雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎差异表达基因的呈现

构建了雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎间的抑制性差减杂交cDNA质粒文库。对原肠期739个 和尾芽期816个PCR阳性克隆进行斑点杂交,得到72个原肠期和98个尾芽期斑点杂交阳性克隆。测序和基因 数据库比对结果表明:72个原肠期斑点杂交阳性克隆中,包括19个已知基因的cDNA片段和31个没有同源性的 cDNA片段;98个尾芽期斑点杂交阳性克隆中,包括52个已知基因的cDNA片段和37个没有同源性的cDNA片 段。采用虚拟Northern杂交和RT PCR证实了部分基因在银鲫胚胎发育过程中的差异表达。这些差异表达基因 的呈现为进一步研究银鲫胚胎发育的分子机制奠定了基础。

斜带石斑鱼囊胚期胚胎和尾芽期胚胎差异表达基因的筛选及克隆

以斜带石斑鱼囊胚期胚胎和尾芽期胚胎分别作为检验组和驱动组,构建了石斑鱼囊胚期胚胎和尾芽期胚胎的抑制性差减杂交cDNA文库。以α-tubulin作为检测指标,显示差减效率分别高达28和27。分别取囊胚期胚胎和尾芽期胚胎各192和960个PCR阳性克隆进行斑点杂交,得到15个囊胚期和131个尾芽期的斑点杂交阳性克隆。测序和数据库比对分析表明,囊胚期15个阳性克隆中有11个已知基因的cDNA片段和没有同源性的4个cDNA片段;而在尾芽期的131个阳性克隆中,有123个已知基因的cDNA片段和8个没有同源性的cD-NA片段。用半定量RT-PCR技术分析了部分基因片段在胚胎发育过程中的表达规律和和组织分布情况。这些差异表达片段的呈现为进一步揭示石斑鱼胚胎发育、早期性别决定和性腺分化的分子机制奠定了基础。

激光诱导中华大蟾蜍尾芽胚双向电泳蛋白质谱变化的研究

目的:研究YAG倍频激光微束对中华大蟾蜍尾芽胚双向电泳蛋白质谱的影响。方法:以中华大蟾蜍为实验对象,以不同能量密度激光照射尾芽胚,0.5h后制备样品进行双向电泳,电泳胶扫描成像后用PDQuest软件进行分析。结果:激光照射后尾芽胚总蛋白质点数皆比对照组少,100和300μJ/cm2能量密度组总蛋白质点数减少较明显;随着照射能量的增加,新增点数逐渐增多;600μJ/cm2能量密度组消失点数较其他组少,二倍上升点数较其他组多。蛋白质点的分布及密度变化集中在分子量大于20.1kD和等电点大于4.80范围。结论:激光照射对尾芽胚双向电泳蛋白质谱有明显影响,蛋白质点的变化与激光能量密度相关。