补肾调经汤对PCOS模型大鼠卵巢t-PA、PAI-1表达的影响

目的:观察补肾调经汤对PCOS模型大鼠卵巢t-PA、PAI-1表达的影响。方法:用来曲唑造模法建立雌性大鼠PCOS模型,设置正常对照组、模型组、西药组、中药组。通过阴道涂片观察大鼠动情周期,ELISA法检测大鼠血清T水平,电镜观察卵巢形态,Western blot检测测定大鼠卵巢t-PA、PAI-1蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清T水平升高,窦卵泡数增多,颗粒细胞层数减少,卵巢组织t-PA表达降低、PAI-1表达升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和西药组血清T水平下降,窦卵泡数减少,颗粒细胞层数增多,卵巢组织t-PA表达升高、PAI-1表达降低(P<0.01)。结论:PCOS的发病可能与卵巢t-PA、PAI-1的异常表达有关,补肾调经汤可能能够通过调节t-PA、PAI-1的表达恢复卵巢正常生殖功能,维持生殖内分泌稳态,达到治疗PCOS的作用。

纳米铜/聚合物复合材料宫内节育器对猕猴宫腔液t-PA、PAF、PGE_2水平的影响

目的:探讨纳米铜/聚合物复合材料宫内节育器(IUD)对置器后子宫出血、疼痛的影响。方法:选择具规律月经周期且有生育史的育龄猕猴30只,分为空白对照组、裸铜组、生物材料组、低剂量纳米铜组(10μg/220mm2)、高剂量纳米铜组(20μg/220mm2),每组6只。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组置器后子宫宫腔冲洗液中t-PA、PAF、PGE2水平。结果:①与空白组相比,裸铜组宫腔冲洗液中t-PA及PGE2水平显著升高;②与裸铜组相比,纳米铜组t-PA及PGE2水平均显著降低;③除裸铜组PAF显著高于空白组外,其他各组间PAF水平无明显差异。结论:纳米铜IUD可减少对子宫t-PA和PGE2水平的影响,因而可能减轻置入IUD引起的子宫异常出血、疼痛副反应。

补阳还五汤及拆方对血栓形成大鼠梗塞灶、血管损伤半暗区、血浆t-PA、PAI活性及ET含量的影响

利用已建立的冷光源光化学诱导血栓形成大鼠动物模型 ,观察补阳还五汤总方、补气药及活血药对模型大鼠梗塞面积、血管损伤半暗带面积及程度、局部脑组织血流、血浆t PA、PAI活性及血浆ET含量的影响。结果 :补阳还五汤总方对上述指标均有显著性影响 ,补气药及活血药均可缩小梗塞面积 ,减轻血管损伤程度 ,改善梗塞区上游供血区脑组织血流 ,抑制血浆PAI活性。活血药可显著降低血浆ET含量 ;补气药可显著地提高血浆t PA活性 。

马铃薯密码子用法分析及其在t-PA基因密码子改造上的应用

采用bioperl 1.0工具在红旗LINUX系统下自编了密码子分析软件;通过对马铃薯98个蛋白质编码基因序列(codonDNAsequence)的分析,计算出了马铃薯的密码子用法,并确定出了马铃薯的4个高表达优越密码子;依据马铃薯密码子用法和高表达优越密码子分析结果,对t PA基因序列进行了密码子的改造,得到了具有马铃薯密码子使用特点的t PA基因序列,从而为以马铃薯为生物反应器高效生产t PA奠定了分子基础。

短暂脑缺血发作和脑梗死患者血浆vWF、tPA和PAI-1变化的临床对照研究

目的 分析短暂脑缺血发作 (TIA)和脑梗死患者血浆血管性血友病因子 (vWF)、组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)和组织型纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1 )的变化 ,探讨其在急性缺血性脑血管病发病中的意义。方法 选择 71例发病 <72h的脑梗死患者、4 4例最近一次脑缺血发作症状 <72h的TIA者和 4 0例健康体检者进行对照分析。每例均行头部MR扫描 ,TIA患者检查颈部血管超声。ELISA法测定vWF、tPA、PAI 1。结果 TIA组和脑梗死组vWF和PAI 1比对照组明显增高 ,t PA明显降低 ,TIA患者t PA和PAI 1水平低于脑梗死组 ,vWF高于脑梗死组。颈动脉超声显示狭窄和斑块的TIA患者vWF高于超声正常的患者 ,t PA低于超声正常的患者。结论 TIA和脑梗死的发病与内皮细胞损伤和凝血纤溶异常有关。

猴局部脑缺血模型的建立及t-PA溶栓效果的评价

目的探讨猴脑缺血模型的建立及组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)在该模型中的溶栓效果。材料与方法对21只成年食蟹猴,术前做CT平扫及介入血管造影排除脑血管及颅内病变,行介入法于大脑中动脉注入自体血栓造成大脑中动脉血栓栓塞(MCAo);再经介入血管造影和CT灌注扫描证明栓塞成功,术后30mic颈内动脉t-PA灌注溶栓,术后2h再次做CT灌注扫描和(或)介入血管造影确认溶栓成功,术后14天连续观察行为学表现。结果21只实验动物中,3只手术前发现病变,未行手术(占14.3%)。18只进行手术的动物中,共有17只DSA及CT灌注扫描证实栓塞成功,成功率94.4%,1只栓塞后介入血管造影及CT灌注扫描均未发现明显缺血,动物麻醉复苏后无脑缺血的行为学表现,占5.6%。17只栓塞成功的动物中13只发现明显血管闭塞、消失(占76.5%),4只表现为部分血管分支显影不良(占23.5%),1只由于栓塞体积过大死亡,1只手术后因穿刺部位出血而死亡,手术死亡率为11.1%。将栓塞术成功并存活的15只动物随机分成两组,8只作为假治疗组;7只为溶栓组,其中1只由于溶栓后颅内出血死亡,溶栓后死亡率为14.3%。MCAo后CT灌注扫描可见缺血区对比剂平均通过时间(MTT)明显增高,和对侧相同区域比较有明显差异。结论(1)血管介入法导入自体血栓制作猴脑缺血模型,手术创伤小,能降低动物的死亡率,增加手术的稳定性;(2)t-PA溶栓治疗脑缺血可以增加脑血流量,改善神经功能。

益气化痰祛瘀方对冠心病模型大鼠PAI-1、t-PA表达的影响

目的观察益气化痰祛瘀方对冠心病大鼠心肌及主动脉组织PAI-1、t-PA表达的影响及作用机制。方法采用高脂饲料、脑垂体后叶素腹腔注射建立大鼠冠心病模型,分为正常组、模型组、复方丹参滴丸对照组、益气化痰祛瘀方高、低剂量组,采用免疫组化法检测大鼠心肌和主动脉组织PAI-1、t-PA的表达。结果模型组大鼠心肌和主动脉组织PAI-1表达增强,t-PA表达减弱(P<0.01);给药后各用药组PAI-1的表达减弱,t-PA的表达增强(P<0.01);高、低剂量组均优于对照组(P<0.05或P<0.01),高、低剂量组间无明显差异(P>0.05)。结论益气化痰祛瘀方可通过调节心肌和主动脉组织PAI-1、t-PA的表达,以达到治疗冠心病的目的。

t-PA cDNA的克隆及其在毕赤酵母中的表达

应用ＰＣＲ方法，在ｔＰＡｃＤＮＡ５′端引入合适的限制酶位点和酵母分泌信号肽，与酵母表达载体ｐＰＩＣ９重组，构建表达质粒ｐＳＴＥＹ，利用ＬｉＣｌ转化法转化酵母菌ＹＳ１０８，在ＭＭ和ＭＤ平板上筛选表型，ＰＣＲ筛选ｔＰＡｃＤＮＡ与酵母染色体整合而形成的阳性克隆，阳性克隆经甲醇诱导表达后，用ＳＤＳＰＡＧＥ证明表达产物的分子量为６ｋＤａ左右，用酪蛋白板溶圈法测定ｔＰＡ的活性。Ｍｕｔｓ表型菌表达产物活性最高为２５００ＩＵ／ｍｌ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实表达产物具有天然ｔＰＡ分子的免疫原性。

缬沙坦联合前列地尔治疗慢性肾小球肾炎的疗效及对肾功能、血流变学、t-PA和PAI-1的影响

目的探究缬沙坦联合前列地尔治疗慢性肾小球肾炎(CGN)的临床疗效及对患者肾功能、血流变学指标、血清组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤维蛋白溶解酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的影响。方法选取东海县人民医院2015年1月至2016年12月收治的80例CGN患者,并依据治疗方式的不同分为观察组(n=40)和对照组(n=40)。观察组采取缬沙坦联合前列地尔疗法,对照组仅给予缬沙坦治疗。两组均以4周为一个疗程,且连续治疗两个疗程。评价两组患者临床疗效,测定并比较两组患者治疗前后肾功能、血流变学及t-PA、PAI-1等水平。结果观察组患者的治疗总有效率为92.5%,明显高于对照组的75.0%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患者的尿蛋白量(Upro)水平为(1.02±0.36)g/24 h,血肌酐(SCr)水平为(135.45±31.45)μmol/L,尿素氮(BUN)水平为(10.72±2.98)mmol/L,尿红细胞计数为(16.34±6.98)个/HP,对照组分别为(1.45±0.34)g/24 h、(168.76±29.46)μmol/L、(12.12±3.12)mmol/L、(26.92±9.59)个/HP,均较治疗前显著下降,且观察组显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);治疗后,观察组患者的全血高切黏度为(3.23±1.27)mPa·s,全血低切黏度为(7.51±1.55)mPa·s,t-PA水平为(5.64±1.07)μmol/L,PAI-1水平为(27.65±4.60)μmol/L,对照组分别为(3.98±1.41)mPa·s、(8.47±1.62)mPa·s、(4.43±1.02)μmol/L、(38.74±5.06)μmol/L,两组均较治疗前显著下降,t-PA水平较治疗前显著升高,且组间比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论缬沙坦与前列地尔联用治疗CGN,可有效缓解患者肾功能状态,改善其血流速度,平衡机体血清t-PA和PAI-1水平,效果显著。

采用定点整合表达技术构建t-PA表达CHO工程细胞株

运用Flp InTM 定点整合表达系统构建表达组织型纤溶酶原激活剂 (tissue type plasminogenactivator ,t PA)的CHO工程细胞株。将pcDNA5 /FRT载体和携带t PA基因的 pJOD S载体用Hind/KpnI双酶切 ,再将回收的 2 .0kbt PAcDNA片段和pcDNA5 /FRT载体连接 ,构建 pcDNA5 /FRT/t PA质粒 ;应用Flp InTM定点整合表达系统 ,将t PAcDNA定点插入Flp lnTM CHO细胞基因组中的 1个单拷贝位点上 ,以潮霉素B筛选定点整合t PAcDNA的细胞克隆。经筛选和体外纤维蛋白溶解活性检测 ,获得了t PA表达水平为 15 0 0～ 2 0 0 0IU/ (10 6cells·day)的CHO工程细胞株。

经天幕裂孔切开术联合标准大骨瓣减压术对重型颅脑损伤患者免疫功能及血清t-PA、PAI-1的影响

目的:探究天幕裂孔切开术联合标准大骨瓣减压术对重型颅脑损伤患者免疫功能及血清组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)的影响。方法:选取我院收治的重型颅脑损伤患者80例,随机分为治疗组及对照组各40例;对照组采用标准大骨瓣减压术治疗,治疗组采用天幕裂孔切开术联合标准大骨瓣减压术治疗,观察两组术后颅内压变化,并对比治疗前后两组免疫功能及血清t-PA、PAI-1的变化及并发症发生情况。结果:治疗组术后治的颅内压和应激性溃疡、脑动脉梗死及脑积水等并发症发生率较对照组显著降低(P<0.05);两组术后1~7d血清和脑脊液t-PA、PAI-1水平均呈逐渐降低趋势,治疗组术后3d、7d时务低格及脑脊液t-PA、PAI-1水平均明显低于对照组(P<0.05);两组术后IgG、IgA、IgM水平和CD3^+、CD4^+、CD8^+T淋巴细胞比例明显高于术前,CD4^+/CD8^+值较术前明显下降(P<0.05)。结论:天幕裂孔切开术联合标准大骨瓣减压术治疗重型颅脑损伤患者疗效确切,对患者免疫功能及t-PA、PAI-1影响小,术后并发症发生率低,疗效确切。

重型颅脑损伤患者血清、脑脊液中t-PA、PAI-1的临床意义研究

目的探讨重型颅脑损伤后的血清及脑脊液中t-PA和PAI-1的变化及临床意义。方法动态观察50例重型颅脑损伤及50例轻型颅脑损伤患者血清及脑脊液中t-PA和PAI-1,进行不同的分组比较分析。结果重型颅脑损伤组脑脊液及血清t-PA、PAI-1在伤后24h、3d、1周、2周和3周均明显高于对照组(P<0.01)。GCS(3～5分)组脑脊液及血清中此2项指标在伤后各阶段明显高于GCS(6～8分)组,两组差异有统计学意义(P<0.01)。重型颅脑损伤预后良好组(n=28例)脑脊液及血清t-PA、PAI-1伤后各阶段均明显低于预后恶劣组(n=22例),两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论重型颅脑损伤后t-PA、PAI-1的变化可以反映出脑实质损伤的严重程度,同时与预后呈负相关。临床上通过对重型颅脑损伤患者脑脊液及血清t-PA、PAI-1的检测,可以评估患者病情的严重程度及预后,在临床中有重要意义。

电针对急性脑梗死大鼠血浆t-PA和PAI-1含量的影响

目的:研究电针对急性脑梗死大鼠血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)含量的影响。方法:40只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组及电针组各10只,模型组及电针组大鼠制成脑梗死模型;假手术组手术步骤同前2组,但不线栓;正常组不作任何处理。造模成功后,4组大鼠均同步喂养,电针组大鼠于造模成功后即刻给予电针百会、水沟穴,每天1次,30min。治疗5d后,4组大鼠均采用ELISA法检测血浆t-PA及PAI-1含量。结果:与正常组及假手术组比较,模型组及电针组大鼠血浆t-PA、PAI-1含量均显著升高(P<0.01),但电针组低于模型组(P<0.05,0.01)。结论:电针能显著降低急性脑梗死大鼠血浆t-PA、PAI-1含量,调节机体纤溶系统活性,改善梗死区域的血液循环,促进功能恢复。

t-PA、PAI活性测定在早期糖尿病肾病临床中的意义

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者及糖尿病肾病(DN)患者中尿白蛋白排泄率(UAER)与血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)活性的相关性。方法选择60例T2DM病人,根据UAER分为单纯糖尿病(DMa)组、微量白蛋白尿组(DMb)和临床蛋白尿组(DMc)。此外,还选择了30例健康人作为对照组。采用发色底物显色法测定血浆t-PA和PAI的活性,并对其相关性进行统计分析。结果(1)对照组、DMa组、DMb组和DMc组血浆t-PA活性递减,PAI的活性递增,各组比较有显著性差异(P<0.01)。(2)t-PA与UAER呈负相关(r=0.615,P=0.000),PAI和UAER呈正相关(r=0.721,P=0.000)。结论DN早期即有纤溶活性低下;t-PA和PAI可能作为DN肾脏损害程度的佐证,对指导临床用药以缓解或延迟DN的发生具有重要意义。

Ⅱ型糖尿病血浆PAI-1、t-PA检测的意义和结果评价

目的:通过对Ⅱ型糖尿病患者分组(伴血管病变组、胰岛素抵抗组、胰岛素抵抗伴血管病变组、Ⅱ型糖尿病组)检测PAI-1、t-PA抗原及活性,并计算抗原比和活性比,以评价各检测指标的临床价值。方法:采用ELISA法检测PAI-1及t-PA抗原,采用发色底物法检测PAl-1、t-PA活性。结果:189例标本总体患病组及分组后各组的PAI-1活性、t-PA活性及t-PA活性/PAI-1活性比值与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。患病组间除t-PA抗原,其余检测显示胰岛素抵抗组、胰岛素抵抗组伴血管病变组与Ⅱ型糖尿病组存在显著性差异(P<0.05)。结论:在上述检测指标中t-PA活性、PAI-1活性反映血管病变的发生较敏感,t PA/PAI-1的活性比值更具临床应用价值。

里氏木霉(Trichoderma reesei)306产组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)液体发酵条件的优化

采用正交设计和响应面分析等实验方法对基因工程菌株里氏木霉 (Trichodermareesei)30 6产组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)的液体发酵条件进行了优化。确定了适宜的培养基配方和最佳发酵工艺条件。在优化发酵条件下 ,摇瓶液体发酵液中的t PA酶活力达 3386 91IU/mL ,比初始发酵条件下酶活力提高上千倍。

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)与绿色荧光蛋白(GFP)在转基因烟草中的融合表达

构建人组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)与绿色荧光蛋白 (GFP)融合表达的植物表达载体pCA130 2NSF tPA。将重组载体转入根瘤农杆菌GV310 1中 ,通过叶圆盘法转化烟草。转化植株经PCR鉴定整合有t PA基因 ,通过荧光显微镜可检测到绿色荧光蛋白 (GFP)的表达。

螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响

目的研究螺旋藻激酶(Spirulina kinase,SPK)对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响,探讨其抗血栓作用机制,为开发新型溶栓药物提供理论依据。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立肾上腺素(Adr)损伤模型加入不同浓度的SPK,并以肝素(Hep)为阳性对照,与空白组对照,经过12,24,48 h后,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经凝胶电泳分离后,凝胶图像分析仪照相和扫描,测定各组t-PAmRNA、PAI-1mRNA与内参基因三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA的相对表达量。结果在Adr损伤模型中,2 mg/ml SPK可以上调t-PAmRNA表达,超大剂量SPK降低t-PAmRNA表达。SPK还可以随着剂量的增加明显的抑制PAI-1mRNA的表达,效果强于大剂量的肝素。结论 SPK可能通过小部分活化t-PAmRNA的表达,抑制PAI-1mRNA的表达,从而达到抗血栓的作用。

卡维地洛及TNF-α对内皮细胞释放t-PA和PAI-1的影响

目的 研究卡维地洛及肿瘤坏死因子α(TNF α)对内皮细胞分泌组织纤溶酶原激活物 (t PA)和纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)的影响。方法 培养内皮细胞株 (ECV3 0 4) ,分为TNF α刺激组 ,培养基中TNF α加至终浓度为 5、10、2 5、5 0、10 0ng/ml;卡维地洛干预组 ,培养基中加TNF α (5 0ng/ml)后加入卡维地洛 ,终浓度为 2 0、5 0、10 0、2 0 0nmol/L ,2 4h后测定上清中的组织纤溶酶原激活物 (t PA)和纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)的含量。结果 内皮细胞在TNF α刺激 2 4h后 ,其分泌的PAI 1抗原含量与对照组比有明显升高 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,而两组间t PA含量无明显差异 (P >0 0 5 )。而卡维地洛干预组却显著降低PAI 1(P <0 0 5 ) ,对t PA含量无明显作用 (P >0 0 5 )。结论 TNF α对内皮细胞株分泌的PAI 1有显著的升高作用 ,而对t PA无显著影响 ;用卡维地洛干预后 ,PAI 1显著降低 ,t PA含量无明显改变。

t-PA cDNA在CHO细胞中的高效稳定表达

我们曾报道t-PA mRNA非翻译区序列对其表达有明显的抑制作用,在此基础上,通过对5′-UTR及3′-UTR的改造,使t-PA在COS-7细胞中的表达水平提高30倍左右。将t-PA表达质粒用电击法转染中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株(CHO-dhfr),经过混合加压及筛选,在CHO细胞中高效表达了t-PA,表达水平达到5000～6000 IU/10~6细胞/24hr。重组t-PA具有与天然t-PA相同的分子量及酶活性。经过8个月连续传代,表达水平未下降,表明细胞株是稳定的,其主要指标均符合工程细胞株的要求。