三黄降糖片及其主要成分对羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶的抑制作用

目的:研究三黄降糖片及其主要成分对羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶的抑制作用。方法:在反应体系为70 mmol/L磷酸盐缓冲液、200 mmol/L NADPH、5μg HMG-Co A还原酶、2 mmol/L EDTA、2 mmol/L半胱胺、0.06%BSA中,加入浓度1、5、25、125μg/m L的三黄降糖片,三黄降糖片的主要成分大黄的水煎液和HMG-Co A还原酶抑制剂普伐他汀,然后加入37℃预热的HMG-Co A(0.6μg/m L)启动反应,检测在340 nm中反应前后其酶的即时活力、15 min内其酶的活力变化和NAPDH下降率。结果:HMG-Co A还原酶抑制作用强弱为普伐他汀>三黄降糖片>大黄水煎液,三种药物在浓度范围内呈现剂量效应关系。与浓度0μg/m L比较,三种药物在浓度25μg/m L和浓度125μg/m L时的抑制作用显著增强(P<0.05),NADPH下降率显著增加(P<0.05),而浓度为125μg/m L时,抑制作用会随时间延长而有所降低,浓度为25μg/m L时抑制作用变化不大。结论:三黄降糖片及其主要成分对HMG-Co A还原酶有一定的抑制作用,是其降脂的作用机制之一。

Hrd1转基因小鼠的构建与验证

背景 内质网应激在糖尿病视网膜病变（DR）中发挥着重要作用.羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1（Hrd1,又名Syvn1）作为一种内质网相关蛋白降解（ERAD）途径中的核心蛋白,能够减少内质网应激. 目的 构建Hrd1高表达小鼠,为今后研究Hrd1在DR中的作用提供动物模型. 方法 构建Hrd1系统表达重组质粒,酶切、测序后显微注射3 p1到685枚C57BL/6小鼠受精卵中,移植到代孕母鼠,得到Hrd1转基因小鼠.利用鼠尾PCR检测法鉴定F0代小鼠的基因型.得到Hrd1基因检测阳性鼠后,使其分别与野生型鼠杂交,得到F1代Hrd1转基因小鼠,取鼠尾组织,用PCR检测法再次鉴定F1代小鼠基因型. 结果 成功构建了Hrd1重组载体,重组质粒pRP.ExBi-EF1 a-Syvn1-IRES-eGFP的全序列测定结果显示,cDNA序列均正确.接受了Hrd1-pcDNA显微注射的685枚受精卵中成活598枚.将存活的受精卵移植到代孕母鼠后共产子鼠41只,获F0代子鼠8只,生理活动均良好.PCR电泳显示339 bp处阳性条带,该基因型可以传递到子代F1.结论 成功构建了Hrd1转基因小鼠.