基于微流控芯片的温度梯度毛细管电泳检测大肠癌石蜡标本中K-ras基因突变

K-ras基因突变检测可用于大肠癌的早期筛查与诊断,并有利于筛选出抗表皮生长因子受体靶向药物治疗有效的大肠癌患者,以实现肿瘤的个体化治疗.采用以倾斜式热辐射原理建立的微流控温度梯度毛细管电泳(temperature gradient capillary electrophoresis,TGCE)基因突变检测系统,实现了对98例石蜡包埋大肠癌组织中K-ras基因突变的高灵敏度筛查,突变阳性检出率为47.96%,显著高于PCR产物直接测序的23.47%.克隆测序显示该方法至少能检测到2.08%的K-ras基因突变体.K-ras基因突变与临床病理学参数的关系分析显示,直肠癌中K-ras基因突变率明显高于结肠癌(P<0.05),而与年龄、性别、组织学类型和肿瘤分期等无显著相关性.该检测方法为肿瘤早期诊断和指导临床用药提供了一种灵敏度高、检测速度快、便于大规模筛查的有效手段.

基于热阻梯度加热系统的温度梯度芯片毛细管电泳用于DNA突变检测

建立了一种简单、可靠的空间温度梯度芯片毛细管电泳DNA突变分析系统,制作了热阻呈梯度均匀变化的硅橡胶(PDMS)基片,利用其热阻变化对热传导的影响,在基片表面形成稳定的空间温度梯度.通过改变PDMS基片的厚度差,可得到范围不同的温度梯度,且形成的温度梯度在6h内保持稳定.利用该温度梯度加热装置对玻璃微流控芯片进行加热,在10℃温度梯度范围内对209bp的DNA突变标准样品进行分离检测,单次样品分析时间为8.3min,并成功用于3例大肠癌患者石蜡组织切片中K-ras基因突变的检测.

毛细管电泳中的温度效应和温度梯度技术

对毛细管电泳中的温度效应及温度梯度的应用作了较为详尽的论述，引用文献５１篇。

Chip-based TGCE定量检测大肠癌K-ras基因点突变

目的建立一种定量检测大肠癌中K-ras基因突变比例的方法,并分析其与临床病理参数之间的关系。方法利用微流控温度梯度毛细管电泳(Chip-based temperature gradient electrophoresis,Chip-basedTGCE)对4例代表性大肠癌组织切片中的K-ras基因突变进行检测,通过AutoCAD软件计算出K-ras基因突变比例,结果经克隆测序校正后获得线性回归方程。应用该方法定量检测84例石蜡包埋大肠癌组织中的K-ras基因突变比例,并探讨其与临床病理参数的关系。结果 Chip-based TGCE检测K-ras基因突变比例与克隆测序检测K-ras突变比例的线性回归方程为y=0.993x-1.387,K-ras基因突变比例与肿瘤部位和浸润深度有显著相关性(P<0.05),检测获得的最低K-ras突变比例达到2.51%。结论该研究显示Chip-based TGCE是一种快速、灵敏、便捷、经济的基因突变比例定量分析方法。