Nrf2激动剂t-BHQ在预防术后腹腔粘连形成中的价值及其可能的机制

目的探究Nrf2激动剂t-BHQ在预防术后腹腔粘连形成中的价值及其可能的机制。方法将40只SD大鼠随机分为Sham组(仅行开关腹手术)、Control组(行腹腔粘连造模)、HA组(行腹腔粘连造模,关腹前在粘连部位均匀涂抹1 mL透明质酸钠凝胶)、t-BHQ1组和t-BHQ2组(行腹腔粘连造模,术后分别予以25、50 mg/kg t-BHQ灌胃)。通过Nair's评分评估各组粘连形成的严重程度,进一步对术后腹腔粘连组织行HE染色、Nrf2免疫组化染色,并检测组织中MDA及SOD的表达水平。结果与对照组相比,t-BHQ1组和t-BHQ2组的Nair's评分、HE染色炎症评分均降低,Nrf2免疫组化评分升高,粘连组织中SOD的表达水平上升,而MDA的表达水平降低(P<0.05)。结论 Nrf2激动剂t-BHQ可通过降低炎症反应、减轻氧化应激反应抑制术后腹腔粘连形成。

Nrf2-自噬通路在大鼠切口痛-瑞芬太尼诱导痛觉过敏中的作用

目的探讨切口痛-瑞芬太尼痛敏模型大鼠脊髓内核因子E2相关因子2(Nrf2)-自噬通路在痛觉过敏中的作用。方法 24只雄性SD大鼠依随机数字表法分为3组:盐水+切口痛组(Ⅰ组)、切口痛-瑞芬太尼痛敏组(RI组)、Nrf2激动剂t-BHQ组(t-BHQ组),每组8只。Ⅰ组和RI组建模前分别经尾静脉输注生理盐水0.1 m L/(kg·min)和瑞芬太尼1μg/(kg·min),连续输注60 min。t-BHQ组于输注瑞芬太尼前0.5 h腹腔注射t-BHQ(15 mg/kg),12 h 1次,连续4次,余处理同RI组。3组输注同时于双侧后足建立Brennan切口痛模型。分别于输注前24 h(T_0)、输注后2 h(T_1)、6 h(T_2)、24 h(T_3)和48 h(T_4)测定大鼠机械刺激缩足阈值(PWT)及热刺激缩足潜伏期(PWL)。测试完毕后将大鼠处死,取L4~6脊髓节段,Western blot法测定脊髓自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Beclin-1、Nrf2及其下游分子血红素氧化酶1(HO-1)表达水平。结果随着处理时间的延长,3组PWT、PWL呈总体下降的趋势。从T_1开始,与Ⅰ组相比,RI组PWT下降、PWL缩短,T_4时LC3Ⅱ、Beclin-1表达升高、Nrf2、HO-1蛋白表达降低(P<0.05);与RI组相比,tBHQ组PWT升高、PWL延长(P<0.05),同时Nrf2、HO-1、LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均明显升高(P<0.05)。结论 Nrf2-自噬通路的激活可明显改善切口痛-瑞芬太尼诱导的痛觉过敏。

甲嘎松汤对肝损伤的保护作用研究

目的:研究藏药甲嘎松汤对整体动物急慢性肝损伤模型及体外L02细胞氧化应激损伤模型的保护作用,并进行初步机制研究。方法:制备5种小鼠急性肝损伤模型、1种大鼠慢性肝损伤模型,观察甲嘎松汤对动物血清AST、ALT活性及四氯化碳致小鼠急性肝损伤的肝组织中CAT、GSH活性;采用RT-PCR技术,测定慢性酒精性肝损伤肝脏缺氧诱导因子-1 mRNA的表达。先给予Nrf2激活剂t-BHQ干预12h,再给予甲嘎松汤的含药血清作用12h后,利用终浓度为100mU/ml的葡萄糖氧化酶(Glucose Oxi-dase,GO)诱导人肝细胞L02氧化应激损伤模型,检测细胞培养上清液中AST、ALT活性;四甲基氮唑(MTT)比色法检测细胞活力。结果:在6种肝损伤动物中均可见甲嘎松汤在0.66g/kg剂量下的AST、ALT活性比模型组显著降低;显著升高四氯化碳引起的小鼠急性肝损伤模型中抗氧化酶CAT、抗氧化剂GSH活性;在一定程度上降低模型组HIF-1α因子mRNA表达,但与模型组比较无统计学差异。在细胞模型中,20%甲嘎松汤含药血清组与t-BHQ组均能于不同时间点显著升高细胞活力;显著降低AST,ALT活性;与t-BHQ组比较,20%甲嘎松汤含药血清+t-BHQ组于不同时间点上述指标有明显改善,并且对单用t-BHQ作用8小时后表现出的肝细胞活力降低有改善作用。结论:甲嘎松汤有一定的保肝作用,与Nrf2激活剂t-BHQ有协同效应,能纠正Nrf2持续激活导致的细胞损伤,说明甲嘎松汤保肝作用可能与维持Nrf2在细胞内的动态平衡有关。

叔丁基对苯二酚对糖尿病大鼠肾缺血再灌注时DJ-1/Nrf2通路的影响

目的 评价叔丁基对苯二酚( t-BHQ)对糖尿病大鼠肾缺血再灌注时DJ-1∕核因子E2相关因子(Nrf2)通路的影响.方法 SPF级健康雄性SD大鼠40只,体重200~220 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、糖尿病组(D组)、糖尿病肾缺血再灌注组(I∕R组)和t-BHQ组(T组).制备糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤模型,T组于术前24 h分3次,每次间隔8 h,腹腔注射t-BHQ 50 mg∕kg,D组和I∕R组给予等容量生理盐水.于再灌注24 h时心尖部采血,测定血清肌酐(Cr)、胱抑素C(Cys C)和β2微球蛋白(β2-MG)的浓度;随后处死大鼠取肾组织,光镜下观察形态学并行病理学评分;采用Western blot法检测DJ-1、Nrf2、血红素氧合酶1 ( HO-1)的表达.结果 与C组比较,D组、I∕R组和T组血清Cr、Cys C、β2-MG浓度和肾组织病理学评分升高,肾组织DJ-1、Nrf2和HO-1表达上调(P<0. 05);与D组和I∕R组比较,T组血清Cr、Cys C、β2-MG浓度和肾组织病理学评分降低,肾组织DJ-1、Nrf2和HO-1表达上调(P< 0. 05).结论 t-BHQ可通过激活DJ-1∕Nrf2通路减轻糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤.