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PRRSV tGP5基因克隆及pcDNA3.1-tGP5真核表达载体的构建
1
作者
陈佳
黄娟
+3 位作者
秦晓冰
杨瑞梅
温建新
单虎
《动物医学进展》
CSCD
2008年第5期25-27,共3页
根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)S1株ORF5基因的核苷酸序列设计一对特异性引物,用PCR扩增PRRSV GP5蛋白非中和性表位缺失的tGP5基因,将基因定向连接在真核表达载体pcDNA3.1的HindⅢ和EcoRⅠ多克隆位点之间,构建重组质粒...
根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)S1株ORF5基因的核苷酸序列设计一对特异性引物,用PCR扩增PRRSV GP5蛋白非中和性表位缺失的tGP5基因,将基因定向连接在真核表达载体pcDNA3.1的HindⅢ和EcoRⅠ多克隆位点之间,构建重组质粒pcDNA3.1-tGP5。转化DH5α感受态大肠埃希菌,提取质粒。重组质粒经PCR、双酶切鉴定及DNA序列测定,成功构建了pcDNA3.1-tGP5基因的重组体。
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关键词
PRRSV
非中和表位
tgp5
pcDNA3.1-
tgp5
下载PDF
职称材料
猪繁殖与呼吸综合征病毒截短GP5蛋白间接ELISA方法的建立
被引量:
3
2
作者
陈攀
郑芳园
李玉峰
《畜牧与兽医》
北大核心
2014年第4期36-40,共5页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染主要引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状,目前尚无有效的血清学检测方法评价猪群疫苗免疫或感染后抗体水平与免疫保护力之间的关系。为建立PRRSV GP5蛋白的ELISA方法,本研究选择GP5蛋白亲水区进行...
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染主要引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状,目前尚无有效的血清学检测方法评价猪群疫苗免疫或感染后抗体水平与免疫保护力之间的关系。为建立PRRSV GP5蛋白的ELISA方法,本研究选择GP5蛋白亲水区进行原核表达,以表达的重组蛋白tGP5为包被抗原建立了检测针对GP5蛋白抗体的ELISA方法,优化后反应条件为:抗原包被浓度2μg/mL,37℃包被2 h,5%脱脂乳37℃封闭2 h,待检血清稀释度1∶100,37℃作用1 h,二抗1∶20 000稀释,37℃作用45 min,37℃显色3 min,抗体临界值OD450nm≥0.22判为阳性,OD450nm<0.183判为阴性,介于两者之间为可疑。特异性和重复性试验证明,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪口蹄疫病毒血清抗体无交叉反应,批内、批间重复性较好。
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关键词
PRRSV
重组蛋白
tgp5
原核表达
间接ELISA
原文传递
题名
PRRSV tGP5基因克隆及pcDNA3.1-tGP5真核表达载体的构建
1
作者
陈佳
黄娟
秦晓冰
杨瑞梅
温建新
单虎
机构
青岛农业大学
出处
《动物医学进展》
CSCD
2008年第5期25-27,共3页
文摘
根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)S1株ORF5基因的核苷酸序列设计一对特异性引物,用PCR扩增PRRSV GP5蛋白非中和性表位缺失的tGP5基因,将基因定向连接在真核表达载体pcDNA3.1的HindⅢ和EcoRⅠ多克隆位点之间,构建重组质粒pcDNA3.1-tGP5。转化DH5α感受态大肠埃希菌,提取质粒。重组质粒经PCR、双酶切鉴定及DNA序列测定,成功构建了pcDNA3.1-tGP5基因的重组体。
关键词
PRRSV
非中和表位
tgp5
pcDNA3.1-
tgp5
Keywords
PRRSV
non-neutralization epitope
pcDNA3.1
tgp5
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
猪繁殖与呼吸综合征病毒截短GP5蛋白间接ELISA方法的建立
被引量:
3
2
作者
陈攀
郑芳园
李玉峰
机构
南京农业大学农业部细菌学重点开放实验室
出处
《畜牧与兽医》
北大核心
2014年第4期36-40,共5页
基金
公益性行业(农业)科研专项项目(200903036-10)
文摘
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染主要引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状,目前尚无有效的血清学检测方法评价猪群疫苗免疫或感染后抗体水平与免疫保护力之间的关系。为建立PRRSV GP5蛋白的ELISA方法,本研究选择GP5蛋白亲水区进行原核表达,以表达的重组蛋白tGP5为包被抗原建立了检测针对GP5蛋白抗体的ELISA方法,优化后反应条件为:抗原包被浓度2μg/mL,37℃包被2 h,5%脱脂乳37℃封闭2 h,待检血清稀释度1∶100,37℃作用1 h,二抗1∶20 000稀释,37℃作用45 min,37℃显色3 min,抗体临界值OD450nm≥0.22判为阳性,OD450nm<0.183判为阴性,介于两者之间为可疑。特异性和重复性试验证明,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪口蹄疫病毒血清抗体无交叉反应,批内、批间重复性较好。
关键词
PRRSV
重组蛋白
tgp5
原核表达
间接ELISA
Keywords
PRRSV
recombinant
tgp5
protein
prokaryotic expression
indirect ELISA
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PRRSV tGP5基因克隆及pcDNA3.1-tGP5真核表达载体的构建
陈佳
黄娟
秦晓冰
杨瑞梅
温建新
单虎
《动物医学进展》
CSCD
2008
0
下载PDF
职称材料
2
猪繁殖与呼吸综合征病毒截短GP5蛋白间接ELISA方法的建立
陈攀
郑芳园
李玉峰
《畜牧与兽医》
北大核心
2014
3
原文传递
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