基于方差分析研究不同微生物方法对奶粉中泛酸含量测定的影响

采用国标方法、微生物试剂盒法和水浴提取国标法分别对质控样品及奶粉样品进行泛酸含量的测定,利用SPSS统计分析方法对结果进行分析评价。结果表明国标法标准曲线相关系数为R^(2)=0.9982,试剂盒法相关系数为R^(2)=0.9988,两者方法灵敏度高;3种方法的RSD为2.10%~3.11%,均小于5%;使用SPSS 2因素完全随机方差分析法、2因素重复测量分析法分别对质控样品及奶粉样品测定结果进行分析,发现3种不同方法对泛酸含量测定无显著影响(P>0.05)。人员比对实验数据精密度、正确度高、人员操作水平一致,数据显示实验室检验误差小,符合方法要求。结果认为3种方法测定结果并无统计学差异,以此依据对国标方法进行优化,提高了前处理效率,实验室可根据实际需求选用最佳方案。

胆固醇-3,4-^(13)C_(2)的合成

针对我国胆固醇-3,4-^(13)C_(2)产品制备方法空白,以乙酸苯酯-1,2-^(13)C_(2)和4-胆甾烯-3-酮为起始原料,合成胆固醇-3,4-^(13)C_(2)。总体标记合成路线采用胆固醇基础结构拆分后引入标记砌块再重构目标化合物结构的方案,其中4-胆甾烯-3-酮通过开环氧化、合环得到标记前体,乙酸苯酯-1,2-^(13)C_(2)作为^(13)C标记引入砌块与标记前体通过乙酰化反应得到乙酰化标记中间体,最后乙酰化标记中间体再经过碳环重构、酯化、还原反应得到^(13)C二标记的类固醇激素类化合物胆固醇-3,4-^(13)C_(2)。其中还原反应显示出一定的不对称合成现象。以投入的乙酸苯酯-1,2-^(13)C_(2)的物质的量计算反应总产率为16.2%。所得终产品经MS、NMR和HPLC表征确认,液相色谱纯度≥96%,液相质谱检测丰度≥98 atom%^(13)C,该产品可用于临床质谱、生物医药等领域检测用稳定同位素内标试剂以及临床质谱用疾病筛查试剂盒原料。

体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性分析

目的探讨体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性。方法采用6周龄BALB/c小鼠进行抗原免疫,构建杂交瘤细胞并克隆。采用动物体内诱导单克隆抗体的方法大量制备单克隆抗体,分别采用G柱亲和层析、蓝胶+Q柱离子交换层析两种方法进行纯化,核酸蛋白检测仪记录波长280 nm下的光密度(optical density,OD),紫外分光光度计测量成品浓度。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测该阻断剂(CN302)对假阳性样本的阻断能力。结果G柱亲和层析法提取阻断剂的收率(3个批次分别为6.49、6.12、6.27 g/L)高于蓝胶+Q柱离子交换层析法(3个批次分别为1.78、1.68、1.61 g/L)。两种纯化方法的纯度均高达95%以上。G柱亲和层析法、蓝胶+Q柱离子交换层析法所得阻断剂的活性分别为106.54%、92.45%;与空白组相比,两种纯化方式所得阻断剂CN302对假阳性样本的检出率均降低,其OD值均小于0.2,与基准阻断剂大致相同。G柱亲和层析法所得阻断剂CN302未冻融的活性为99.86%,冻融5次后活性为99.83%。无阻断剂存在时,对假阳性样本检测的OD值约为2.5,最高可达到4.0;加入阻断剂后,OD值明显降低;阻断剂CN302对假阳性样本检测的OD值低于其他阻断剂。结论本研究所得阻断剂能显著消除样本内源性干扰,且活性几乎全部保留。G柱亲和层析法提取抗体的收率和阻断能力均高于蓝胶+Q柱离子交换层析法。

量子点标记的新型冠状病毒抗体试剂盒行业分析

新型冠状病毒感染全世界大流行阶段,随着对新型冠状病毒感染的预防、确诊及治疗等方面认识的不断深入,各种体外检测技术与应用产品成为研发人员关注的重点。相较于传统的基因测序及应用广泛的核酸检测,或同为免疫学检测试剂盒的胶体金免疫层析、酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光等技术,新型纳米材料免疫标记试剂盒是一种兼具快速、简便和灵敏度、特异度良好等优点的新型冠状病毒检测方法。本文通过比较不同新型冠状病毒检测方法,重点阐述新型纳米材料免疫标记新型冠状病毒检测试剂盒的商业价值及其潜在应用价值。

6种商品化酶抑制-比色法农残速测试剂盒测定5种农药的比较研究

使用6种商品化酶抑制-比色法农残速测试剂盒在5个浓度水平下测定乐果等5种农药的抑制率,绘制抑制率对农药浓度的效应曲线图,用抑制率和农药浓度的对数进行线性拟合,求出决定系数、IC_(50)和IC_(10),根据IC_(10)以试剂盒对乐果等5种农药的敏感性进行比较研究。结果表明:6种试剂盒对乐果和甲基异柳磷均不敏感,对其他3种农药的敏感性也各不相同,就所测定的5种农药而言,试剂盒C较优。综合而言,为适应市场监管和试剂盒检测方便,建议生产商在生产试剂盒时,对所使用的酶和底物进行测定,必要时将几种不同来源、性质相近的酶按一定的比例进行混合,以使试剂盒敏感的农药更多,从而减少假阴性样品。

市售酶抑制-比色法农残速测试剂盒对多种农药的敏感性测定

【目的】为全面了解市售酶抑制-比色法农药残留快速检测试剂盒的品质,使其在农产品检测与监管工作中发挥更大作用。【方法】采用产自广州的达园品牌的酶抑制-比色法农药残留快速检测试剂盒,对28种农药的敏感性进行测定。【结果】该试剂盒对各农药的敏感性存在显著性差异,在所测定的28种农药中,试剂盒对克百威和涕灭威亚砜的敏感性较强,对二嗪磷、甲拌磷、三唑磷、蝇毒磷、倍硫磷、水胺硫磷、地虫磷、乐果、甲基异柳磷、丙溴磷10种农药的敏感性极低;对杀扑磷的敏感性在样品提取液取用3 mL和2.5 mL之间产生较大差异,测定甲基对硫磷时抑制率和农药浓度对数之间不存在线性关系。【结论】按照50%的判定阈值进行判定,在所测定的28种农药中,只有当样品中含有克百威、涕灭威砜、辛硫磷和喹硫磷时可以报出阳性。酶抑制-比色法农药残留快速检测试剂盒对各种不同农药敏感性的巨大差异是引起该试剂盒测试样品产生的假阳性、假阴性检测结果的原因之一,需要引起相关人员的重视。建议国标和行标修改判定阈值。

白喉棒杆菌核酸检测试剂用国家参考品的研制

目的:研制白喉棒杆菌核酸检测试剂用国家参考品。方法:将6株白喉棒杆菌和10株非白喉棒杆菌代表性菌株在各自适宜的环境下培养,经菌株鉴定后,制备灭活菌液,对候选参考品进行均匀性和稳定性的评估以及准确性、特异性、重复性和最低检出限的验证研究,并组织3家实验室进行协作标定。结果:研制出白喉棒杆菌核酸检测试剂用候选参考品,由6个阳性参考品、10个阴性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品组成。证实该候选参考品均匀性及稳定性良好,准确性、特异性及重复性好,最低检出限可达1.0×10~3~1.0×10~4个菌·m L^(-1)。协作标定结果也进一步表明阳性、阴性、重复性和最低检出限候选参考品均符合国家参考品的各项要求。结论:研制出的白喉棒杆菌核酸检测试剂参考品,可用于相关试剂盒的质量控制和评价。

乙肝病毒核心相关抗原检测试剂盒的研发及临床检测

目的:研发一种检测乙肝病毒核心相关抗原(hepatitis B core-related antigen,HBcrAg)的定量检测试剂盒并评价其性能。方法:通过研究原材料抗体、优化制备工艺和调整反应体系建立HBcrAg化学发光免疫检测方法,组装成试剂盒后利用重组HBcrAg和临床血清进行检测性能评估,数据处理使用IBM SPSS Statistics 20软件。结果:该试剂盒标准曲线为y=143.37x+344.91,R^(2)=0.9998;检测灵敏度为1.43 pg/mL;健康人参考区间≤25.595 pg/mL;检测208例慢性乙型肝炎患者血清,所有(18/18)乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA10^(8)~10^(4)IU/mL血清HBcrAg检出值都在这个临界值以上;92.31%(24/26)HBV DNA10^(3)~10^(2)IU/mL血清HBcrAg检出阳性;44.51%(73/164)HBV DNA低于检出限血清HBcrAg检出阳性。结论:本试剂盒能较好地检测慢性乙型肝炎患者血清中的HBcrAg水平,在辅助慢性乙型肝炎患者治疗效果监测和正确判断治疗终点方面具有重要应用价值。

非洲猪瘟诊断制品注册评审现状分析

2018年8月,非洲猪瘟在我国沈阳首次爆发,随后蔓延至全国,给我国养猪业造成了重大经济损失。利用诊断制品对猪群非洲猪瘟感染情况进行检测与早期诊断,是预防和控制非洲猪瘟的有效手段。2019年以来,非洲猪瘟诊断制品注册申报数量居高不下,但常因申报资料存在各种问题未通过注册评审。鉴于此,对我国非洲猪瘟诊断制品注册申报情况、评审评价政策以及不符合注册要求的原因进行了分析,并提出了相关建议,供非洲猪瘟诊断制品研发、注册人员参考。

新型冠状病毒抗原检测试剂注册现状分析

目的:为企业注册新型冠状病毒抗原检测试剂提供参考。方法:汇总2021~2022年我国新型冠状病毒抗原检测试剂注册概况,结合我省在初核中发现的问题和国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心反馈的意见,对新型冠状病毒抗原检测试剂注册过程中常见问题进行分析。结果:全国已有50个新型冠状病毒抗原检测试剂获批,申报资料常见问题主要集中在非临床资料和临床资料。结论:注册申请人应认真研读并严格按照《新型冠状病毒(2019-nCoV)抗原检测试剂注册审查指导原则》等相关法规提交申报资料,及时与国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心沟通,利于产品获批。

定量检测幽门螺杆菌感染的胶乳比浊试剂研究

将重组表达的幽门螺杆菌(Hp)上的尿素酶B(UreB)蛋白与黏附素(HpaA)蛋白通过化学反应,偶联到聚苯乙烯微球上,并置换到保存液中,制备出幽门螺杆菌的抗体检测试剂2(R_(2))。结合抗原抗体反应特性及降低血清中非特异性吸附,制备出幽门螺杆菌的抗体检测试剂1(R_(1))。R_(1)与R_(2)搭配使用构成了定量检测人血清中幽门螺杆菌的抗体检测胶乳试剂盒。可以发现,制备20 mL胶乳R_(2),包被幽门螺杆菌UreB蛋白与HpaA蛋白各1.6 mg,同时聚苯乙烯微球粒径为190 nm时,试剂效果最好。该试剂盒通过对1000例常州本地随机临床样本与室间质评样本进行评测,发现常州本地随机临床样本的阳性率为34.6%,室间质评样本的检测结果与上海临床检验中心公布结果一致,试剂盒性能较好。

季铵盐残留快速测定试剂盒的研制及应用

本文采用虎红钠盐-柠檬酸体系研制出了一种季铵盐残留浓度现场快速检测试剂。探讨了反应体系pH、指示剂浓度、显色温度、干扰离子等影响因素并提出了测试时的注意事项。快速检测试剂结合分光光度计在最佳测试波长565 nm处的线性范围为:0.1~6.0 mg/L,标准曲线方程为:y=0.0653x+0.010,相关系数为:R^(2)=0.9997;在此浓度范围内也可结合目视比色卡进行快速测试。该方法应用于模拟水样的测试,回收率在97%~104%之间。该试剂盒检测速度快、操作简便、灵敏度高,结果可靠,具有较高的实际应用价值。

不同提取方法和检测试剂在新型冠状病毒核酸检测中的应用效果评价

目的:探讨不同提取方法联合检测试剂在新型冠状病毒核酸检测中的应用价值。方法:选取2022年1月至2022年12月国家卫健委临检中心和江西省临检中心下发的新冠核酸样本50份作为检测样本,均为阳性样本,分别采用不同核酸提取方法及检测试剂开展核酸检测,即磁珠法+试剂A、磁珠法+试剂B、核酸释放剂法+试剂A、核酸释放剂法+试剂B,比较不同试剂组合对阳性样本的检出情况,包括不同基因检出率、双基因同时检出率、有效检出率。结果:磁珠法+试剂A与磁珠法+试剂B双基因同时检出率、有效检出率相比,差异无统计学意义(P>0.05);核酸释放剂法+试剂A与核酸释放剂法+试剂B双基因同时检出率、有效检出率相比,差异无统计学意义(P>0.05);磁珠法+试剂A、磁珠法+试剂B双基因同时检出率、有效检出率高于核酸释放剂法+试剂A、核酸释放剂法+试剂B,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:磁珠法核酸提取在新型冠状病毒核酸检测中价值更高,且两种试剂检测结果相当,试剂B能缩短扩增时间,磁珠法核酸提取配合试剂B更利于疾病早期筛查。

高价值塑料成分萃取装置设计

新型可降解塑料的大范围使用虽然缓解了传统塑料难降解的难题,保护了现有环境,却也带来了其他的问题,特别是可降解塑料在高温下与食物长期接触,仍会加快释放出双酚A、塑化剂等有害物质,而如何快速高效地检测塑料中是否存在有害物质,并确定其中的含量成为现在的重中之重,然而现在的检测方法程序复杂,检测量单一,为此设计了一款操作简单,检测效率高效的塑料成分萃取装置,通过更换不同的萃取材料实现对塑料中不同物质的含量进行萃取。

核酸检测试剂盒塑料激光焊接结构及工艺研究

为解决核酸检测试剂盒激光焊接漏液问题,该研究通过激光焊接轨迹、焊接次序、焊接功率、焊接速度及工件定位方式调整及上层核酸检测试剂盒盖焊接槽结构、下层核酸检测试剂盒焊接筋结构的设计和改进,采取梯形焊接筋配合焊接槽结构组合,使用单圈多轨迹激光路径、调整不同内外圈焊接次序、焊接功率和焊接速度控制焊接温度,增大激光覆盖面积,克服装配系统性误差,在不改变激光器对焦焦距的前提下降低激光器使用功率增加激光器寿命。通过试验得出,当色母添加比例为1%,激光焊接功率为50 W,激光焊接速度为1000 mm/s,焊接圈数为3,激光光斑直径为0.8 mm时,漏液比例达到最低的0,焊缝剪切强度最高,为37 MPa,且焊缝清洁无烟尘,焊缝内部无气孔的存在,此时焊缝剪切强度最高,焊接漏液率小于万分之一。

四环素类药物多残留酶联免疫检测方法

【目的】构建一种四环素类药物多残留酶联免疫检测试剂盒。【方法】将四环素类药物与载体蛋白相连作为抗原免疫动物,获得了抗四环素类药物的抗体,建立了动物性食品中四环素类药物残留的ELISA检测方法,并将该试剂盒的检测性能与进口试剂盒比较,对实际样品的测定结果与高效液相-串联质谱法比较。【结果】人工抗原中四环素与蛋白质分子的结合比约为15﹕1,血清效价达到1﹕2000倍以上,50%抑制浓度(IC50)为3μg·L-1左右,7种四环素类药物交叉反应率在58%～100%之间,牛奶和鸡肉中四环素类药物的检测限分别为6.6μg.L-1和6.5μg·kg-1,在鸡肉中四环素、土霉素和金霉素的回收率在40%～120%之间。【结论】试剂盒的最低检测限为0.3μg·L-1,检测范围为0.3～30μg·L-1,可同时测定兽医常用的四环素、金霉素、土霉素和多西环素4种药物残留。灵敏度、精密度和准确度均能满足兽药残留检测要求。

禽流感间接ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感间接ELISA快速诊断技术试剂盒化 ,确定其外包装、规格、盒内组成 ,对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品比较、保存期等进行了全面、详细的研究。试剂盒由 9种成套试剂组成 ,在 - 15℃至 - 2 0℃保存 5 40天各项性能仍然很好。该试剂盒与进口禽流感间接ELISA诊断试剂盒对同样血清样品检测 ,符合率为 10 0 %。拥有该试剂盒 ,只需准备生理盐水 ,即可对大量血清样品同时进行检测 ,操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、稳定、快速 ,更适合于禽流感免疫抗体的监测及现地疫病诊断等需要。先后制备诊断试剂盒 16个批次 ,已成功应用于我国省、市兽医站、兽医研究所、农业院校、农科院、农业公司、口岸检疫部门及鸡场等各领域对禽流感的定性诊断、流行病学调查、免疫抗体监测等。

鸡传染性法氏囊病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

采用 vero细胞增殖的 IBDV抗原建立了间接 EL ISA,用于定量检测 IBDV抗体。对该方法进行了标准化研究 ,确立了该方法的最佳工作条件。在此基础上研制了相应的诊断试剂盒 ,并对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品的比较、保存期等进行了全面、详细的研究。结果表明 ,研制的试剂盒在 - 2 0℃保存至 6个月时各项性能都很好。该试剂盒与进口试剂盒对同样血清样品检测 ,符合率为86 .7%。间接 EL ISA试剂盒与琼扩试验的符合率为 92 .5 %。该试剂盒可对大量血清样品进行检测 ,操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、快速 ,更适合于大型鸡场 IBD免疫抗体水平的监测及现地疫病诊断等需要。

链霉素残留检测ELISA试剂盒的研制及应用

本研究采用EDC法人工合成链霉素抗原（SM—BSA），免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤技术获得了分泌抗链霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，建立了快速检测链霉素（SM）残留的酶联免疫方法，并成功研制了试剂盒。然后对其灵敏度、准确度、特异性、基质效应性等技术指标进行检测，同时应用该试剂盒对生长猪尿液中的残留情况进行检测。结果表明：除双氢链霉素外，该试剂盒与其它抗生素类药物均无交叉反应；线性检测范围为1～1289g／L，相关系数R^2=0．9251，灵敏度为0．45μg／L，半数抑制浓度（IC50）为7．769g／L，检测限为19g／L；猪尿样的平均添加回收率为84．1％；基质对该试剂盒的检测结果影响不大。该试剂盒具有快速、敏感、特异、简便等特点，适合于SM残留的快速检测，具有较高的推广应用价值。

Prev-DAF试剂盒分析线粒体基因1555A-G突变

目的建立应用标准试剂盒方法检测线粒体基因1555A-G(mtDNA1555A-G)突变的程序,进行母系遗传耳聋家系的基因型分析。方法采用Prev-DAF试剂盒分析14个母系遗传耳聋家系,共检测耳聋患者34个,正常个体11个,并以Alw26酶切和测序方法验证试剂盒检测的准确性。结果Prev-DAF试剂盒检测结果证实13个家系中33个耳聋患者携带有mtDNA1555A-G突变,另1个耳聋家系中的一名耳聋患者不携带此突变,11个正常个体中无此突变,试剂盒检测方法与Alw26I酶切法和测序结果完全吻合。结论在中国,mtDNA1555A-G氨基糖甙类抗生素致聋的家系多,分布广,Prev-DAF试剂盒在分析线粒体基因1555A-G突变方面具有简单、低耗、结果直观的特点,适合在中国用于进行此突变的大规模筛查或预防性检查。