-pak-choi (Brassica campestris ssp. chinensis Makino var. communis Tsen et Lee), we used the RNA fingerprinting technique, cDNA-... To determine differential expression of genie male sterility A/B lines in Chinese cabbage-pak-choi (Brassica campestris ssp. chinensis Makino var. communis Tsen et Lee), we used the RNA fingerprinting technique, cDNA-AFLP analysis, in different developmental stages and different tissues. While no obvious differential expressions were observed in rosette leaves, florescence leaves, and scapes, some differential expressions were found in alabstrums of A/B lines and among leaves, scapes and alabstrums. We analyzed the al-abstrums collected in different developmental stages with 10 primer combinations. We got a unique band between middle size alabstrums and large alabstrums in B line in one of the ten pair primers, and in another one pair, one band reflecting a higher gene-expression level in A line than that in B line was obtained. No unique bands were found with the other primer combinations. The bands reflecting different gene-expression level were confirmed by Northern hybridization. The results indicated that cDNA-AFLP was a suitable tool for studying differential expression of genie male sterility in plants. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis patterns of soluble proteins further verified the difference in A/B lines. 展开更多
关键词 Chinese cabbage Brassica campestris L. (syn. B. rapa L.) Genie male sterility Differential expression CDNA-AFLP SDS-PAGE
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芜菁NAC转录因子BcNAC2基因的分离及其表达 被引量:12
12
作者 张海娟 吴剑锋 +1 位作者 胡帅 余小林 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1089-1096,共8页
根据拟南芥NAC2的全长序列设计引物,从芜菁中成功分离了NAC转录因子BcNAC2基因,该基因最大开放阅读框为1683bp,编码560个氨基酸,共包含6个外显子和5个内含子。将BcNAC2与其他30个NACs蛋白进行序列比对以及重构系统进化树分析发现,BcNAC... 根据拟南芥NAC2的全长序列设计引物,从芜菁中成功分离了NAC转录因子BcNAC2基因,该基因最大开放阅读框为1683bp,编码560个氨基酸,共包含6个外显子和5个内含子。将BcNAC2与其他30个NACs蛋白进行序列比对以及重构系统进化树分析发现,BcNAC2与十字花科的拟南芥的同源性最高,芜菁BcNAC2与拟南芥NAC2蛋白功能结构域内的特征序列有显著的差异。半定量RT-PCR的结果表明,BcNAC2呈部分组成型表达特征,在授粉8d的嫩角果中表达丰度最高,而且组织原位杂交结果显示,BcNAC2在胚囊中有较高的表达,由此推测,BcNAC2与芜菁的种子或胚的发育相关。 展开更多
关键词 芜菁 NAC转录因子 基因分离 半定量RT-PCR 组织原位杂交
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