髁突增殖层细胞在颞下颌关节适应性改建中的作用

目的 探讨颞下颌关节盘前移位后髁突软骨增殖层细胞在关节适应性改建中的作用。方法 32只日本大白兔 ,在全麻下建立关节盘前移位动物模型 ,术后 1周、2周、4周、6周、8周处死 ,HE染色、Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚合体mRNA原位杂交染色观察。结果 正常髁突的增殖层浅层有蛋白多糖聚合体mRNA的少许表达 ,但无Ⅱ型胶原表达。增殖层深层Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚合体mRNA均有大量表达。术后 1周 ,受力区软骨组织变薄 ,尤以增殖层明显。蛋白多糖聚合体mRNA表达开始下调。 2周后Ⅱ型胶原mRNA表达也开始下降。 4周后蛋白多糖聚合体mRNA表达开始回升 ,增殖层浅层也可见表达 ,但Ⅱ型胶原mRNA表达继续下降。术后 8周两基因表达水平恢复至正常。结论 增殖层细胞具有向软骨细胞分化的潜能 ,成年兔髁突软骨增殖层具有再生能力 ,但损伤过度 ,可导致骨关节病样改变。

颞下颌关节盘前移位后双板区组织软骨化生机制的实验研究

目的:探讨颞下颌关节盘前移位后双板区内化生软骨细胞的来源。方法:将12只日本成年大耳白兔随机分为A、B两组,每组包括4只实验兔和2只对照兔,实验兔的右侧关节盘被手术前移并固定在前方的颧弓上,A组用于HE染色和抗增殖细胞核抗原(PCNA)、抗成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)免疫组化检测,B组用于透射电镜观察。结果:所有实验组动物的关节盘双板区内均出现了软骨细胞化生,部分化生软骨细胞内PCNA和FGFR3均为阳性。超微结构观察可见:部分细胞具有成纤维细胞和软骨细胞的双重特征,部分软骨细胞具有幼稚细胞的特征。结论:颞下颌关节盘前移位后,双板区内化生的软骨细胞可能部分由间充质干细胞增殖分化而来。

山羊颞下颌关节盘细胞的表面形貌和力学特性研究

目的采用JPK Nano Wizard 3型生物原子力显微镜(AFM)对两种类型的山羊颞下颌关节盘细胞(软骨细胞样细胞和成纤维细胞样细胞)的表面形貌和生物力学特性进行研究,为颞下颌关节盘组织工程研究中种子细胞的选择提供依据。方法单层培养原代山羊颞下颌关节盘细胞,生理状态下用AFM接触模式扫描两种类型的关节盘细胞,获得形貌图。随机选取20个软骨细胞样细胞和成纤维细胞样细胞,扫描获得细胞核区和细胞质区的力-位移曲线,通过JPK Data Processing软件分析两种细胞的杨氏模量和黏附力。结果 AFM下,三角形的软骨细胞样细胞的细胞核占据其大部分体积,细胞骨架结构呈树枝状排列,边缘伸出许多伪足;长梭形的成纤维细胞样细胞的细胞核明显高于细胞质区,骨架结构规则排列,边缘光滑,极少有伪足伸出;两种细胞的表面粗糙度没有明显差异。分析力-位移曲线得出:两种类型细胞的杨氏模量在细胞核区没有明显差异(P>0.05),在细胞质区略有差异(P=0.047);但两种细胞的黏附力没有明显差异(P>0.05)。结论两种类型的关节盘细胞在形貌上虽有较大的差别,但在生物力学特性上的差异并不明显。

颞下颌关节盘前移位后双板区组织内的细胞增殖与细胞凋亡

目的:探讨颞下颌关节盘前移位后双板区组织的适应性改建过程中是否有细胞增殖与细胞凋亡过程的参与。方法:采用12只成年兔,其中8只兔的右侧关节盘被手术前移固定,另外4只为正常对照,随机分为A、B两组,每组各4只实验兔和2只正常兔,分别对双板区组织进行抗增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色和透射电镜观察。结果:关节盘前移位后,双板区内可见部分细胞的胞核呈圆形或椭圆形,其内PCNA阳性。透射电镜下可见:部分细胞形体较小、胞膜或胞核明显皱缩、核染色质呈片块状或核膜下聚集、粗面内质网极度扩张等。结论:细胞增殖与细胞凋亡均参与了颞下颌关节盘前移位后双板区组织的适应性改建过程。

原花青素对过氧化氢诱导羊颞下颌关节盘细胞氧化损伤的保护作用研究

目的探究原花青素在过氧化氢诱导颞下颌关节盘细胞氧化损伤中的作用。方法分别用浓度为0、100、200、400、800μmol/L过氧化氢处理颞下颌关节盘细胞12、24、48 h,CCK-8检测细胞活力。然后用不同浓度(0、5、10、20、40μmol/L)的原花青素处理颞下颌关节盘细胞24、48 h,CCK-8检测原花青素对颞下颌关节盘细胞活力的影响。将颞下颌关节盘细胞分为对照组、模型组、低浓度组(5μmol/L原花青素)、中浓度组(10μmol/L原花青素)、高浓度组(20μmol/L原花青素),使用CCK-8法检测细胞活力,比色法分别检测丙二醛水平、超氧化物歧化酶活性,DCFH-DA荧光探针检测活性氧水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,定量反转录PCR检测炎症因子、细胞外基质合成和降解因子相关基因的表达水平。结果400μmol/L过氧化氢处理24 h时,颞下颌关节盘细胞存活率为60.57%,与对照组相比,细胞活力降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组颞下颌关节盘细胞活力降低,活性氧水平、丙二醛水平升高,超氧化物歧化酶活性下降。与模型组相比,5、10、20μmol/L原花青素处理组可以提高过氧化氢诱导下颞下颌关节盘细胞活力,降低活性氧水平、丙二醛水平,升高细胞内超氧化物歧化酶活性(P<0.05)。流式结果显示模型组较对照组细胞凋亡率升高,而用原花青素干预后细胞凋亡率较模型组降低(P<0.05)。颞下颌关节盘细胞经过氧化氢干预后细胞内炎症因子(白介素-1β、肿瘤坏死因子-α、白介素-6)表达量与对照组相比增加,原花青素预处理后白介素-1β、肿瘤坏死因子-α、白介素-6表达降低(P<0.05)。此外,原花青素增加了过氧化氢诱导下Ⅰ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达(P<0.05),同时抑制了基质金属蛋白酶-1,基质金属蛋白酶-3,基质金属蛋白酶-9的表达(P<0.05),抑制了细胞外基质降解。结论建立颞下颌关节盘细胞氧化应激模型的最适作用条件为400μmol/L过氧化氢作用24 h。原花青素逆转了过氧化氢诱导的颞下颌关节盘细胞脂质过氧化、活性氧生成、炎症损伤和细胞外基质降解,通过提高抗氧化酶水平和减轻细胞凋亡来抑制氧化应激损伤。

壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架与滑膜成纤维样细胞构建颞下颌关节盘的研究

目的 探讨利用滑膜成纤维样细胞（SFBs）及壳聚糖/Ⅰ型胶原（CS/COL-Ⅰ）复合支架构建颞下颌关节盘软骨的可行性.方法 获取兔颞下颌关节滑膜组织进行SFBs培养,第3～5代SFBs三维培养于通过冷冻干燥法制备的CS/COL-Ⅰ支架材料中7 d,用噻唑蓝（MTT）比色法分别在1、3、5、7 d检测支架材料对细胞增殖的影响.细胞支架复合物在体外经过人重组转化生长因子β1（rhTGF,10μg/L）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF,50 μg/L）诱导后,植入裸鼠体内4、8周后获取标本,进行组织学检测细胞在支架材料上的生长状态及黏多糖（GAGs）形成,免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量分析Ⅱ型胶原的表达.结果 支架材料表面及内部均呈多孔隙蜂窝状结构.SFBs在CS/COL-Ⅰ中的增殖要明显高于平板培养（P＜0.05）.细胞支架复合物植入裸鼠体内4、8周后,组织学及免疫组织化学半定量分析显示在8周时GAGs（6.900±0.316）和Ⅱ型胶原（0.0952±0.0248）IA/μm2与4周时GAGs（3.600±0.699）和Ⅱ型胶原（0.0411±0.0127）IA/μm2差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 体外诱导后的SFBs/CS-COL-Ⅰ复合物具有应用于组织工程化颞下颌关节盘构建的可能.

工程化颞下颌关节盘组织的细胞源问题:现状与展望

目的是为学者探索适当的颞下颌关节盘组织工程种子细胞提供参考。目前颞下颌关节盘组织工程正处于起步阶段,而细胞来源是制约关节盘组织工程发展的主要因素之一,本文概述了关节盘细胞、软骨细胞、皮肤成纤维细胞、骨髓基质干细胞、脂肪干细胞和胚胎干细胞等6种细胞作为关节盘组织工程细胞源的可行性,以便寻找一种合适的细胞源。

静水压联合IGF-1干预对山羊颞下颌关节盘细胞丝状肌动蛋白表达影响的实验研究

目的探讨静水压联合IGF-1对体外单层培养的山羊颞下颌关节盘细胞丝状肌动蛋白(filamentous actin,F-actin)的影响,分析静水压、IGF-1与F-actin的关系变化对细胞生物学行为改变的影响。方法取4只1月龄山羊双侧颞下颌关节盘,采用酶消化法分离培养颞下颌关节盘细胞,以Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定。取第2、3代细胞根据干预方法不同分为4组:A组以完全培养基培养,作为对照;B组以强度0.2 MPa、频率1 Hz的静水压作用3 h;C组以含10 ng/mL IGF-1的完全培养基培养;D组采用静水压与IGF-1联合培养,方法同B、C组。于干预后24、72 h行免疫荧光染色观察F-actin变化,测定单个细胞荧光强度。结果经形态学观察及免疫组织化学染色鉴定,所培养细胞为颞下颌关节盘细胞。干预24 h时A、C组细胞荧光染色强,保持了细胞正常形态,且分布清晰;B组F-actin排列紊乱;D组F-actin变细,排列混乱。72 h时A、C组F-actin排列整齐;B组F-actin排列紊乱、模糊不清,部分F-actin断裂,形成伪足;D组F-actin变细,排列紊乱、断裂。随时间延长,A、B、D组荧光强度均呈增强趋势,两时间点间比较差异有统计学意义(P<0.05);C组两时间点间比较差异无统计学意义(t=0.284,P=0.781)。干预24 h,C组荧光强度最高,B组最低,与A、D组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。72 h时,B、D组荧光强度显著低于A、C组,差异有统计学意义(P<0.05);B、D组间及A、C组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论静水压可以引起山羊颞下颌关节盘细胞F-actin发生断裂及重排,IGF-1上调F-actin的表达;静水压联合IGF-1诱导产生的F-actin断裂、重排可能引起细胞生物学行为的改变。

Ⅰ型胶原在人颞下颌关节盘穿孔病变细胞中的表达

目的:研究颞下颌关节盘穿孔时关节盘细胞合成及分泌Ⅰ型胶原能力的改变及其在颞下颌关节盘穿孔发生中的作用。方法:收集颞下颌关节髁突肥大(对照组)及颞下颌关节盘穿孔(实验组)患者因手术切除的手术标本,采用酶消化法原代培养,培养的细胞经甲苯胺蓝染色及免疫荧光染色鉴定为成纤维样细胞。应用酶联免疫吸附测定法检测关节盘细胞培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白的含量。采用蛋白质印迹法分析细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果:实验组及对照组的颞下颌关节盘均可培养出成纤维样细胞,甲苯胺蓝染色、Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原免疫荧光染色均表达阳性。对照组细胞培养48 h后上清液中Ⅰ型胶原的含量显著高于实验组(P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,实验组细胞内Ⅰ型胶原的蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。结论:颞下颌关节盘细胞表达及分泌Ⅰ型胶原含量减少,Ⅰ型胶原表达降低可能导致人颞下颌关节盘穿孔的发生及进展。