中国部分地区艰难梭菌PCR-核糖体分型及毒素基因多态性研究

目的了解中国部分地区艰难梭菌聚合酶链反应(PCR)-核糖体型别分布及其A、B毒素基因多态性,为建立适宜中国的艰难梭菌分子检测和分子分型技术提供基础数据,同时在基因水平上为艰难梭菌感染导致的复杂临床表现提供依据。方法对中国3个城市(北京、广州、济南)分离的64株艰难梭菌临床株进行PCR-核糖体分型,并对不同型别的26株代表菌株的A、B毒素基因进行扩增测序。结果 64株艰难梭菌中,毒素基因型以A+B+型(45株,70.31%)为主,A-B+型19株(29.69%)。共存在9种PCR-核糖体型别,以017型(21株,32.81%)为主要型别,其次为001型(13株,20.31%)、012型(11株,17.19%)。A-B+菌株中,14株(73.68%)是017型,1株是001型。A、B毒素基因呈现一定的多态性,其中有7种A毒素序列型别(TSTA),6种B毒素序列型别(TSTB),8种A、B毒素序列型别组合(TSTG)。结论我国部分地区的艰难梭菌可能以PCR-核糖体017型为主,A、B毒素基因在菌株间存在多态性,且核糖体型别与毒素基因多态性间存在相对应的关联。应进一步扩大菌株数量和范围,探寻适合我国的分子检测和分子分型方法,从而帮助医院更好地预防和控制艰难梭菌感染。

呼和浩特地区腹泻患者艰难梭菌检测方法比较、临床分离株的毒素特征及药物敏感性分析

目的了解呼和浩特地区艰难梭菌腹泻患者临床分离株的毒素特征及艰难梭菌药物敏感性,为艰难梭菌治疗和防控提供参考数据。方法收集2018年7月至2019年6月间本院疑似艰难梭菌感染的252例腹泻患者的粪便标本。同一样本分别检测:粪便艰难梭菌培养和鉴定、VIDAS酶联荧光法粪便直接检测艰难梭菌毒素A/B(CDAB)和艰难梭菌谷氨酸脱氢酶(GDH)。培养获得的艰难梭菌进行PCR扩增毒素基因和二元毒素基因(tcdA、tcdB、cdtA、cdtB),以明确是否为产毒菌株;琼脂稀释法测定艰难梭菌对抗菌药物的敏感性。结果艰难梭菌毒素A/B(CDAB)阳性7例,灰区5例;谷氨酸脱氢酶(GDH)阳性39例;培养出艰难梭菌37株;PCR扩增毒素基因检测30株为产毒株,毒素基因tcdA(-)/tcdB(+)型3株,tcdA(+)/tcdB(+)型27株,二元毒素基因检测均为阴性;克林霉素、头孢西丁耐药率较高,分别为100%和97.3%,莫西沙星耐药率54.1%。万古霉素、甲硝唑无耐药株检出。结论 GDH法具有较好的灵敏性,可作为艰难梭菌感染的筛查;CDAB检测特异性较高,但敏感性较低;毒素基因检测有较高的敏感性和特异性,tcdA(+)/tcdB(+)型艰难梭菌为我院主要流行株;96.7%的临床感染患者为I级;克林霉素、莫西沙星耐药率较高,需限制使用;全部菌株对甲硝唑、万古霉素敏感,可以经验用药。

临床分离艰难梭菌毒素携带特征研究

目的对医院细菌室送检粪便标本中分离出的艰难梭菌,进行毒素基因以及耐药基因的初步分析。方法将细菌室收集到的112份粪便标本,经选择性厌氧培养,谷氨酸脱氢酶(GDH)以及API 20A生化条鉴定后,分离出12株艰难梭菌,分别采用PCR的方法检测tcdA和tcdB基因、二元毒素基因,克林霉素抗性基因(ermB)。结果12株艰难梭菌中8株为毒素基因阳性,其中tcdA+tcdB+为5株,占62.5%;tcdA-tcdB+为3株,占37.5%;二元毒素基因均为阴性;耐药基因ermB阳性为4株,占50%。结论艰难梭菌tcdA-tcdB+毒株所占比例增加,临床单独检测A毒素易造成漏检;艰难梭菌耐药现象值得关注。