基于RAW264.7细胞模型的槲皮万寿菊素与叶黄素协同改善急性肺损伤的作用机制

为解析槲皮万寿菊素、槲皮素与叶黄素单独处理以及联合处理对急性肺损伤的作用机制,以脂多糖诱导构建RAW264.7细胞炎症模型,以一氧化氮(nitric oxide,NO)相对含量为评价指标,采用联合指数法确定槲皮万寿菊素与叶黄素以及槲皮素与叶黄素的最佳复配比例;分析比较槲皮万寿菊素、槲皮素与叶黄素单独及联合处理对RAW264.7细胞中炎症因子(肿瘤坏死因子-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6)含量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性以及谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响;采用免疫印迹法测定核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路中p65、p50以及沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)的相对表达量。结果表明,槲皮万寿菊素与叶黄素高剂量3∶1(30μg/mL+10μg/mL)复配能够最大程度降低RAW264.7细胞中的NO相对含量。二者单独及联合作用均能通过降低炎症因子、丙二醛含量,提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽还原酶活性,下调NF-κB p65、p50以及NLRP3表达水平并上调SIRT1、Nrf2蛋白相对表达量发挥改善急性肺损伤的作用,且联合处理效果优于单独处理组。

抗肿瘤免疫核糖核酸诱生细胞毒因子的研究

应用人肺癌细胞制备免疫核糖核酸(i-RNA)再用i-RNA致敏家兔诱生细胞毒因子,通过结晶紫染色法检测其细胞毒因子对L929细胞的杀伤作用。结果,用抗肿瘤细胞i-RNA能诱生杀伤作用较强的细胞毒因子。血清稀释1:800时,仍具有50％以上的杀伤作用。

万寿菊悬浮培养细胞生产游离叶黄素工艺的研究

建立万寿菊悬浮培养细胞生产游离叶黄素的方法。以万寿菊花瓣为外植体构建得到能够生产游离叶黄素的悬浮培养细胞系。研究细胞培养时间、光照和黑暗培养以及诱导子茉莉酸甲酯、水杨酸对细胞中游离叶黄素合成的影响,建立万寿菊悬浮培养细胞生产游离叶黄素的工艺。结果表明,万寿菊悬浮培养细胞中游离叶黄素的合成和细胞生物量的积累显示出相同的变化规律。在培养的第14 d,进入稳定期,细胞中游离叶黄素产率为1.29±0.09 mg/L,为第0天的8.48倍。培养14 d,光照培养细胞中游离叶黄素产率为暗培养细胞的5.7倍。分别添加茉莉酸甲酯和水杨酸对培养细胞生产游离叶黄素均无显著性影响。上述结果说明,细胞生产游离叶黄素与细胞生物量积累是偶联的。细胞最佳收获时间为生长的第14 d。光照能够显著促进细胞生产游离叶黄素。茉莉酸甲酯和水杨酸不能促进细胞中游离叶黄素的合成。

响应面优化孔雀草悬浮细胞总黄酮的提取工艺

以孔雀草叶片为外植体诱导愈伤组织并进行悬浮培养,测定了悬浮细胞的总黄酮含量。通过单因素实验及响应面分析,研究了固液比、乙醇浓度、提取温度和提取时间对黄酮产量的影响。实验结果表明,从孔雀草悬浮细胞中提取总黄酮的最佳优化工艺条件为:以72%乙醇为浸提溶剂,固液比1∶25g/m L,提取时间3.2h,提取温度59℃,在此条件下总黄酮得率理论值为21.49%,验证值为21.37%,验证值与理论值间的相对误差为0.12%。

超高效液相色谱法测定万寿菊悬浮培养细胞中的叶黄素

建立了超高效液相色谱快速测定万寿菊悬浮培养细胞中叶黄素的方法。样品冷冻干燥后,经甲醇溶液提取,采用Waters ACQUITY UPLCBEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.7μm）分离,柱温为25℃。以乙腈-甲醇（90∶10,v/v）（A）-水（B）为流动相,梯度洗脱,流速为0.4 m L/min。进样体积为5μL,检测波长为448 nm。在1.56-25 mg/L范围内,叶黄素的色谱峰面积与质量浓度之间具有良好的线性关系。采用该方法测定了实际样品中叶黄素的含量,并进行了3个水平的加标回收试验,其回收率为102%-105%,相对标准偏差（n=5）为0.11%-1.19%。该方法快速、操作简单,适合于分析植物培养细胞中叶黄素的含量和产率。

H2O2对孔雀草悬浮细胞中黄酮含量及抗氧化酶活性的影响

以孔雀草悬浮细胞为试材,在液体培养基中附加不同浓度的H2O2进行培养,研究H2O2对孔雀草悬浮细胞黄酮代谢、抗氧化酶活性的影响。结果表明:在H2O2浓度为0~10 mmol·L-1时,孔雀草悬浮细胞总黄酮含量均呈现上升趋势,其中10 mmol·L-1的H2O2处理细胞总黄酮含量最高,而高浓度H2O2处理时总黄酮含量均呈下降趋势。孔雀草悬浮细胞抗氧化酶活性变化也是随着H2O2浓度呈现先上升后下降的趋势,0~10 mmol·L-1范围内丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、过氧化物酶(POD)活性和脯氨酸含量显著增高,15~25 mmol·L-1范围内的MDA含量、SOD活性、CAT活性、POD活性和脯氨酸含量呈下降趋势。

NO、ROS对SO_2诱导的万寿菊保卫细胞凋亡的调控

一氧化氮（NO）和活性氧（ROS）均是非常重要的信号分子,然而其在二氧化硫（SO2）对观赏植物毒作用过程中可能的信号作用还不清楚.因此,本文以万寿菊叶片下表皮为材料,采用表皮条分析法研究了SO2胁迫引起的保卫细胞死亡和胞内NO、ROS水平变化情况.结果显示：SO2衍生物（终浓度0.4~4.0 mmol·L-1）处理能引起万寿菊叶片下表皮保卫细胞生理活性下降,死亡率增加,且存在剂量效应,细胞出现核固缩、核降解、核拉长等典型核凋亡特征.同时,保卫细胞内NO、ROS和Ca2＋水平显著升高（p〈0.05）.用不同浓度的NO干扰剂（NO合酶抑制剂L-NAME、硝酸还原酶抑制剂Na N3及NO清除剂c-PTIO）、ROS清除剂（CAT和As A）、钙离子干扰剂（Ca2＋螯合剂EGTA和Ca2＋通道抑制剂La Cl3）分别与2.0 mmol·L-1SO2衍生物同时处理后,保卫细胞死亡率及相对应的胞内NO、ROS、Ca2＋水平显著低于同期SO2衍生物单独处理组（p〈0.05）.在用As A、L-NAME分别与2.0 mmol·L-1SO2衍生物共同处理后,同时检测ROS、NO及Ca2＋含量,发现三者均显著低于SO2衍生物单独处理组;同理,用EGTA和2.0 mmol·L-1SO2衍生物共同处理后,尽管这时Ca2＋水平显著下降,但ROS和NO含量却降低不显著.这一结果表明,NO和ROS在Ca2＋的上游,且可能通过NO-Ca2＋或者NO-ROS-Ca2＋信号途径调节SO2诱导的万寿菊保卫细胞凋亡.

吉非替尼一线治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的评价吉非替尼一线治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效及不良反应。方法58例晚期NSCLC患者接受吉非替尼250mg／d治疗，连续用药至疾病进展或出现严重的不良反应。治疗2个月后进行疗效和不良反应分析。河南省安阳市肿瘤医院放疗三科同时对58例患者的肿瘤标本进行表皮生长因子受体（EGFR）基因状态检测。结果58例患者中完全缓解2例（3．4％），部分缓解16例（27．6％），疾病稳定24例（41．4％），疾病进展16例（36．5％），疾病控制率为72．4％。单因素分析结果显示临床获益和性别、组织学类型、吸烟史、EGFR突变状态显著相关（P〈0．05），而与临床分期无关。58例标本中30例EGFR为突变型。EGFR的突变率为51．7％。结论吉非替尼一线治疗NSCLC疗效较好，耐受性良好，可明显改善症状，提高患者生活质量。