基于GC-MS和生物信息学研究丁香挥发油“启郁开闭”防治银屑病的成分及机制

[目的]通过气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)鉴定丁香挥发油的成分,生物信息学预测其可能作用机制。[方法]GC-MS分析成分后,使用SwissADME平台对活性成分进行筛选,通过Swiss和GeneCards数据库获取这些活性成分与疾病相关的靶点,再通过Cytoscape软件构建化合物-靶点网络,采用String平台、Cytoscape软件构建靶点蛋白互作(PPI)网络,筛选关键靶点,将核心靶点导入DAVID数据库完成功能富集(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析,采用GEO芯片进行核心靶点的外部验证和ROC分析,最后利用AutoDock软件进行分子对接验证。[结果]从丁香挥发油中共鉴定出10个主要成分,且均满足“类药五原则”。预测到丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、肿瘤坏死因子(TNF)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、酪氨酸蛋白激酶(SRC)、胱天蛋白酶3(CASP3)等关键靶点,外部验证结果显示6个关键靶点表达均具有差异,TNF具有诊断价值。富集分析得到了117个生物过程和114条信号通路。分子对接实验显示,大多数活性成分与其关键靶点具有良好的结合能力。[结论]丁香挥发油可能通过其中的活性成分如丁香酚等以及关键靶点如AKT1等来调控信号传导、蛋白质磷酸化与细胞分化等多个生物学过程,从而协同发挥防治银屑病的作用。

不同提取方法对丁香精油体外杀螨效果的影响

目的探讨不同提取方法获取的丁香精油对蠕形螨的体外抑杀效果。方法采用水蒸气蒸馏法、乙醇回流法和超临界二氧化碳萃取法获取丁香精油；采用挤黏结合法获取蠕形螨；镜下观察丁香精油对人体蠕形螨的抑杀效果。结果3种提取方法获取的丁香精油对蠕形螨均有较好的抑杀效果，差异无统计学意义，但是超临界二氧化碳萃取法与水蒸气蒸馏法对两种人体蠕形螨抑杀效果比较，差异有统计学意义（P〈0．005），3种提取方法获取的丁香精油对两种人体蠕形螨的抑杀效果与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．005）。超临界二氧化碳萃取法获取的丁香精油含量最高，3～5min内抑杀效果优于其他方法。结论超临界二氧化碳萃取法因提取率高，提取时间短，无溶剂残留，抑杀蠕形螨效果好，是选择和应用含挥发油类中药材进行抑杀蠕形螨实验的一种首选提取方法。

不同方法提取丁香中挥发油的比较

目的:筛选丁香中挥发油的最佳提取方法。方法:采用6种不同方法提取丁香挥发油,以提取的挥发油体积及挥发油中丁香酚的含量为指标,筛选从丁香中提取挥发油的最佳方法。结果:比较挥发油量及油中丁香酚总量,超临界二氧化碳萃取法明显优于其他5种方法。结论:超临界二氧化碳萃取法因为提取率高,提取时间较短,提取温度较低,而且无溶剂残留,是提取丁香中挥发油值得推广和有前景的一种方法。

五种植物挥发油霜抗人体蠕形螨作用的研究

目的:观察五种不同的植物挥发油霜对人体蠕形螨杀灭作用的情况,筛选出新的天然杀螨药物。方法:在室温18℃～26℃,相对湿度为60%～70%的条件下,从我科门诊患者和健康人群的额部、双颊、鼻部、鼻唇沟取蠕形螨,立即加入不同植物挥发油霜,显微镜下观察蠕形螨的存活情况,筛选出此五种植物挥发油中杀螨效果最佳者,又对其进行不同浓度抗蠕形螨作用的显微镜观察。结果:姜黄、丁香、桉叶、珊瑚姜、木姜子这五种植物的挥发油霜均有不同程度的杀灭人体蠕形螨作用,随着药物作用时间的延长,螨虫死亡率明显增高,而其中姜黄油霜的杀螨效果最强,加药后2h螨虫死亡率有显著性差异(P<0.05,与基础霜比;P<0.05,与木姜子油霜比;P>0.05,丁香、桉叶、珊瑚姜、木姜子这四种植物挥发油霜的螨虫死亡率差别无显著性)。桉叶油霜及新肤螨灵霜的杀螨作用次强(P<0.05,与基础霜比)。而且,随着加药时间的延长,姜黄油霜组螨虫形态结构发生变化与基础霜比差异有显著性(P<0.05),而其他的各组与基础霜比差异无显著性(P>0.05)。结论:姜黄、丁香、桉叶、珊瑚姜、木姜子这五种植物挥发油霜有抗人体蠕形螨的作用,其中以姜黄挥发油霜的作用最强。我们的研究为临床治疗蠕形螨的天然药物开发打下了一个基础。

丁香普通粉及超微粉中挥发油的化学成分研究

目的对丁香普通粉及超微粉中挥发油的化学成分进行分析和比较。方法采用水蒸气蒸馏法提取丁香普通粉及超微粉中挥发油,运用气相色谱-质谱联用法对其化学成分进行分析、鉴定和比较,用气相色谱面积归一化法测定各组分的相对百分含量。结果经气相色谱-质谱联用技术,从丁香普通粉中分离出23个峰,从丁香超微粉中分离出27个峰。结论报道了丁香普通粉及超微粉中挥发油的化学成分,为超微粉碎在含挥发油类中药中的应用提供了一定的依据。

丁香中挥发油的提取及其β-环糊精包合物制备工艺研究

目的研究丁香中挥发油提取及其β-环糊精包合物制备的最佳工艺。方法采用L9(34)对影响丁香中挥发油的提取工艺的浸泡时间、加水量、提取时间等条件做了优化实验;以包合温度、投料比、包合时间为考察因素,以包合物收率为考察指标,优选最佳包合工艺。结果确定最佳提取工艺条件为B2A3C3:即加水量6倍,浸泡3h,提取5h。环糊精包合的最佳工艺为A3B2C2,即包合温度50℃,搅拌1h,投料比为1:7。结论确定了丁香中挥发油的最佳提取工艺,并优选出了其包合物的最佳包合工艺,经验证包合物与混合物有明显区别。

正交实验优选丁香挥发油提取工艺研究

目的 :研究优选丁香挥发油最佳工艺条件。方法 :采用水蒸汽蒸馏法 ,正交实验考察了四因素 (粒度、浸泡时间、加水量、提取时间 )三水平对其得量的影响。结果 :丁香挥发油的最佳工艺条件为粗粉 ,加 8倍量水 ,浸泡 4 0 min,提取 5 h。结论 :通过验证实验 ,表明所选的工艺条件可行。且挥发油 4～ 5 h可提取完全 ,4 h的平均收率为 98.6 1% (ml/ g)。

参黄凝胶膏剂中丁香挥发油对大黄酸的经皮渗透作用

目的探讨参黄凝胶膏剂中丁香挥发油对大黄酸的经皮渗透作用。方法采用改良Franz扩散池法,考察丁香挥发油对大黄酸透皮特性的影响。以大黄酸释放度为评价指标,立式扩散池结合透析袋法研究参黄凝胶膏剂体外释放行为。结果 3%丁香挥发油促透效果强于3%氮酮、3%薄荷挥发油,累积渗透量(120. 11±8. 84)μg/cm2,增渗倍数2. 93。体外释放行为与Weibull模型拟合度最高(r=0. 999 8)。结论丁香挥发油能显著增加参黄凝胶膏剂中大黄酸的透皮吸收。

β-环糊精包合丁香油的工艺研究

目的:研究β-环糊精(β-CD)包合丁香油的最佳工艺。方法:采用高效液相色谱法、正交试验法、饱和水溶液法对β-CD包合丁香油的工艺进行研究,以包合物收得率,包合率作为指标,确定最佳包合工艺。结果:β-CD包合丁香油的最佳工艺为丁香油:β-CD(mL:g)为1:8,包合温度为60℃,包合时间为2h。结论:采用高效液相色谱法、正交试验法能准确确立β-CD包合丁香油的最佳工艺。

积雪草等3种挥发油对盐酸氟西汀体外经皮渗透性的影响

目的考察不同浓度积雪草、丁香、辛夷挥发油对盐酸氟西汀的体外经皮渗透作用。方法采用改良Franz扩散池,以大鼠离体皮肤为渗透屏障,以氮酮为阳性对照,含30%乙醇的盐酸氟西汀溶液为阴性对照,考察不同体积分数的积雪草、丁香、辛夷挥发油对盐酸氟西汀的经皮渗透影响。通过高效液相色谱法测定药物浓度,计算盐酸氟西汀透皮吸收的累积透过量、透过速率和增渗倍数。结果不同体积分数的挥发油中,以10%积雪草挥发油、3%丁香挥发油、5%辛夷挥发油经皮渗透速率最大,渗透速率分别为74.94、207.55、152.81μg·cm-2·h-1/2。结论 10%积雪草挥发油、3%丁香挥发油、5%辛夷挥发油对盐酸氟西汀经皮吸收具有显著的促进作用。

公丁香挥发油体外舒张大鼠胸主动脉研究

目的公丁香挥发油舒张大鼠胸主动脉,并结合阻断剂初步探讨其舒张机制。方法按照中国药典水蒸气蒸馏法提取公丁香挥发油,气相-质谱联用技术(GC-MS)检测挥发油成分;分离SD大鼠胸主动脉,采用离体血管环实验,观察公丁香挥发油对苯肾上腺素预收缩引起的舒缩功能的反应,并结合不同抑制剂处理,探讨公丁香挥发油作用血管环的可能机制。结果由GC-MS图谱得知,公丁香挥发油主要成分是丁香酚、石竹烯;累计浓度的公丁香挥发油对苯肾上腺素预收缩的血管环在内皮完整最大舒张率可达76.52%;结合一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)孵育半小时结果显示有明显抑制公丁香挥发油血管舒张的作用;结合环氧合酶抑制剂吲哚美辛孵育半小时结果显示无明显抑制公丁香挥发油血管舒张的作用。结论公丁香挥发油对大鼠胸主动脉确有舒张作用,其作用途径可能跟一氧化氮合酶有关,跟环氧合酶合成无关。

丁香油提取方法研究

目的:在几种常规提取方法中筛选出提取丁香挥发油的工艺。方法:采用高效液相色谱法对丁香酚进行含量测定,确定丁香油的提取工艺。结果:丁香油的提取方法为乙醇回流提取法。结论:采用高效液相色谱法能准确测定丁香酚的含量,进而确立丁香油的提取方法。

丁香配方颗粒中挥发油的测定及其质量控制

目的:测定丁香配方颗粒中挥发油的含量并尝试建立其质量控制的方法。方法:采用挥发油测定器对丁香总挥发油含量进行测定,以TLC法对其中的挥发性成分进行薄层鉴别,并通过HPLC测定丁香配方颗粒中丁香酚的含量。结果:总挥发油提取过程中二甲苯加入量为1. 5 ml,提取时间为4 h时,其提取率最高,批间平均提取率为12. 24 ml·g^(-1),薄层色谱斑点清晰,分离度好,可较好检出挥发性成分丁香酚;建立的HPLC法表明丁香酚在1. 01～303. 89μg·ml^(-1)范围内呈良好的线性关系(r=1. 000 0),平均加样回收率为100. 65%,RSD为2. 15%(n=9)。结论:所建立的定性、定量方法操作简单、结果准确可靠且重现性好,可有效用于丁香配方颗粒中挥发性成分的质量控制。

佛香精油脂质体凝胶的制备及其抗痤疮丙酸杆菌作用研究

目的制备佛香(佛手∶丁香)=(1∶3)精油脂质体凝胶,研究其抗痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes,P.acnes)作用机制。方法采用薄膜水化-高压均质法制备佛香精油脂质体,再进一步负载于卡波姆基质,即得佛香精油脂质体凝胶;利用傅里叶红外光谱、差示扫描量热仪分析精油装载状态;气相色谱-质谱联用技术分析筛选精油指标成分;改良Franz扩散池研究制剂体外经皮渗透和皮肤滞留性能;通过测定佛香精油脂质体凝胶对P.acnes抑制率、碱性磷酸酶、总蛋白及细胞膜含量研究其抑菌机制。结果佛香精油装载于脂质载体疏水区内;佛香精油中指标成分为D-柠檬烯和丁香酚;佛香精油脂质体凝胶可提高精油稳定性及皮肤滞留量;佛香精油脂质体凝胶在精油含量为1.068 mg·mL^(−1)时对P.acnes的抑制率可达到(65.9±1.7)%,可通过破坏细菌细胞壁、细胞膜结构和降低细菌蛋白质合成而抑制P.acnes生长。结论佛香精油脂质体凝胶有助于提高精油脂质体稳定性且发挥缓释作用,延长药物抑菌时效,达到长效抑菌效果。

抗幽门螺杆菌活性挥发油的筛选、药效物质分析及其作用机制预测

目的探讨抗幽门螺杆菌(HP)活性挥发油的药效物质,初步预测潜在活性成分及其作用机制。方法微量稀释法(96微孔板)测定丁香、广藿香、紫苏、牛至、枳实、厚朴、薄荷、肉桂8种挥发油对HP的抑制率,筛选出抑菌活性最强的3种挥发油。气相色谱-质谱法联用(GC-MS)分析3种挥发油的化学成分,利用TCMSP、Swiss TargetPrediction、PubChem数据库获取3种挥发油主要活性成分及其对应靶点信息;网络药理学技术预测其潜在活性成分、相关通路及关键靶点;AUTODOCKVina软件对核心成分及关键靶点基因进行分子对接,初步验证潜在活性成分及关键靶点。结果广藿香、牛至和肉桂挥发油抑制90%细菌生长的最低药物浓度(MIC_(90))分别为0.250、0.250、0.125μL·mL^(-1),具有较强的抑菌活性;从以上3种挥发油中分别鉴定出27、26、15个化学成分,共筛选出15个活性成分,涉及232个基因靶点,影响了与抑制HP相关的癌症通路、化学致癌-受体激活及EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性等275条信号通路;分子对接验证结果显示3种挥发油抗HP与SRC蛋白密切相关,15个活性成分与关键靶点SRC的结合较为稳定。结论广藿香、牛至、肉桂3种活性挥发油通过多成分、多靶点、多通路的形式发挥抗HP作用。

丁香挥发油与氮酮对双氯芬酸钠促透作用的比较研究

目的:比较丁香挥发油与氮酮对双氯芬酸钠的促透作用。方法:在体外透皮吸收装置上,测定不同时间双氯芬酸钠的透过量,计算稳态流量和增渗倍数,并考察其储库效应。结果:丁香挥发油和氮酮均有促进双氯芬酸钠经皮渗透的作用,当二者合用时效果更显著。丁香挥发油与氮酮单用及合用时对双氯芬酸钠的储库效应均有显著的增强作用(P<0.05或P<0.01)。结论:丁香挥发油对双氯芬酸钠具有较强大的促透作用,可望开发成为一种透皮吸收促进剂。

丁香挥发油理化性质、提取工艺参数与其芳香水稳定性的相关性研究

目的采用改进的挥发油提取器提取丁香乳化芳香水,研究不同冷凝温度与不同收集温度下所得乳化芳香水的稳定性及不同温度下丁香挥发油的理化参数与乳化芳香水稳定性的相关性,为丁香挥发油的提取工艺参数的优化提供指导。方法应用表面张力测定仪、乌氏黏度计等测定不同温度下的丁香挥发油的密度、黏度、表面张力、界面张力,并应用稳定性分析仪测定不同提取温度、收集温度下提取所得的乳化芳香水1 h内的稳定性及其粒径,应用多元数据分析分别研究挥发油提取工艺参数、理化性质与乳化芳香水稳定性之间的关系。结果随温度的升高丁香挥发油的相对密度、黏度、表面张力逐渐降低,界面张力呈现先升高后下降的趋势。丁香芳香水的稳定性动力学指数(TSI)与界面张力及冷凝温度呈负相关,与收集温度、密度、黏度、表面张力呈正相关。结论提取过程中收集温度、界面张力及冷凝温度对丁香挥发油与芳香水的稳定性有一定的相关性,可通过控制收集温度、冷凝温度、界面张力来改变挥发油乳化芳香水的油水分离速度,对其提取工艺提供指导。

丁香油超高压提取工艺的优化及其抗肿瘤研究

目的优化丁香油的提取工艺并研究其抗肿瘤活性。方法采用超高压提取丁香干燥花蕾中的精油,通过单因素试验与正交试验优化其取工艺;并通过CCK-8法检测丁香油对正常结肠上皮细胞、HT29和SW480两种结肠癌细胞的增殖抑制情况;采用Western Blot法检测丁香油处理后的两种结直肠癌细胞中凋亡相关蛋白的表达情况。结果通过单因素与正交试验确定的最佳提取条件为:粉碎粒度60目,料液比1:14,保压时间50 min,提取压力400 MPa;得率最高可达19.58%,相比传统水蒸气蒸馏提取法的得率提高了33.92%。CCK-8法结果显示:丁香油对HT29和SW480两种结肠癌细胞增殖的抑制呈现时间-剂量依赖性,差异具统计学意义,且对正常结肠上皮细胞无不良反应。Western Blot结果显示:与空白对照组比较,中、高浓度丁香油能显著上调细胞内促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达;低、中、高浓度丁香油均能显著下调细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论丁香油可抑制结肠癌细胞的生长。