基于酵母产孢的syntaxin家族蛋白SNARE区域功能分析

真核细胞中大部分膜融合过程由SNARE蛋白介导,但其功能和调节机制尚未完全清楚。酵母孢子形成是研究囊泡融合机制包括SNARE蛋白的理想模型系统。在该过程中涉及t-SNARE蛋白Sso1,它是突触囊泡融合所需蛋白syntaxin 1A的同源物,两者SNARE区域有51%的同源性。尽管如此,将SSO1的SNARE区域完全替换成syntaxin 1A,而构建的嵌合体却无法回补sso1△突变的产孢缺陷。为了确定哪些残基为Sso1功能所必须,作者进行了嵌合体和突变分析,发现Sso1/syntaxin 1A嵌合体中syntaxin 1A的SNARE区域的220位丙氨酸换成谷氨酸后获得产孢功能。另外,Sso1发生相应的突变-218位谷氨酸突变成丙氨酸后失去其功能。因此,218位谷氨酸残基为Sso1产孢功能所必须。

硝酸羟胺对大鼠脑中Synaptobrevin和Syntaxin的表达的影响

目的观察硝酸羟胺(HAN)对大鼠脑组织Synaptobrevin 2、Syntaxin的影响,探讨二者在HAN致脑损伤中的作用。方法应用免疫荧光双标记技术标记Synaptobrevin2和Syntaxin,用Hochest衬染细胞核,Radiance2100型激光共聚焦显微镜观察。结果Synaptobrevin 2及Syntaxin广泛分布在正常大脑皮质、海马及小脑,HAN注射后7d内,Synaptobrevin 2表达减弱,Syntaxin表达增强。结论Synaptobrevin 2和Syntaxin比例失调和相互作用减弱可能在HAN致脑损伤中发挥重要作用。

成年期甲减大鼠海马syntaxin-1表达及甲状腺素干预效应

目的观察成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠海马突触相关蛋白syntaxin-1表达及不同剂量甲状腺素干预后的恢复情况,探讨甲减脑损伤及替代治疗的可能分子机制。方法通过腹腔注射丙基硫氧嘧啶建立成年期甲减大鼠模型(甲减组)共6周,第5周起每100 g体重腹腔注射给予左旋甲状腺素5μg(常规剂量组)或20μg(大剂量组),对照组腹腔注射给予等体积生理盐水共6周。采用放射免疫法测定血清T3、T4水平,Western blot法分析各组大鼠背侧海马内syntaxin-1表达。结果与对照组比较,甲减组大鼠血清T3、T4水平降低(P<0.05),常规剂量组血清T3、T4水平差异无显著性;与对照组比较,甲减组大鼠背侧海马突触小体内syntaxin-1水平升高(P<0.05),常规剂量组和大剂量组syntaxin-1表达水平差异均无显著性,其中大剂量组有进一步恢复的趋势。结论成年期甲减大鼠海马syntaxin-1表达增加,常规剂量治疗能使syntaxin-1表达恢复至正常水平,大剂量干预时表达更接近正常。

花鲈Syntaxin 4基因及其在免疫应答反应中的表达特征

采用RT-PCR技术,从花鲈(Lateolabrax japonicus)中克隆得到膜蛋白Syntaxin 4基因近85%的CDS序列。同源性分析表明,该序列与斑马鱼以及哺乳动物的Syntaxin 4基因的有较高相似性。利用实时定量PCR技术分析Syntaxin 4基因在mRNA水平上的相对表达量。结果表明,该基因在脑组织和免疫相关组织中都有表达,以脑组织的表达量最多,在免疫相关组织中的表达量由多到少依次是脾脏、头肾和血液。在LPS刺激24 h后,脾脏和头肾中的表达量分别是对照组的7.83倍和10.41倍,表明免疫组织中Syntaxin 4基因的相对表达量随诱导增强,提示该基因在花鲈免疫应答反应中可能起重要作用。

中华补血草Syntaxin基因的克隆

[目的]对中华补血草Syntaxin基因进行克隆。[方法]以中华补血草叶片为材料,提取总RNA并进行反转录反应。依据已知Syntaxin基因5'端EST序列信息设计巢式引物,以反转录得到的cDNA为模板,利用2轮PCR扩增cDNA3'末端(3'RACE),获得Syntaxin基因3'端序列。[结果]获得1090bp的DNA片段。分析表明,该片段编码LsSyntaxin全长基因,其中开放阅读框长816bp,编码271个氨基酸。该基因编码的Syntaxin蛋白相对分子量为30254.3Da,理论等电点为5.55。[结论]为研究Syntaxin基因在补血草中的功能及其在补血草泌盐过程的作用奠定了基础。

中华补血草Syntaxin基因的克隆(英文)

[目的]对中华补血草Syntaxin基因进行克隆。[方法]以中华补血草叶片为材料,提取总RNA并进行反转录反应。依据已知Syntaxin基因5’端EST序列信息设计巢式引物,以反转录得到的cDNA为模板,利用2轮PCR扩增cDNA3’末端(3’RACE),获得Syntaxin基因3’端序列。[结果]获得1090bp的DNA片段。分析表明,该片段编码LsSyntaxin全长基因,其中开放阅读框长816bp,编码271个氨基酸。该基因编码的Syntaxin蛋白相对分子量为30254.3Da,理论等电点为5.55。[结论]为研究Syntaxin基因在补血草中的功能及其在补血草泌盐过程的作用奠定了基础。

Syntaxin-1通过激活突触递质传递加速早期突触的形成

Syntaxin-1是一种多结构域蛋白,通过与synaptobrevin-2和SNAP-25形成SNARE复合体调节囊泡融合.然而,syntaxin-1在突触形成过程中是否发挥作用,目前尚不清楚.本研究显示syntaxin-1的表达水平与突触形成过程高度相关.Syntaxin-1的R151A和I155A突变影响其在突触形成中的促进作用,而Habc结构域或跨膜结构域在突触形成中无显著作用.结果表明,syntaxin-1通过激活突触囊泡释放来加速突触的形成.

Syntaxin1A与Munc18a在细胞内的相互作用和定位研究(英文)

Syntaxin 1A (Syn1A) 和Munc18a蛋白在囊泡转运和分泌中起着至关重要的作用,然而它们在细胞中分选和转运的分子机制目前尚不清楚. 我们用绿色荧光蛋白(EGFP) 和红色荧光蛋白(TDimer2) 分别标记Syn1A和Munc18a,并用荧光显微技术观察它们在BHK-21和HEK293细胞中的转运和定位. 实验结果表明Syn1A主要定位在细胞质膜上,而Munc18a主要分布在胞浆中,但是与Syn1A共表达时能定位到细胞质膜上. 删除胞浆部分的Syn1A蛋白不能上膜,提示其胞浆结构域在分选和定位过程中起着重要的作用.

中年CD-1小鼠背海马syntaxin1水平的改变

应用免疫组化技术检测13月龄(中年)和5月龄CD-1小鼠背海马突触前蛋白syntaxin 1的表达水平。结果显示,13月龄小鼠齿状回、CA1及CA3区各层syntaxin 1的相对含量较5月龄均显著下降。表明中年CD-1小鼠背海马syntaxin 1含量全面下调。

含Syntaxin 1A基因的SFV表达载体的构建与表达

用绿色荧光蛋白 (EGFP)标记了Syntaxin 1A(Syn1A)蛋白 ,构建了含有EGFP Syn1A融合蛋白的森林脑炎病毒表达载体 pSFV1 EGFP Syn1A ,测序结果表明表达载体构建正确 .用荧光显微成像技术研究了Syn1A在原代大鼠胰腺 β细胞中的定位 ,结果表明Syn1A主要定位于细胞质膜上 .

Syntaxin4参与小鼠卵母细胞皮质颗粒的转运机制的研究

目的探讨Syntaxin4参与小鼠卵母细胞皮质反应及对皮质反应的影响。方法 RT-PCR和Western blot检测Syntaxin4在小鼠卵母细胞表达;免疫荧光验证Syntaxin4与皮质颗粒在卵母细胞中的定位,分析Syntaxin4对小鼠卵细胞皮质反应的影响;活细胞实时拍摄系统观察降低Syntaxin4表达后皮质反应的动态变化。结果 (1)Syntaxin4在小鼠卵母细胞中表达,且在GV期和MII期无明显变化;(2)Syntaxin4与小鼠卵细胞皮质颗粒共定位;(3)活细胞实时拍摄证实降低Syntaxin4的表达后阻碍了皮质反应的进行。结论 Syntaxin4参与小鼠卵细胞皮质反应。

Syntaxin8在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的检测突触融合蛋白8(Syntaxin 8,STX8)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,分析其表达与NSCLC临床病理特征的关系。方法收集NSCLC癌组织及癌旁组织各70例用于免疫组化染色,并另取NSCLC组织及癌旁组织各10例用于RNA和蛋白提取,采用qRT-PCR检测STX8 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测STX8蛋白表达,分析STX8的表达与NSCLC临床病理特征的关系。结果 NSCLC组织中STX8 mRNA表达水平高于癌旁组织(3.962 5±0.487 3 vs.0.538 2±0.097 5,t=21.797,P<0.01);免疫组化结果显示,STX8蛋白在NSCLC组织中高表达率高于癌旁组织[71.43%(50/70)vs.38.57%(27/70),χ~2=15.267,P<0.01];并且NSCLC组织中STX8蛋白表达水平同样高于癌旁组织(2.496 1±0.362 5 vs.0.340 2±0.119 1,t=17.876,P<0.01);STX8在不同的病理分型NSCLC患者癌组织中高表达率不同(P<0.05),在鳞状细胞癌、腺癌中高表达率高于腺鳞癌,大细胞癌中没有观察到STX8高表达;不同性别、年龄、肿瘤直径、TNM分期、有无淋巴结转移分组的NSCLC患者癌组织中STX8表达差异无统计学意义。结论 STX8在NSCLC中异常高表达,可能与NSCLC的发生发展进程相关。

Syntaxin4蛋白在NK细胞中的表达及与SNAP-23蛋白的相互作用

目的 研究NK细胞中与囊泡分泌有关的膜蛋白syntaxin 4的表达和与其它蛋白的相互作用 ,为进一步研究NK细胞免疫效应的分泌调节分子机制提供新思路。方法 RT PCR和免疫印迹方法检测人类NK细胞syntaxin 4的表达 ,免疫荧光显微镜观察静息状态和经靶细胞激活后syntaxin4蛋白在NK92细胞中表达和分布的变化 ,免疫共沉淀检测syntaxin 4蛋白和SNAP 2 3蛋白的相互作用。结果 人类NK细胞中在mRNA水平和蛋白质水平均有syntaxin 4组成性表达 ,蛋白产物主要分布在细胞膜上。异种靶细胞刺激后 ,syntaxin 4蛋白有明显的细胞内定位变化和极化现象。syntaxin 4蛋白和SNAP 2 3蛋白有较强的相互作用。结论 syntaxin 4蛋白与NK细胞对靶细胞的识别过程有关 ,并与胞内膜交换相关分子SNAP 2 3蛋白相互作用 ,可作为研究干预移植排斥反应中杀伤性胞吐的新目标分子。

Syntaxin-1蛋白的多重功能(英文)

Syntaxin-1是特异性地分布在神经细胞突触前质膜上的蛋白。它早期被作为分子量为35 kD的synaptotagmin-1结合蛋白,但很快就被认识到是细胞质膜融合的关键蛋白。Syntaxin-1通过与SNAP25和Synaptobrevin/VAMP蛋白聚合,进而形成被认为是神经突触囊泡融合必要因子的SNARE核心复合体。作为一个多结构域的蛋白,syntaxin-1与多个突触蛋白相互作用,其作用远超出了仅作为SNARE核心复合体中一个蛋白质成员的作用。本文着重介绍了有关syntaxin-1与其它SNARE组份蛋白、munc18蛋白和钙离子通道的相互作用及其功能的最新研究进展。全面揭示syntaxin-1作为SNARE核心复合体成员的功能以及超越这一功能的作用,还有待于对其结构以及与其它突触蛋白相互作用特性的进一步深刻理解。

甲状腺素对甲状腺功能减退症大鼠海马syntaxin-1蛋白表达的影响

目的研究成年期甲状腺功能减退症（简称甲减）大鼠海马突触前膜蛋白syntaxin-1的表达及不同剂量甲状腺素替代治疗的作用，探讨甲减脑损伤可能的分子机制。方法健康3月龄成年SD雄性大鼠44只，体质量250-300g，按体质量随机分为4组：甲减组、常规治疗组、大剂量治疗组和对照组，每组11只。甲减组、常规治疗组和大剂量治疗组每El腹腔注射丙基硫氧嘧啶（PTU）10mg／kg；4周后，甲减组继续给予聊腹腔注射2周，常规治疗组和大剂量治疗组每日分别给予50、200μg／kg左旋甲状腺素腹腔注射2周；对照组每日腹腔注射等量生理盐水。造模结束后，采用放射免疫法检测4组大鼠血清T3、T4水平；采用免疫组化法检测4组大鼠海马syntaxin—l蛋白的表达。结果与对照组[（0．65±0：05）、（55．20±3．56）nmol／L]比较，甲减组血清T3、T4[（0．34±0．04）、（43．01．4-2．95）nmol／L]明显降低（P均〈0．05），大剂量治疗组血清T3、T4[（1．11±0．10）、（96．68±6．42）nmol／L]显著升高（P均〈0．05）；常规治疗组血清T3、T4[（0．63±0．05）、（55．04±3．77）nmol／L]与对照组比较，差异无统计学意义（P均〉0．05）。甲减组大鼠海马CAl、CA3区起始层、放射层、腔隙层和齿状回（DG）分子层、多形层syntaxin-1蛋白表达水平（0．059±0．016、0．064±0．014、0．068±0．016，0．069-t-O．017、0．072±0．016、0．070±0．01l，0．051±0．012、0．072±0．017）显著高于对照组（0．037±0．008、0．045±0．010、0．042±0．009，0．040±0．010、0．053±0．009、0．042±0．009，0．032±0．007、0．047±0．010，P均〈O．05）；常规治疗组和大剂量治疗组各层syntaxin-1蛋白表达水平（0．041±0．011、0．046±0．017、0．044±0．014，0．037±0．008、0．051±0．010、0．043．4±0．010，0．033±0．011、0．045±0．014和0．040±0．010、0．045．4±0．011、0．0434±0．010，0．033±0．009、0．050±0．010、0．041±0．009，0．032±0．009、0．0464-0．009）较甲减组降低（P均〈0．05），与对照组比较，差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论成年期甲减大鼠海马内syntaxJn一1蛋白表达增加，常规剂量甲状腺素替代治疗能使其恢复至正常水平。

甜瓜syntaxin家族基因鉴定及其对白粉病菌响应分析

为了揭示突触融合蛋白(syntaxin)家族基因在甜瓜抵御白粉病过程中的功能,采用生物信息学方法从甜瓜基因组序列中鉴定到17个syntaxin家族成员,这些基因不均匀地分布在9条染色体上。系统进化分析发现甜瓜17个syntaxin家族成员属于7个亚家族(SYP-1、SYP-2、SYP-3、SYP-4、SYP-5、SYP-7、SYP-8),表明不同syntaxin家族成员之间具有不同的分子功能。基因结构分析表明甜瓜syntaxin家族基因包含1~12个内含子。组织表达分析表明有10个甜瓜syntaxin家族基因组成性表达,7个基因组织特异性表达。此外,甜瓜幼苗经白粉病菌人工接种侵染之后,9个syntaxin家族基因呈现不同程度的响应,9个syntaxin家族基因与MLO家族基因共表达,推测其在甜瓜抗白粉病过程中发挥重要功能。

突触融合蛋白17通过调节自噬减少阿尔茨海默病细胞模型中淀粉样物质沉积

目的:探究突触融合蛋白17(STX17)对小鼠海马神经元HT22细胞中自噬和淀粉样物质沉积的影响及可能机制。方法:用慢病毒介导HT22细胞内淀粉样前体蛋白(APP)和STX17过表达,RT-qPCR检测慢病毒感染后各组细胞中APP和微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)及STX17的mRNA表达情况。刚果红染色观察HT22细胞中淀粉样物质沉积情况。Western blot检测自噬相关蛋白LC3-II和P62的表达。免疫荧光观察细胞中STX17定位,以及LC3-II定位和斑点数量。结果:HT22细胞成功过表达APP后,淀粉样物质沉积增多,STX17表达下降,STX17主要定位在细胞质内,LC3-II和P62表达明显增多。过表达STX17后,LC3-II和P62表达下降,淀粉样物质沉积减少。结论:STX17通过调节自噬减少阿尔茨海默病淀粉样物质沉积。

突触融合蛋白结合蛋白4对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和迁移的影响

目的:观察突触融合蛋白结合蛋白4(STXBP4)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达情况及其对OSCC细胞恶性生物学行为的影响。方法:(1)通过TIMER、GEPIA2、UALCAN、ENCORI、GEO和HPA数据库从mRNA和蛋白水平综合研究STXBP4在头颈鳞状细胞癌组织中的表达情况。采用qPCR和Western blot分别检测OSCC细胞系中STXBP4的mRNA和蛋白表达水平。(2)用RNA干扰技术下调SCC-9细胞中STXBP4表达,构建敲减组(si-STXBP4-1、si-STXBP4-2和si-STXBP4-3组)和阴性对照组(si-NC组);通过慢病毒转染技术过表达CAL-27细胞中的STXBP4,构建过表达组(LV-STXBP4组)和阴性对照组(LV-NC组)。分别用CCK-8实验、平板集落形成实验和Transwell实验检测OSCC细胞活力、集落形成能力和迁移能力;用Western blot检测上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达。(3)用裸鼠皮下移植瘤模型探究STXBP4在体内对OSCC细胞增殖的影响。结果:(1)TIMER、GEPIA2、UALCAN、ENCORI和GEO数据库分析发现,与正常组织相比,STXBP4的mRNA水平在头颈鳞状细胞癌组织中表达上调;HPA蛋白数据库分析显示,STXBP4在头颈鳞癌组织中表达比正常口腔黏膜组织较高。与正常口腔黏膜细胞相比,STXBP4在5种OSCC细胞系中高表达(P<0.05)。(2)SCC-9细胞转染si-STXBP4-1、si-STXBP4-2和si-STXBP4-3后,STXBP4的表达显著低于si-NC组(P<0.01);相较于si-NC组,敲减STXBP4的表达后,SCC-9细胞的增殖能力和迁移能力显著降低(P<0.05)。过表达STXBP4后的CAL-27细胞中,STXBP4的表达量显著高于LV-NC组(P<0.01);LV-STXBP4组中CAL-27细胞的增殖能力和迁移能力显著高于LV-NC组(P<0.01)。敲减STXBP4表达后Ncadherin的蛋白表达水平显著降低,而E-cadherin的蛋白表达水平则升高,过表达STXBP4后结果相反(P<0.05)。(3)与LV-NC组相比,过表达STXBP4后,裸鼠皮下移植瘤体积和重量显著升高(P<0.05)。结论:STXBP4在OSCC中高表达,可促进OSCC细胞的增殖和迁移,其对OSCC细胞迁移行为的影响可能与EMT有关。

SNAREs蛋白复合物与囊泡融合分子调节机制的研究进展

细胞内大分子物质及颗粒性物质不能自由穿过细胞膜,必须以囊泡运输的方式进行跨膜转运,囊泡介导的转运方式,无论是正向或是逆向转运,都包括3个主要步骤,分别是外壳蛋白的选择,囊泡的出芽与形成和转运物质的选择[1]。研究表明在囊泡运输过程中N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体（SNAREs）发挥着重要作用,

三氧化二砷诱导小鼠肝癌细胞H_(22)外泌exosome及相关机制研究

目的探讨三氧化二砷在小鼠肝癌细胞H22外泌exosome中的影响。方法MTT法筛选三氧化二砷的合适药物浓度;密度梯度离心和超速离心法提纯exosome,Bradford法对exosome总蛋白进行定量分析;Western blot检测影响小囊泡vesicle分泌的复合体SNARE的重要组成及调节蛋白Syntaxin的表达;结合钙荧光探针Fura-2、荧光倒置定量显微镜测定细胞内游离钙的相对浓度。结果维持小鼠肝癌细胞H2290%存活48h的药物浓度为1.25μmmol/L;药物作用前后,细胞数为5×104ml-1的H22细胞常规培养48h所得细胞悬液200ml,经密度梯度离心和超速离心所得exosome的总蛋白浓度分别为(0.85±0.13)、(0.96±0.10)mg/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);三氧化二砷作用前后,H22细胞均有Syntaxin蛋白表达,三氧化二砷处理后,其表达明显增加(P<0.05)。结论SNARE复合体假说也适用于小鼠肝癌细胞H22的exosome外泌过程,三氧化二砷在exosome的外泌过程中有一定的促进作用。