血清胆汁酸谱对结直肠腺瘤的诊断价值

目的 分析结直肠腺瘤患者血清胆汁酸谱的组成变化,初步探讨血清胆汁酸谱对结直肠腺瘤的诊断价值。方法 纳入2021年11月至2022年4月南通大学附属江阴医院诊断的55例结直肠腺瘤患者作为观察组,并选择同期40例健康体检人群作为对照组。应用液相色谱串联质谱法测定外周血16型胆汁酸水平,采用多因素Logistic回归分析结直肠腺瘤患病危险因素。将组间有差异的指标纳入二元Logistic回归方程,建立诊断模型。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估单项胆汁酸指标及诊断模型的诊断效能。结果 观察组患者的脱氧胆酸(DCA)、甘氨脱氧胆酸(GDCA)、牛磺脱氧胆酸(TDCA)水平分别为140.9 (124.7,157.0) ng/mL、69.0 (58.2,75.0) ng/mL、16.0 (10.4,24.4) ng/m L,明显高于对照组的126.2 (114.0,145.8) ng/mL、59.0 (55.0,71.7) ng/m L、9.3 (5.3,18.4) ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归分析结果显示,DCA≥122.1 ng/mL、TDCA≥14.6 ng/mL诊断结直肠腺瘤的OR值分别为4.426 (1.460~13.421)、2.777 (1.065~7.240);经ROC曲线分析结果显示,TDCA在单项指标中诊断结直肠腺瘤价值最高[曲线下面积(AUC)为0.671,敏感性为61.8%,特异性为72.5%],联合应用DCA及TDCA的诊断模型诊断结直肠腺瘤的AUC为0.724,敏感性为96.4%,特异性为42.5%。结论 DCA、GDCA、TDCA在结直肠腺瘤患者中高表达;TDCA联合DCA组成的诊断模型对结直肠腺瘤具有较高的诊断敏感性,为结直肠腺瘤的血清学筛查提供了新的思路。

人工蛇胆汁中牛磺胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和牛磺去氧胆酸的反相高效液相色谱法测定

采用反相高效液相色谱法测定人工蛇胆汁中牛磺胆酸、牛磺鹅去氧胆酸及牛磺去氧胆酸 3种主成分的含量。其色谱条件为 :Nova Pak C1 8(4μm )柱 ,流动相 :乙腈 -水 (1∶ 2 ) ,流速 :0 .9m l/ min,检测波长 :2 10 nm。平均加样回收率分别为 :牛磺胆酸 10 0 .5 %、牛磺鹅去氧胆酸 10 2 .2 %及牛磺去氧胆酸 10 0 .9% ,RSD分别为 1.48%、 1.6 0 %及 1.97%。该法快速、灵敏、准确 ,适用于人工蛇胆汁中

Caspase蛋白酶活化在牛磺酸脱氧胆酸诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的 探讨Caspase蛋白酶活化在牛磺酸脱氧胆酸 (TDCA)诱导HepG2细胞凋亡中的作用。 方法 应用苏木精 伊红染色、Hoechst 3 3 2 5 8染色、电镜和DNA电泳对细胞凋亡定性 ;应用流式细胞仪对细胞凋亡定量 ;检测TDCA诱导HepG2细胞凋亡过程中 ,凋亡特异性蛋白酶Caspase 3、8、9活性的变化。 结果 TDCA 40 0 μmol/L孵育 12h可诱导显著HepG2细胞凋亡 ,凋亡率为 (5 0 .3 5± 2 .2 0 ) % ;在TDCA诱导HepG2细胞凋亡过程中 ,Caspase 9、3蛋白酶活性显著提高 ,Caspase 8活性仅轻度增高。 结论 TDCA可能主要是通过激活Caspase 9活化途径 ,启动Caspase级联反应介导细胞凋亡 ,Caspase 8活化在TDCA诱导的细胞凋亡中可能不起主要作用。

葡萄冻干粉在线粒体应激介导肝细胞凋亡中的作用

目的了解葡萄冻干粉(FDG)对线粒体应激介导的肝细胞凋亡的阻抑作用,探讨其治疗肝细胞损伤的作用机制。方法用牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)诱导Huh7细胞,建立线粒体应激凋亡模型,用不同剂量FDG进行干预。通过MTT、DNAladder、Western blot、细胞凋亡率检测等方法,了解FDG对Huh7细胞生长、对TDCA诱导的Huh7细胞的凋亡率、凋亡信号蛋白表达的影响。结果FDG(2μg/ml、20μg/ml、200μg/ml、400μg/ml和800μg/ml)与Huh7细胞共孵育,FDG可提高Huh7细胞的活力,以FDG400μg/ml时细胞活力最高。用400μM TDCA诱导Huh7细胞,随着诱导时间延长细胞活力下降、凋亡率增加,出现凋亡条带;Caspase-9和-7蛋白酶原被活化,PCNA表达下调。用FDG干预TDCA诱导Huh7细胞48h后发现,FDG明显提高Huh7细胞活力、使细胞凋亡减少、凋亡信号蛋白的表达减少。结论TDCA能触发Huh7细胞线粒体氧化应激凋亡,而FDG能促进细胞生长,减轻肝细胞损伤,阻断线粒体氧化应激介导的肝细胞凋亡。

RP-HPLC梯度法测定8种蛇胆中结合型胆汁酸的含量

目的:用 HPLC 梯度洗脱法同时测定蛇胆中牛磺胆酸(TCA)、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)、牛磺去氧胆酸(TDCA)、甘氨胆酸(GCA)4种结合型胆汁酸的含量。方法:用美国 Zorbax Extend C_(18)柱,乙腈-0.15%磷酸氢二钠溶液梯度洗脱0～20min(15:85～40:60)。流速1.0mL·min^(-1),检测波长203nm。结果:TCA、TCDCA、TDCA、GCA 在进样量为2～39μg范围内线性关系良好。该方法回收率 TCA 为99.5%(RSD=0.5%),TCDCA 为100.3%(RSD=1.8%),TDCA 为100.0%(RSD=1.8%),GCA 为98.9%(RSD=2.2%)。结论:HPLC 梯度法能将蛇胆中结合型胆汁酸很好分离,方法简单,准确。

Synthesis and Properties Investigation of Thiophene-aromatic Polyesters: Potential Alternatives for the 2,5-Furandicarboxylic Acid-based Ones

In order to explore new substitutes for 2,5 furandicarboxylic acid(FDCA)or poly(ethylene 2,5 furandicarboxylate)(PEF)and try to develop more ideal bio based polyesters,several thiophene aromatic polyesters(PETH,PPTH,PBTH,and PHTH)were synthesized from dimethyl thiophene 2,5-dicarboxylate(DMTD)and different diols,including ethylene glycol,1,3-propanediol,1,4-butanediol,and 1,6-hexanediol.The chemical structures of obtained polyesters were confirmed by nuclear magnetic resonance spectroscopy(H-NMR and 1'C-NMR).Determined by GPC measurement,their average molecular weight(M.)varied from 5.22 x 10*g/mol to 7.94 x 10*g/mol with the molar-mass dispersity of 1.50-2.00.Based on the DSC and TGA results,the synthesized polyesters PETH,PPTH,and PBTH displayed comparable or even better thermal properties when compared with their FDCA-based analogues.From PETH to PHTH,their Tg varied from 64.6°Cto-1°C while Tsm ranged from 409 C to 380°C in nitrogen atmosphere,PETH showed elongation at break as high as 378%,tensile strength of 67 MPa,and tensile modulus of 1800 MPa.Meanwhile,the CO2 and O2 barrier of PETH was 12.0 and 6.6 folds higher than those of PET,respectively,and similar to those of PEF.Considering the overall properties,the synthesized thiophene aromatic polyesters,especially PETH,showed great potential to be used as an excellent bio based packaging material in the future.

柱前衍生化-HPLC法测定牛磺熊去氧胆酸中牛磺酸的残留量

建立了测定牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)原料药中牛磺酸残留量的柱前衍生化高效液相色谱(HPLC)分析方法。样品用芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)进行柱前衍生,产物用C18反相色谱柱进行HPLC分离,以柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(A)与甲醇-乙腈-柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(B)为流动相梯度洗脱,检测波长264 nm。该方法能使痕量牛磺酸与牛磺熊去氧胆酸及其有关物质达到基线分离,牛磺酸峰面积与浓度在0.31~41μg/mL范围内线性关系较好,相关系数r为0.9995,检出限为0.1μg/mL,加标回收率在98.8%~100.5%之间。已用于实际样品的分析。该方法灵敏度高,重现性好,适用于牛磺熊去氧胆酸中牛磺酸的残留量的测定。

牛磺酸熊脱氧胆酸对细胞色素C介导HepG2细胞凋亡的作用

目的 探讨牛磺酸熊脱氧胆酸(TUDCA)对牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)诱导HepG2细胞凋亡阻抑作用及分子机制。 方法 应用Hoechst 3325 8染色、电镜和DNA电泳对细胞凋亡进行定性;应用流式细胞仪对凋亡细胞进行定量;检测TDCA单独孵育及与TUDCA共孵育时,胞浆中细胞色素C含量及Caspase-3、8、9蛋白酶活性的变化。 结果 TDCA 400μmol/L孵育12 h可诱导显著HepG2细胞凋亡,凋亡率为(50.35±2.20)％,细胞经TUDCA与TDCA共孵育后,细胞凋亡率明显下降,为(13.78±0.84)％;TUDCA能显著抑制TDCA引起的细胞色素C释放及Caspase-9、3蛋白酶活性升高,孵育12 h时,Caspase-3活性分别下降54.9％(t=16.88,P<0.01)和52.5％(t≥13.00,P<0.01),轻度降低Caspase-8活性升高,活性下降24.5％(t=1.94,P>0.05)。结论 稳定线粒体膜、阻止细胞色素C释放及随后Caspase-9、Caspase-3活化,是TUDCA抗凋亡的主要机制。抗凋亡作用可能是TUDCA治疗胆汁淤积性肝病取得显著疗效的重要机制之一。

羊胆中胆汁酸类成分的考察、测定与探讨

目的:对羊胆中的胆汁酸类成分进行考察,并对其中的主要胆汁酸进行测定,最后对研究结果进行深入讨论。方法:首先对收集到的来源确切的羊胆样品进行冷冻干燥处理,以确保干燥粉末与新鲜胆汁成分的一致性。然后使用TLC法,分别采用异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水(10:5:5:3:0.8)和异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水(6:5:5:3:1)为展开剂,使用10%硫酸乙醇溶液显色,明确羊胆中的胆汁酸成分,根据斑点的深浅对胆汁酸含量进行初步的判断;再使用Agilent SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),10 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,蒸发光散射检测器检测,对羊胆中2个含量最高的胆汁酸类成分牛磺胆酸和牛磺去氧胆酸进行了含量测定研究。结果:本研究明确了羊胆中含有胆酸、甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和牛磺石胆酸,其中以牛磺胆酸和牛磺去氧胆酸含量为最高。测得10批羊胆样品的牛磺胆酸和牛磺去氧胆酸的平均含量分别为47.5%和8.8%,这2个成分的总含量平均为56.3%,牛磺胆酸含量与牛磺去氧胆酸含量的平均比值为5.4。结论:本研究所建立的TLC方法不仅可用于羊胆的研究,同样适合用作其他胆汁类药材的鉴别或胆汁酸类成分的确定研究,而定量的HPLC-ELSD法也可以简便、快速、准确且经济地用作羊胆的含量测定工作。

亲水性胆盐对减轻大鼠移植肝肝内胆管冷保存再灌注损伤的作用

目的探讨亲水性胆盐对减轻大鼠移植肝肝内胆管冷保存再灌注损伤的作用。方法应用大鼠原位肝移植胆道外引流模型，将192只SD大鼠随机分为4组，每组供、受者各24只。各组供者在供肝切取前30min经阴茎背静脉注射不同的试剂，对照组注射1ml生理盐水；疏水性胆盐（TDc）组注射牛磺脱氧胆酸钠40μmol／kg；高、低浓度亲水性胆盐（TUDC）组分别注射牛磺熊去氧胆酸钠8（）和40μmol／kg。供肝取出后置于4℃的平衡液中保存2h再植入受者。移植肝再灌注后1、3、7和（或）14d时，采用全自动生化分析仪分别检测受者血清中碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、胆红素总量、直接胆红素和胆汁中y谷氨酰转移酶和葡萄糖的含量。移植肝再灌注后1d时，在光镜下观察肝内胆管上皮细胞的病理学改变，在荧光显微镜下观察肝内胆管上皮细胞的凋亡情况。结果高、低浓度TUDC组各项观察指标均低于对照组和TDC组（P（0．05），且肝内胆管炎症细胞的浸润、上皮细胞的损伤以及细胞的凋亡等程度均轻于对照组和TDC组（P（0．05）；与低浓度TUDC组比较，高浓度亲水性胆盐组短期内可见各项观察指标均有所降低，但远期各指标的比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。TDC组术后各项观察指标均高于对照组（P〈0．05）。结论在供肝获取前，供者静脉注射亲水性胆盐能减轻大鼠移植肝肝内胆管的冷保存再灌注损伤。

表儿茶素对牛磺酸脱氧胆酸诱导Huh7细胞凋亡的作用

目的:探索表儿茶素对牛磺酸脱氧胆酸诱导Huh7细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法:对牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)400μmol.L-1和表儿茶素干预培养48 h的Huh7细胞,应用MTT法检测细胞活力,荧光探针测定细胞内活性氧(ROS)生成量,荧光caspase-3/7分析法探测细胞凋亡,免疫蛋白印迹测定促凋亡蛋白Bax,细胞色素C和磷酸化p38蛋白激酶含量。结果:TDCA孵育可诱导Huh7细胞凋亡,存活率下降(54.24±2.20)%,细胞经表儿茶素与TDCA共孵育后,细胞存活率提高到(85.64±0.84)%;表儿茶素能显著抑制TDCA引起的Huh7细胞ROS生成,caspase-3/7蛋白酶活性升高。ROS生成下降54.2%,caspase-3/7活性下降52.3%(P<0.01)。表儿茶素抑制TDCA诱导Huh7细胞凋亡随剂量增加抑制作用加强。表儿茶素抑制TDCA诱导促凋亡蛋白Bax表达,细胞色素C释放及p38蛋白激酶磷酸化。结论:表儿茶素抑制TDCA诱导Huh7细胞线粒体损伤而导致的细胞凋亡。其作用机制是通过减少细胞内活性氧和促凋亡蛋白Bax生成,抑制细胞色素C释放及p38蛋白激酶磷酸化。

内质网应激在脂肪酸致肝细胞损伤中的作用

目的通过建立不同的肝细胞脂肪变模型探讨脂肪酸对肝细胞内质网应激的作用，同时检测牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）对脂肪变肝细胞内质网应激相关基因表达的影响。方法以正常成人肝细胞株HL-7702为研究对象，以软脂酸或混合脂肪酸建立肝细胞脂肪变模型，以细胞计数试剂盒细胞增殖法测定和计算细胞活力，观察细胞形态和脂肪变情况，用三酰甘油试剂盒测定细胞内三酰甘油含量。予TUDCA干预，实时PCR方法检测肝细胞内质网应激前后葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA相对表达量。结果混合脂肪酸浓度达0．5mmol／L或软脂酸浓度达0．125mmol／L即可影响肝细胞活力。单纯软脂酸对肝细胞的损伤作用较混合脂肪酸更强。混合脂肪酸组肝细胞内三酰甘油含量逐渐升高，软脂酸组肝细胞内三酰甘油含量仅于作用12h时显著增加，其后则无显著改变。混合脂肪酸组不同浓度、不同作用时间下GRP78mRNA和CHOPmRNA相对表达量与对照组相比差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。0．5mmol／L软脂酸作用后肝细胞内CHOPmRNA相对表达量显著升高，但其对GRP78mRNA相对表达量无明显影响。1．0mmol／L软脂酸作用后肝细胞内GRP78mRNA和CHOPmRNA相对表达量均显著升高。TUDCA干预低剂量软脂酸组肝细胞内质网应激前后GRP78mRNA和CHOPmRNA相对表达量差异无统计学意义（P值均〉0．05）。TuDCA干预高剂量软脂酸组肝细胞内质网应激前后CHOPmRNA表达量差异有统计学意义（12h时为8．6400比5．1032，24h时为13．7948比6．4928，P值分别=0．042和0．017），但GRP78mRNA表达量差异无统计学意义（P值均〉0．05）。结论相同的脂肪酸浓度下，软脂酸的比例越高对肝细胞的损伤作用越大。软脂酸呈时间一剂量依赖性地调控肝细胞内质网应激。TUDCA可在一定程度上改善软脂酸引起的内质网应激。