实时荧光定量PCR直接检测粪便标本艰难梭菌tcdB基因

目的建立艰难梭菌实时荧光定量PCR检测方法,直接检测粪便标本艰难梭菌tcd B基因,并探讨其应用价值。方法根据艰难梭菌基因组设计tcd B基因特异性引物及探针,用ATCC 43255标准株评价其敏感性,选取艰难梭菌生物学特征相近的临床菌株验证其特异性;收集2015年10-12月临床腹泻患者稀便标本115份,提取基因组总DNA后进行tcd B基因检测,并以产毒培养法为参考方法,探讨该方法的临床诊断价值。结果荧光定量PCR法最低检测限为1×10-3ng,并且仅特异性地扩增产毒艰难梭菌;临床样本评价荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为75.0%、99.1%、85.7%和98.1%。结论实时荧光定量PCR直接检测稀便标本中的艰难梭菌tcd B基因可用于艰难梭菌相关腹泻的快速诊断。

TCD、颈部血管B超对缺血性脑血管病的诊断价值研究

目的 分析缺血性脑血管病应用TCD(经颅多普勒)、颈部血管B超的诊断价值.方法 回顾性分析2016年3月~2017年7月本院收治的64例缺血性脑血管病患者,均给予TCD、 颈部血管B超,并对比分析检查结果 .结果以病理诊断为标准,TCD符合率为72.90%,颈部血管B超符合率为67.50%.结论 TCD、颈部血管B超均可用于筛查缺血性脑血管病,且两者的诊断符合率也比较高.对于颈部血管狭窄病患来说,可对其施以颈部血管B超检查,而颅内血管狭窄病患则比较适宜做TCD检查.此外,TCD也能作为患者治疗后复查的一种重要手段.

益肝片抑制HBsAg及调节免疫功能的实验研究

小鼠口服益肝片４．５ｇ／ｋｇ，脾脏相对重量增加２５．８％，抗体形成细胞（ＩｇＭ－ＰＦＣ）明显增加；口服３．３ｇ／ｋｇ，腹腔巨噬细胞吞噬百分数和吞噬指数分别提高９８．４２％和１００％；提高血清溶菌酶含量８１．０７％；体外实验，益肝片０．

补肾健脾方对ALT轻度升高的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者程序性死亡受体1/程序性死亡配体1表达的影响

目的研究补肾健脾方对ALT轻度异常的HBe Ag阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者程序性死亡受体(PD)1/程序性死亡配体(PD-L)1表达的影响。方法选取2010年9月1日-2013年12月31日在上海中医药大学附属曙光医院就诊的32例ALT轻度升高的HBe Ag阳性CHB患者。在明确临床疗效的基础上,分离外周血单个核细胞,流式细胞仪检测补肾健脾方治疗前后患者外周血T淋巴细胞上PD-1和树突状细胞(DC)上PD-L1的表达变化。计量资料组间比较采用独立样本t检验,计数资料组间比较采用χ2检验。结果与治疗前相比,治疗组患者外周血CD4+T细胞表达PD-1百分率明显降低(P<0.01),CD4+T细胞表达PD-1的平均荧光强度(MFI)显著下降(P<0.05);治疗后两组患者CD4+T细胞表达PD-1百分率和MFI比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。治疗组CD8+T细胞表达PD-1百分率和MFI与治疗前相比均明显降低(P值均<0.01);治疗后两组患者CD8+T细胞表达PD-1的MFI比较差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前相比,治疗组DC表达PD-L1的MFI水平降低(P<0.05),髓样树突状细胞(m DC)表达PD-L1的MFI亦明显降低(P<0.01);治疗后两组患者比较DC和m DC的PD-L1表达水平,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论补肾健脾方治疗HBe Ag阳性的CHB患者能够显著降低外周血CD4+T、CD8+T细胞的PD-1的表达水平,降低DC和m DC的PD-L1表达水平,与其临床疗效有一定关系。

丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠肾组织核转录因子κB表达的影响

目的探讨核转录因子κB(NF-κB)在糖尿病大鼠肾组织中的表达水平及丹蛭降糖胶囊(DJC)的调节作用。方法取55只健康雄性大鼠按数字表法随机分为两组,即健康对照组和实验组。健康对照组予普通饲料喂养,实验组予高脂饲料喂养。采用链尿佐菌素(STZ)单次腹腔注射35mg/kg,建立糖尿病动物模型,造模成功后,再将实验组按数字表法随机分为丹蛭高剂量组,丹蛭低剂量组,吡咯列酮组和模型组。除模型组和对照组外,各组连续灌胃药物8周,丹蛭高、低剂量组分别按1.08 g·kg-1·d-1、0.54 g·kg-1·d-1灌胃,吡格列酮组按10 mg·kg-1·d-1灌胃,健康对照组和模型组按5 m L·kg-1·d-1给予0.9%氯化钠注射溶液灌胃。免疫组织化学法检测NF-κB在肾脏中的表达水平,并测定各组大鼠血糖。结果模型组的NF-κB的表达明显升高,与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);丹蛭高、低剂量组灌胃8周后,两组NF-κB的高表达明显下降,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。丹蛭降糖胶囊灌胃2周后,血糖显著下降,与模型组比较(P<0.01),4~8周后血糖指标下降平稳(P<0.01)。结论丹蛭降糖胶囊可降低2型糖尿病大鼠血糖和抑制肾组织NF-κB的高表达。

酸浆苦素B的体外抗肿瘤活性研究

【目的】研究苦蘵中提取的酸浆苦素B(physalin B,Ph B)的体外抗肿瘤活性。【方法】采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和细胞形态观察法研究Ph B对2种肿瘤细胞株Hep G2和SGC7901增殖的抑制作用及形态的影响,并与抗癌药物羟基喜树碱(hydroxycamptothecine,HCTP)作对照比较;采用4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法观察Ph B诱导Hep G2和SGC7901细胞凋亡。【结果】MTT实验结果显示Ph B对Hep G2和SGC7901的生长均有明显的抑制作用,并具有一定的时间剂量依赖关系,且高浓度时作用优于阳性对照药HCTP,倒置相差显微镜结果也显示其显著改变了细胞形态,并能够证实MTT实验结果的可靠性;DAPI染色结果表明Ph B可促进Hep G2和SGC7901细胞凋亡。【结论】苦蘵提取物Ph B对肿瘤细胞Hep G2和SGC7901具有一定的增殖抑制作用。

银杏内酯B衍生物对血栓形成的抑制作用

【目的】观察银杏内酯B衍生物(XQ)对实验性血栓形成的影响。【方法】选用SD雄性大鼠随机分为模型对照组,曲克芦丁组(剂量为48 mg.kg-1.d-1),银杏内酯B(GB)组(剂量为7.8 mg.kg-1.d-1),XQ低、中、高剂量组(剂量分别为3.9、7.8、15.6 mg.kg-1.d-1)。分别采用颈动—静脉旁路法复制血栓模型及电刺激法复制混合血栓模型,观察XQ对血栓形成的影响。选用ICR雄性小鼠随机分为模型对照组,曲克芦丁组(剂量为96 mg.kg-1.d-1),GB组(剂量为15.6 mg.kg-1.d-1),XQ低、中、高剂量组(剂量分别为7.8、15.6、31.2 mg.kg-1.d-1)。采用5-腺苷二磷酸二钠盐(ADP)致小鼠急性肺血栓模型,观察XQ对血栓形成的影响。【结果】XQ中、高剂量组均能显著减轻大鼠动脉血栓的湿、干质量(与模型对照组比较,P<0.05或P<0.01),显著延长大鼠混合血栓形成时间(与模型对照组比较,P<0.05)。XQ高剂量组对小鼠急性肺血栓形成有抑制作用,并可显著缩短小鼠的喘促持续时间(与模型对照组比较,P<0.05)。【结论】XQ具有一定的抗血栓形成作用。

丹酚酸B抑制人鼻咽癌细胞生长的体外试验研究

【目的】研究丹酚酸B(Sal B)对体外培养的人低分化鼻咽癌细胞株C666-1生长的抑制作用及可能的机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Sal B对C666-1细胞的半数抑制剂量(IC50),以IC50浓度的Sal B处理C666-1细胞48 h后,采用Hoechst 33258进行凋亡染色,荧光显微镜下计数凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞周期,观察Sal B对C666-1细胞周期及凋亡的影响。【结果】经Sal B处理24、48、72 h后,C666-1细胞生长受到抑制,以48 h最为显著,IC50为(80±6.8)μg/mL;流式细胞仪检测结果显示Sal B可使C666-1细胞G1期显著延长(P<0.001),凋亡染色计数显示Sal B可诱导C666-1细胞凋亡(P<0.001)。【结论】Sal B体外抑制人鼻咽癌细胞C666-1生长的作用与其能使C666-1细胞G1期显著延长,促进细胞凋亡有关。

反相高效液相色谱法测定泽泻提取物中23-乙酰泽泻醇B含量

目的利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定泽泻提取物中23-乙酰泽泻醇B含量。方法利用RP-HPLC检测,选用Kromasil 100-5C18(250 mm×4.6 mm)色谱柱,以乙腈-水为流动相等梯度洗脱,流速1 ml.min-1;检测波长208 nm。结果 23-乙酰泽泻醇B在进样量范围内与峰面积线性关系良好,仪器精密度和稳定性RSD均小于2%,平均回收率在99%～101%(n=3)。测定了5批提取物中23-乙酰泽泻酐B,平均的含量为2.550 mg/g。结论该方法快速、准确、重复性好,可对泽泻指标性成分23-乙酰泽泻醇B进行定量,从而控制提取物质量。

NF-κB通路在肝纤维化进展和中药抗肝纤维化机制中的作用

核因子-κB(NF-κB)可以通过调控基因表达,在细胞存活、生长、增殖、活化、凋亡等多种生理和病理过程中起着重要作用,尤其在肝纤维化进展中,NF-κB信号通路发挥重要调节作用。对NF-κB的结构与功能,目前有关NF-κB在参与肝纤维化进展中,对肝细胞、Kupffer细胞、肝星状细胞的调节,以及中药通过调控NF-κB通路活性发挥抗肝纤维化作用的机制作一综述。揭示了相关疾病条件下,NF-κB与多个细胞之间复杂的相互作用机制,突出中药抑制NF-κB的活性从而减轻肝纤维化这一潜在的临床意义。

半边旗提取物5F对HO-8910PM细胞中NF-κB和FAK蛋白表达的影响

目的：研究半边旗(pteri semipinnata L，PsL)二萜类化合物5F对HO-8910PM细胞内核因子-kB(nuclear factor-kappaB，NF-kB)p65亚基、黏着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)表达及p-FAK(phosphorylated FAK)水平的影响，探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制。方法：MTT法测定5F对细胞增殖的影响；Western blot分析NF-kB(p65)、FAK蛋白表达及p-FAK水平。结果：12．50、25．00、50．00、100．00和200．00μmol／L的5F作用HO-8910PM细胞24h后，细胞增殖抑制率分别为(28．20±3．66)％、(30．96±1．83)％、(41．41±1．65)％、(60．67±2．24)％和(73．18±1．24)％，并有一定的剂量效应关系，P<0．05(P值分别为0．018、0．000、0．000、0．000和0．000)。25～100μmol／L的5F作用HO-8910PM细胞24h后，NF-kB(p65)蛋白表达水平明显下降；上调FAK蛋白表达，使FAK酪氨酸磷酸化程度降低(p-FAK／FAK)，P<0．01(P值分别为0．000、0．001和0．000)。结论：5F抗肿瘤侵袭转移与NF-kB(p65)表达以及FAK酪氨酸磷酸化程度降低有关。

华蟾素治疗中晚期原发性肝癌HBV-DNA高表达患者的近期疗效

【目的】观察华蟾素治疗中晚期原发性肝癌过程中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量变化与治疗效果的相关性,并对患者治疗前后的生存质量加以评价。【方法】将120例肝癌患者随机分为治疗组和对照组,每组60例。对照组在一般护肝治疗、对症治疗基础上辨证使用中药汤剂,治疗组在对照组基础上加用华蟾素注射液,连用14 d为1个疗程,后间歇7 d,开始下一个疗程,共使用2个疗程。观察2组实体瘤近期客观疗效、治疗前后肝功能分级、卡氏评分(Karnofsky评分)分级疗效、HBV-DNA下降疗效、远期疗效和不良反应情况。【结果】华蟾素在稳定瘤体、改善肝功能、改善生存质量、控制HBV-DNA方面较对照组有显著优势,差异有统计学意义(P<0.05);但在缩小瘤体方面差异无统计学意义(P>0.05)。在改善机体功能状态方面,应用华蟾素也有显著优势(P<0.05)。远期疗效方面:治疗组中位生存期为(178±20.689)d,3个月、半年、1年生存率分别为81%、64%、10%;对照组中位生存期为(168±16.324)d,3个月、半年、1年生存率分别为82%、63%、5%;2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。不良反应方面:治疗组和对照组均未见明显肝肾功能损伤、消化道反应、骨髓抑制,也未见静脉炎等情况出现。【结论】华蟾素治疗HBV-DNA高表达中晚期肝癌患者,能提高生存质量、改善机体功能和延长生存期,充分体现了中医治疗肿瘤"带瘤生存"的特点。

叶下珠复方Ⅱ号体内抗鸭乙肝病毒的实验研究

【目的】观察叶下珠复方Ⅱ号体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用。【方法】采用聚合酶链反应(PCR)法筛选DHBV-DNA阳性的先天感染鸭30只,随机分为5组:病毒对照组,叶下珠复方Ⅱ号高、中、低剂量组(剂量分别为33.6、18.6、8.4 g.kg-1.d-1)、拉米夫定组(剂量为20 mg.kg-1.d-1)。各组于用药前后分别采用荧光定量PCR法检测血清DHBV-DNA含量变化。【结果】在给药第7、14、21、28天及停药后第5天叶下珠复方Ⅱ号高、中剂量组鸭血清DHBV-DNA含量显著降低,与给药前和病毒对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。【结论】叶下珠复方Ⅱ号具有一定的抑制DHBV复制作用。

使用Real-Time PCR粪便中检测艰难梭状芽孢杆菌

目的:探讨Real-Time PCR对粪便检测艰难梭菌的可行性。方法:以组织培养细胞毒素试验为标准,参考艰难梭菌的毒素A/B基因相应的引物和分子信标探针,对标准菌株和粪便提取的DNA实行Real-Time PCR扩增。结果:Real-Time PCR的敏感度为96.9%;特异性为100%;阳性预测值为100%;阴性预测值为98.3%。结论:Real-TimePCR与传统诊断方法相比具有快速、敏感、特异等优点,可以提高艰难梭菌的检测水平。

复方肝毒清对免疫性肝损伤模型小鼠的保护作用

[目的]观察复方肝毒清对刀豆蛋白A(ConA)所致小鼠肝损伤的保护作用。[方法]昆明种小鼠60只,随机分为空白对照组,模型对照组,肝毒清高、中、低剂量组(20、10、5g/kg),联苯双酯组(150mg/kg);除空白对照组外,所有小鼠2次尾静脉注射ConA(20mg/kg)复制肝损伤模型,各组均按设计剂量灌胃给药,空白对照组和模型对照组给予等容积生理盐水,共给药3次;取血清检测谷丙转氨酶(ALT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),取肝组织检测TNF-αmRNA表达,并进行肝组织病理学检查。[结果]肝毒清高、中、低剂量组均能降低血清ALT、TNF-α水平,抑制肝组织TNF-αmRNA表达,与模型对照组比较具有显著性差异(均P<0.01),并能一定程度改善肝组织病理变化。[结论]复方肝毒清对ConA所致小鼠肝损伤具有一定的保护作用。

复方肝毒清对乙型肝炎病毒的体内外抑制作用

【目的】观察复方肝毒清的体内外抗乙肝病毒作用。【方法】体内实验采用先天感染鸭乙肝模型,检测用药前后鸭血清乙肝病毒脱氧核糖核酸(DHBV DNA)的动态变化;体外实验采用2.2.15细胞为模型,检测用药后复方肝毒清对细胞培养上清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的抑制作用。【结果】体内实验:给药第10天时血清DHBVDNA滴度显著下降(与模型组比较P<0.01).而停药第3天后又有回升,但仍低于模型组(P<0.01);体外实验:复方肝毒清对细胞分泌HBsAg的治疗指数(50％毒性浓度:50％抑制浓度)为66.81,对分泌HBeAg的治疗指数为34.18。【结论】复方肝毒清在体内外均具有抗乙肝病毒作用。

清热化湿法对慢性乙型肝炎湿热证血清白细胞介素2受体的影响

[目的]探讨清热化湿法对慢性乙型肝炎湿热证患者的临床疗效及对可溶性白细胞介素2受体(SIL-2R)水平的影响。[方法]采用不完全随机法将慢性乙型肝炎湿热证患者分为2组,治疗组31例采用清热化湿法治疗,对照组17例予以常规西药护肝治疗,观察两组疗效,并于治疗前后抽取患者外周血检查肝功能和SIL-2R水平。[结果]两组患者血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TB)、SIL-2R水平均较正常组明显升高,经治疗后明显下降(P<0.01或P<0.05);两组治疗后的SIL-2R差值比较有显著性差异(P<0.05)。治疗组4例血清HBV-DNA、HBeAg阴转的患者,肝功能恢复正常,SIL-2R水平降低至正常水平;HBeAg未阴转者,或HBeAg阴转但HBV-DNA未降至正常范围者,虽肝功能恢复正常,SIL-2R水平仍较高。两组总有效率相比较无显著性差异(P>0.05),但两组显效率有显著性差异(P<0.01)。[结论]清热化湿法是治疗慢性乙型肝炎湿热证的有效方法,其远期疗效可能要优于西药组,这可能与调节SIL-2R水平有关;治疗后肝功能正常但SIL-2R水平仍较高的患者,病毒重新复制活跃的可能性大,应继续治疗。

益气解毒丸治疗慢性乙型病毒性肝炎临床观察

【目的】观察益气解毒丸治疗慢性乙型病毒性肝炎患者的疗效。【方法】采用随机数字表法将100例慢性乙型病毒性肝炎肝胆湿热型患者随机分为治疗组和对照组各50例。对照组口服甘利欣胶囊,3粒/次,3次/d;维生素C片,2片/次,3次/d;治疗组在对照组治疗基础上加用益气解毒丸,6 g/次,3次/d。2组均以3个月为1个疗程,共2个疗程。观察患者胁肋胀痛、纳呆呕恶、厌油腻、身目发黄、小便黄、舌苔黄腻等症状,并于治疗前后检测患者肝功能、乙肝病毒标志物。【结果】(1)治疗后,治疗组的临床症状体征改善情况均有优于对照组趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)治疗组的临床总疗效优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)治疗组的各项肝功能指标改善和乙肝病毒标志物转阴率均有优于对照组趋势,但2组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】益气解毒丸治疗慢性乙型病毒性肝炎疗效确切。

脑导纳图与经颅多普勒对缺血性脑血管病患者临床评价

缺血性脑血管病多发于中老年人,常引起脑血管的血液动力学改变。我室利用KT-ENG导纳式双侧脑血流图检测仪及EME公司的TC-2020型经颅多普勒超声仪对47例缺血性脑血管病患者进行脑导纳图及经颅多普勒检测,观察其I项指数、III相面积、流入时间和颅内血管(ACA、MCA、PCA)的流速、PI值及频谱等指标,并对其血液动力学变化进行综合分析评价。检测结果表明脑导纳图异常率72.3%,TCD异常率80%,进行统计学处理后脑导纳图的三项指标I项指数、III相面积、流入时间均与对照组有显著差异(P<0.05);经颅多普勒检测中各项指标Vs、Vm、PI、频谱形态及音频与正常对照组亦有显著差异(P<0.05)。此项结果表明缺血性脑血管病患者有不同程度的动脉硬化、血管顺应性减退、血管阻力增大。因此对脑血管病患者进行脑导纳及经颅多普勒检测可较客观的反应出患者的脑血管硬化程度及脑动脉供血情况,为临床提供了客观的依据与参考。

先天和后天感染鸭乙肝病毒的广州麻鸭外周血中病毒血症的动态比较及应用

为寻求较理想的动物乙型肝炎模型，在研制成功广州麻鸭乙型肝炎模型基础上，比较先天和后天感染鸭乙肝病毒的广州麻鸭外周血中病毒血症的差异。方法是采用斑点杂交方法（ｄｏｔｂｌｏｔ）检测了广州麻鸭先天和后天感染鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）后外周血中ＤＨＢＶ－ＤＮＡ的动态。结果：先天感染的广州麻鸭外周血中病毒血症水平较高，出生后（即感染后）２６ｄ时ＤＨＢＶ－ＤＮＡ下降到一较低的水平，７２ｄ时仍维持较低水平。出生后１ｄ感染ＤＨＢＶ的广州麻鸭，感染后９ｄ时血中开始出现低水平的ＤＨＢＶ－ＤＮＡ，１１ｄ时达到高峰，之后逐渐下降，２６ｄ时下降到一较低的水平，到７２ｄ时仍维持低ＤＨＢＶ－ＤＮＡ水平。并采用后天感染ＤＨＢＶ的广州麻鸭作为鸭乙肝模型筛选抗乙肝中草药，以无环鸟苷为阳性对照药，蒸馏水为阴性对照药，发现每次阳性对照组和阴性对照组均成立，证明该模型重复性良好。并发现台湾单纯叶下珠、虫草和树舌均有降低ＤＨＢＶ－ＤＮＡ的作用。