氧化锌纳米颗粒光催化降解T-2毒素性能分析

为了利用光催化技术实现T-2毒素的高效、绿色降解,本研究采用绿色温和的溶剂水热法制备出结晶度高、分散性良好的0D ZnO纳米颗粒光催化材料,并通过高分辨透射电子显微镜、瞬态光电流响应等表征手段对其性质以及光催化降解T-2毒素性能、影响因素和机理进行探究。结果表明:成功制备得到平均粒径约为43.23 nm的ZnO纳米颗粒,经条件优化后可以在240 min内通过光催化降解去除超过95%初始质量浓度为5μg/mL的T-2毒素,降解动力学常数达0.0299μg/(mL·min),催化剂最佳质量浓度为0.5 mg/mL,最佳适用体系的pH值为5~9。光电表征结果确定了ZnO具有良好的光吸收和响应性能以及电荷分离性能,并确定羟自由基在T-2毒素降解中起主导作用。本实验结果可为相关领域绿色高效降解、转化和去除T-2毒素提供有效理论参考和技术支持。

应用于原代T细胞酪氨酸磷酸化蛋白质组的高灵敏度分析方法

酪氨酸磷酸化在T细胞的信号转导过程中发挥着重要的作用,然而其丰度较低,鉴定困难。生物组织样本中分离获得的原代T细胞数量较少,培养和扩增的难度较大,因而常使用永生化细胞系来研究T细胞的酪氨酸磷酸化介导的信号转导过程,这通常会导致获得与原代T细胞相差较大的结论。因此,本研究发展了一种解析原代T细胞酪氨酸磷酸化修饰信号的高灵敏度的蛋白质组学方法。首先,针对原代T细胞数量有限的问题,本研究优化了一套从小鼠脾脏中分离、活化和扩增T细胞的完整流程,第4天时T细胞数量扩增到7倍以上;其次,针对酪氨酸磷酸化修饰丰度较低、不易被质谱检测的难题,本研究利用SH2超亲体(SH2-superbinder)亲和富集和固定化钛离子亲和色谱(Ti^(4+)-IMAC)技术对抗CD3和抗CD28单克隆抗体共刺激条件下的原代T细胞多肽样品进行了酪氨酸磷酸化多肽富集,并结合纳升液相色谱-串联质谱(nanoLC-MS/MS)进行解析。最终成功从1 mg蛋白质中鉴定到282个酪氨酸磷酸化位点,其中包含T细胞受体膜蛋白CD3胞内区的免疫受体酪氨酸激活序列(ITAM)上的多个酪氨酸磷酸化位点,以及信号转导相关蛋白ZAP70、LAT、VAV1等的重要位点信息。综上,本研究发展了一套深度解析原代T细胞中的酪氨酸磷酸化修饰的高灵敏度蛋白质组学分析流程,有望应用于绘制更接近生理状态下的信号转导网络。

高效液相色谱法同时检测食品中的碱性橙、碱性嫩黄O和碱性桃红T染料含量

建立了食品中碱性橙、碱性嫩黄O和碱性桃红T染料含量的高效液相色谱检测方法。样品经碱化甲醇提取,提取液在碱性条件下用二氯甲烷萃取,浓缩后用酸化甲醇溶解并用甲醇饱和正己烷萃取净化后经高效液相色谱分离、检测。本方法检测限分别为碱性橙0.02mg/kg、碱性嫩黄O0.03mg/kg、碱性桃红T0.004mg/kg。6种食品样品加标回收率实验所得回收率为72.3%～96.5%,相对标准偏差(RSD)为0.3%～8.8%(n=6),三种染料在0.05～2.5μg/ml浓度范围内均呈良好的线性关系,线性回归系数(r)均大于0.9998。

t-BAM BP萃取色谱法分离铷、铯的研究

对ｔ Ｂ Ａ Ｍ Ｂ Ｐ萃取色谱法分离铷、铯进行了研究。采用萃取色谱柱实现了铷、铯的完全分离。建立了简便、高效的铷、铯放化分离流程，对铯的去污系数大于 １０６，铷的回收率大于 ８０％ 。

气相色谱仪宽口径毛细管柱检测谷物中T-2毒素方法

目的 测定谷物中 T- 2毒素含量。方法 用 GC- 9A宽口径毛细管柱测定面粉中 T- 2毒素的含量。结果 该方法的回收率 2 0 0 ng为 86 .31%± 1.40 % ,5 0 0 ng为 89.2 2 %± 2 .0 4%。结论 方法操作简单 ,回收率高 ,最低检出量为 30 ng,线性范围 5 0～ 2 0 0 0

鸡T淋巴细胞和B淋巴细胞分离纯化方法的建立

将鸡胸腺和腔上囊淋巴组织剪碎后与PBS磷酸盐缓冲液混合,通过密度梯度离心和尼龙棉柱过滤对T、B淋巴细胞进行了分离纯化。纯化的T、B淋巴细胞以FITC标记的鼠抗鸡CD4单抗,RPE标记的鼠抗鸡CD8单抗,FITC标记的鼠抗鸡Bu-1单抗染色,用流式细胞仪分类检测其纯度,用台盼蓝排斥试验检测T、B淋巴细胞的活力。结果表明,以本研究建立的方法分离到的T、B淋巴细胞纯度较高(均达90%以上),细胞活力强,与流式细胞仪分选的效果相当,且经济简便。

免疫亲和柱净化-液相色谱质谱法对粮谷中T-2与HT-2毒素的测定

建立了免疫亲和柱净化-液相色谱质谱法同时检测粮谷中T-2和HT-2毒素的方法。样品经乙腈-水(体积比80∶20)混合溶剂提取,免疫亲和柱(Bond Elut(Mycotoxin)净化后,采用液相色谱质谱(HPLC-MS)测定。T-2和HT-2毒素在0.005～0.5mg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9990;在0.01、0.05、0.10、0.2mg/kg的加标水平下,2种毒素的平均回收率为76%～90%,相对标准偏差为2.8%～7.6%;T-2和HT-2毒素的检出限(S/N=3)分别为0.001、0.002mg/kg。

膀胱癌T-24细胞系中细胞角蛋白20的分离纯化及鉴定

目的 分离纯化细胞角蛋白 2 0 (Cytokeratin2 0 ,CK2 0 )并加以鉴定 ,为进一步研制抗CK2 0单克隆抗体奠定基础。方法 培养人膀胱肿瘤T 2 4细胞系并用免疫组化检测CK2 0表达 ,然后大量培养并收集细胞 ,超声波细胞粉碎后 ,先用萃取、高速离心、透析等方式进行蛋白初分离 ,然后利用以DE5 2为介质的阴离子交换层析分离纯化CK2 0蛋白 ,以电泳示踪 ,最后采用SDS PAGE、HLPC和Western blotting加以鉴定。结果 在阴离子交换层析时出现 3组洗脱峰 ,CK2 0主要存在第二组峰中 ,该峰在SDS PAGE和Western blotting上均呈现单一条带 ,HLPC分析显示CK2 0蛋白主峰呈正态分布 ,仅见一个较低峰度的蛋白质杂峰。结论 该纯化方法简便、可行、效果好、获得的蛋白纯度高 ,提取的蛋白可确认为CK2 0并且具有较高的免疫生物活性。

固相萃取-超高效液相色谱-质谱联用技术检测大鼠血浆中T-2毒素及其主要代谢产物

应用固相萃取-超高效液相色谱-三重四极杆-线性离子阱串联质谱技术,建立了高灵敏度的大鼠血浆中单端孢霉烯族(T-2)毒素及其5种主要代谢物的分析方法。在优化的固相萃取条件下,大鼠血浆经HLB固相萃取柱净化富集后,以XDB-C18色谱柱(50 mm×4.6 mm,1.8μm)分离,以5 mmol/L乙酸铵溶液和甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱,以玉米赤霉酮为内标,在正离子多反应监测模式下对各分析物进行定性和定量分析。各分析物在0.1～500.0μg/L范围内线性良好(R2>0.997);检出限介于0.02～0.3μg/L之间;加标回收率为93.5%～120.3%;相对标准偏差均小于13%。本方法快速、重现性好、灵敏度高,已成功应用于T-2毒素中毒的溯源性研究。

宽口径毛细管柱GC测定鸡粪中T-2毒素代谢产物的方法

目的测定鸡粪中Ｔ－２四醇、Ｔ－２三醇、Ｔ－２毒素、ＨＴ－２毒素的含量。方法人工染毒，化学提取，ＴＢＴ衍生，宽田径毛细管柱ＧＣ测定，投予剂量不同回收率略有差异。结果该方法的回收率 ２００ｎｇＴ－２四醇８３．１％～９２． ８％；Ｔ－２三醇 ８３． ６％～９０． ６％；Ｔ－２毒素、ＨＴ－２毒素 ７９． ６％～９０． ６％。结论方法的回收率高，操作简单，可供研究Ｔ－２毒素代谢机制应用。

免疫亲和柱-高效液相色谱荧光检测法测定饲料中的T-2毒素

建立了免疫亲和柱净化-柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测器测定饲饲料中T-2毒素含量的方法。样品经甲醇-水(体积比80:20)提取,通过免疫亲和柱(IAC)净化,以1-蒽腈(1-anthroylnitrilc,1-AN)为衍生化试剂、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)为催化利进行衍生,C1 8色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量。结果表明:T-2毒素的线性范围为10～200μg/L,加标回收率为76.9%～92.1%,相对标准偏差(RSD)小于6%。该方法可用于饲料中T-2毒素的测定。

人参皂苷Rd酸水解产物的RRLC-Q-TOFMS研究

利用高分离快速液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(RRLC-Q-TOF MS)联用技术对人参皂苷Rd酸水解产物进行了分析研究。通过化合物的保留时间、精确分子质量信息、串联质谱碎片信息,分析鉴定了7种Rd酸水解产物,分别为C-Y1、C-Y2、F2、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1和Rg5。串联质谱分析水解产物获得了原人参二醇苷元特征离子m/z459(20(S)-Rg3,20(R)-Rg3,F2),Δ20(21)或Δ20(22)位脱水原人参二醇型苷元特征离子m/z441(Rk1,Rg5),C-24、C-25位水合原人参二醇苷元特征离子m/z 477(C-Y1和C-Y2)。研究表明,人参皂苷Rd在酸性条件下发生化学转化,包括取代糖基的水解反应,Δ20(21)或Δ20(22)位脱水反应和C-24,C-25位水合加成反应。本实验可为研究人参在配位方面的化学物质基础提供方法参考。

高效液相色谱-串联质谱法测定3种水产品中的T-2毒素与HT-2毒素

建立高效液相色谱-串联质谱定量快速检测罗非鱼、南美白对虾和黄金贝中的T-2毒素与HT-2毒素方法。以10 mL乙酸乙酯作为提取溶剂,振荡提取,无水硫酸钠除水,定量移取5 mL提取液氮气吹干后用1 mL含有0.1%甲酸的甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液（3∶7,V/V）复溶,正己烷脱脂净化,基质匹配法外标定量。3种水产品中T-2毒素和HT-2毒素的检出限分别为2μg/kg和4μg/kg。T-2毒素质量浓度为2～100 ng/mL,HT-2毒素质量浓度为4～200 ng/mL,范围内线性良好。在3种样本中进行3个水平添加实验（n=6）,T-2毒素回收率为84.3%～109.9%,HT-2毒素的回收率为90.9%～103.2%。T-2毒素的相对标准偏差为2.0%～8.7%,HT-2毒素的相对标准偏差为2.6%～10.6%。本方法简便快速、准确度好、精密度高,适用于3种代表性水产品中T-2与HT-2毒素的同时检测。

化妆品中氯胺T的超声辅助水解/液相色谱检测及质谱确证

建立了化妆品中氯胺T的超声辅助水解/高效液相色谱分析方法,并采用液相色谱-串联质谱进行确证。将不同类型(膏霜、水剂、散粉、香波、牙膏)化妆品样品分散于盐酸溶液中,超声波辅助提取并水解氯胺T,水解液用乙醚萃取后,采用高效液相色谱分离分析,以Agilent Extend C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-水为流动相,等度洗脱,二极管阵列检测器检测,外标法定量;采用液相色谱-串联质谱法进一步确证分析,Agilent Poroshell C18(4.6 mm×100 mm,2.7μm)色谱柱分离,电喷雾正离子模式电离,多反应监测模式检测。结果表明,该法对氯胺T的定量下限为16.5 mg/kg,线性范围为1.0～500.0 mg/L,相关系数(r2)为0.999 9。在低、中、高3种加标水平的回收率为81%～103%,相对标准偏差为1.0%～7.4%。该方法简便、快速、准确、灵敏,适用于化妆品中氯胺T的检测。

畜禽产品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和T-2毒素残留分析

目的:分析市售畜禽产品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和T-2毒素的残留情况。方法:试样经乙腈提取、正己烷脱脂、HLB柱净化,用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)测定,外标法定量。结果:所有受检猪背脊肌肉、猪肝、猪肾、鸡胸肉、鸡腿肉、鸡翅肉和肉制品样品中均未发现DON残留,猪背脊脂肪样品中DON残留阳性率为28.75%,最高残留量为0.4265μg/kg;所有受检猪肝、猪肾和肉制品样品中均未发现T-2毒素残留,猪背脊肌肉、猪背脊脂肪、鸡胸肉、鸡腿肉、鸡翅肉样品中T-2毒素残留阳性率范围为8.33%～57.14%,最高残留量范围为0.0704～0.4515μg/kg。结论:在部分受检畜禽样品中检测到了DON和T-2毒素痕量残留。

SDE-GC-MS与P&T-TD-GC-MS提取分析不同香型凤凰单丛茶香气比较

分别采用同时蒸馏萃取(simultaneous distillation extraction,SDE)法和吹扫捕集热脱附解吸(purge and trap thermal desorption,P&T-TD)法提取黄栀香和肉桂香两种香型凤凰单丛茶的香气成分并用气相色谱-质谱进行分析比较。结果表明,2种方法提取的香气成分和相对含量比例有很大差异,两者各有优劣,相互补充,结合分析更加完整,更有利于准确地进行香型分类,并发现P&T-TD法有更大的运用空间。SDE法提取的萜烯类化合物较多,脂肪族和芳香族的化合物较少,不同香型的区别主要是成分的相对含量比例;P&T-TD法提取得到的成分种类多,不同香型的茶区别较大。通过萜酯指数可得P&T-TD法提取的香气更为清香,SDE法提取的香气较为浓烈,但两者都体现了凤凰茶清高持久的幽香特性。SDE法的高温加热可能引起成分的改变,P&T-TD提取法的成分较能真实地反应茶汤冲泡的特点。结合2种方法分析得出,黄栀香与肉桂香茶的区别明显,黄栀香茶以荜澄茄醇、橙花叔醇等为主,并特有丙酸芳樟酯、δ-杜松烯、萜品油烯等成分;肉桂香茶是吲哚、δ-壬内酯、苯乙腈相对含量多,且含有苯乙醇、苯甲醇、1,5,8-对-薄荷三烯、戊醛等特有成分。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食品中碱性橙、碱性嫩黄O和碱性桃红T

本文建立了同时测定食品中碱性橙、碱性嫩黄O和碱性桃红的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC～MS／MS）检测方法。样品经碱化甲醇提取、二氯甲烷萃取、浓缩、酸化甲醇溶解和甲醇饱和正己烷溶液萃取净化后进行测定。本方法检出限分别为碱性橙0．6μg／kg、碱性嫩黄O0．3μg／kg、碱性桃红T0．7μg／kg。六种食品样品的回收率为72．1％～91．1％，相对标准偏差（RSD）为2．4％～9．1％（n=6），三种染料在0．01～0．5μg／mL范围内呈良好的线性关系，线性回归系数r均大于0．9950。

基于高效液相色谱-串级质谱法研究肝微粒体中T-2毒素代谢的种属差异性

目的比较T-2毒素在不同种属动物肝微粒体中代谢的差异性。方法将T-2毒素与小鼠、大鼠、比格犬、猴和人肝微粒体37℃孵育不同时间,孵育液经蛋白沉淀后采用高效液相色谱-质谱法检测,比较T-2毒素在不同种属动物中代谢动力学参数及代谢产物生成量的差异。结果 T-2毒素在人肝微粒体中半衰期(t_(1/2))<1 mim,在小鼠和猴肝微粒体中为2~4 min,在比格犬肝微粒体中为13 min,在大鼠肝微粒体中为39 min。5种动物对T-2毒素的肝清除能力可分为3组,即人、比格犬和大鼠为1组;猴和小鼠各为1组其中小鼠组对T-2毒素的肝清除率是人、比格犬和大鼠组的3~4倍不同种属的肝微粒体对T-2毒素的亲和力存在显著差异,其中T-2毒素在小鼠肝微粒体中的亲和力最高,其余依次为人、比格犬、大鼠和猴。酶的转化速率以在猴肝微粒体中最大,大鼠和比格犬中略小,而人和小鼠肝微粒体中酶转化速率仅为猴肝微粒体中转化速率的1/10~6。T-2毒素在猴肝微粒体中主要代谢产物为3'-OH-T-2和新茄病镰刀菌烯醇,在人和大鼠肝微粒体中为T-2三醇和HT-2毒素,在比格犬肝微粒体中以HT-2毒素和3'-OH-T-2毒素为主,在小鼠中则以T-2三醇和3'-OH-T-2毒素为主。T-2毒素在小鼠、大鼠、比格犬和人肝微粒体中主要以水解代谢转化为主,而在猴肝微粒体中则以羟基化代谢为主。结论 T-2毒素的代谢参数、代谢产物及其生成量、代谢途径均存在种属差异性。

高效液相色谱法检测食品中的碱性桃红T染料含量

本文建立了食品中碱性桃红T染料含量的高效液相色谱检测方法。样品经碱化甲醇提取,在碱性条件下用聚酰胺固相萃取小柱富集、净化,酸化甲醇洗脱后经高效液相色谱仪分离、检测。该方法的碱性桃红T检测限为0.004mg/kg。6种食品样品回收率为76.1%～96.5%,相对标准偏差(RSDs)为0.8%～7.6%(n=6),在0.1～5μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,线性回归系数r=0.9999。

疏水层析在分离纯化里氏木霉重组t-PA中的应用

疏水层析是一种有效的分离纯化手段,本文采用Octyl Sepharose和Butyl Sepharose两种疏水层析填料对里氏木霉表达的t-PA的提纯操作条件进行了初步研究。结果表明,选用Butyl Sepharose FF填料,上样量10mL(蛋白含量4.1mg/mL),用15%(NH4)2SO4的PBS以2mL/min的流速进行洗脱时,回收的酶的比活性较大,为2959.54U/mg,纯化倍数为5.16,回收率为7.12%。