人颞叶内侧癫痫海马组织星形胶质细胞Syntrophin的表达变化

目的观察人颞叶内侧癫痫(MTLE)海马组织星形胶质细胞syntrophin的表达变化。方法 2015年4月至2016年7月,17例癫痫患者手术切除的海马组织,依据苏木素-伊红(HE)染色及胶质原纤维酸性蛋白、神经元核抗原免疫组织化学染色结果,分为MTLE组13例和非MTLE组4例。免疫荧光双重组织化学法及免疫荧光组织化学法观察syntrophin的表达。结果 MTLE组星形胶质细胞大量增生,神经元明显减少。syntrophin在星形胶质细胞膜及足突处表达。与非MTLE组相比,MTLE组syntrophin在血管周围星形胶质细胞足突处分布减少,在其他部位分布增加。图像分析显示,与非MTLE组相比,MTLE组syntrophin蛋白量显著增多(t=5.421,P<0.001)。结论海马组织syntrophin在星形胶质细胞上的分布及其整体表达变化可能与MTLE发生相关。

PLC-β3与syntrophin蛋白的相互作用

目的探索并鉴定PLC-β3与PDZ蛋白syntrophin的相互作用,为进一步研究PLC-β3在神经系统信号传导通路中的作用提供线索。方法制备GST-PLC-β3-CT融合蛋白,利用GST pull down的方法,检测PLC-β3-CT与β2-syntrophin和γ2-syntrophin的PDZ结构域的相互作用。结果构建重组质粒pGEX-PLC-β3-CT,在大肠杆菌BL21中成功表达融合蛋白后,利用GST pull down的方法证实了PLC-β3-CT可以与β2-syntrophin而不是γ2-syntrophin的PDZ结构域相互作用。结论 PLC-β3与β2-syntrophin相互作用,为研究完整的PLC-β3与β2-syntrophin的相互作用以及这种相互作用在神经系统信号网络中的功能提供了线索。

Syntrophin和Utrophin在神经元性胆碱能突触中的表达

目的 了解syntrophin和utrophin在神经元性胆碱能突触中的表达。方法 通过免疫荧光染色和Westenblot ,我们检查了DGC中组成蛋白syntrophin、utrophin在颈上神经节 (superiorcervicalganglia ,SCG)和下颌下神经节 (submandibularganglia ,SMG)中的表达。结果 β2 syntrophin和全长utrophin集中表达在神经元性胆碱能突触中。结论 β2 syntrophin和全长utrophin在神经元性胆碱能突触中表达 ,说明在神经元性胆碱能突触中存在类似神经肌肉接头DGC复合物 ,β2 syntorpnin和utrophin是其中组成成分。

PDGFRβ与β2-syntrophin蛋白相互作用的初步研究

目的探索并鉴定β型血小板源性生长因子受体(platelet-derived growth facter recepterβ,PDGFRβ)与PDZ蛋白β2-syntrophin新的结合作用以及该相互作用的分子基础,为进一步研究PDGFRβ相关信号转导通路的调节提供线索。方法制备GST-PDGFRβ羧基端的融合蛋白,通过GST pull-down技术,检测PDGFRβ-CT与β2-syntrophin的PDZ结构域及完整的β2-syntrophin蛋白的相互作用。结果成功构建了重组质粒pGEX-PDGFRβ-CT。在大肠埃希菌中成功表达融合蛋白后,通过体外蛋白质结合实验证实了PDGFRβ-CT与β2-syntrophin的PDZ结构域和兔脑组织中内源性的β2-syntrophin蛋白可以相互作用。结论PDGFRβ-CT与β2-syntrophin之间存在相互作用,该相互作用是由PDGFRβ的羧基末端与β2-syntrophin的PDZ结构域结合而实现的,此结果为研究PDGFRβ介导的下游信号转导通路以及细胞特定调控受体功能的机制奠定了基础。

2-十一烷酮通过调控重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白信号改善小鼠哮喘的研究

目的研究2-十一烷酮对实验性哮喘小鼠重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白(Nrf2/TXNIP/TrX)信号的影响。方法将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、对照组、实验组和联合组,每组6只。正常组未行造模,其余4组给予抗原混合液200μL致敏+1%OVA激发建模。在此基础上,对照组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮;实验组给予30 mg·kg^(-1)ML385;联合组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮+30 mg·kg^(-1)ML385;正常组和模型组均给予等量0.9%NaCl。用苏木精-伊红染色法观察肺组织炎性细胞的浸润情况,用酶联免疫吸附试验法检测血清免疫球蛋白E(IgE)和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)水平,用蛋白质印迹法检测Nrf2、TXNIP、TrX和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的表达水平。结果实验组、对照组、联合组、模型组和正常组的炎症评分分别为(4.33±0.65)、(1.00±0.41)、(3.00±1.21)、(3.33±0.32)和(0.67±0.31)分,血清IgE分别为(24.17±4.59)、(87.51±9.91)、(49.43±8.49)、(129.38±13.75)和(78.00±11.35)ng·mL^(-1),BALF中IL-1β分别为(44.17±7.11)、(154.45±17.75)、(87.04±15.72)、(216.29±19.64)和(134.87±23.83)pg·mL^(-1),Nrf2蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.46±0.02、0.71±0.03、0.30±0.02和0.48±0.02,TXNIP蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.16±0.57、1.55±0.21、5.25±0.18和3.59±0.24,TrX蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.38±0.02、0.79±0.01、0.24±0.03和0.42±0.02,NLRP3蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.33±0.42、2.26±0.31、5.21±0.44和3.67±0.29。实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论2-十一烷酮对OVA诱导的小鼠哮喘具有明显的治疗作用,其机制可能与调节Nrf2/TXNIP/TrX信号,抑制NLRP3炎症小体活化有关。

AD模型小鼠脑组织AQP4、SNTA1表达水平的变化及DADS的干预研究

目的探讨二烯丙基二硫化物(DADS)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的干预作用,为AD的防治提供理论依据。方法将20只5月龄APPswe/PS1d E9双转基因鼠按窝别和体质量分为AD模型组和AD干预组,同时将野生型小鼠分为野生对照组和野生干预组,每组10只。干预组小鼠每日1次灌胃给予50 mg/kg DADS,AD模型组小鼠和野生对照组小鼠每日1次灌胃等量溶媒,连续处理6月。采用水迷宫和旷场实验测定小鼠神经行为学变化。免疫组化法分析大脑皮质β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积情况,q RT-PCR和Western blot法分别检测大脑皮质水通道蛋白4(AQP4)、α-互养蛋白(SNTA1)m RNA及蛋白的表达水平。结果与对照组相比,AD模型组小鼠水迷宫实验中定位航行逃避潜伏期延长、穿越平台次数减少,在旷场实验中中央停留时间延长、穿格次数和直立次数减少,大脑皮质Aβ沉积数量增多,AQP4m RNA及蛋白表达升高,SNTA1m RNA及蛋白的表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与AD模型组相比,DADS干预组小鼠的定位航行逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增多,中央停留时间缩短、穿格次数和直立次数增多,大脑皮质Aβ沉积数量减少,AQP4及SNTA1 m RNA及蛋白的表达水平上调,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 AD模型小鼠大脑皮质AQP4表达升高,但SNTA1表达的降低可改变AQP4极性分布而影响AQP4的功能。DADS可明显减少AD模型小鼠大脑皮质Aβ沉积,改善认知能力,其作用机制可能与DADS调节AQP4表达及其极性分布有关。