安徽甜瓜和栝楼蔓枯病的病原菌鉴定及其有效药剂筛选

为明确安徽舒城和巢湖地区甜瓜和栝楼蔓枯病的病原菌种类,2021—2022年对该地区的甜瓜和栝楼蔓枯病的病组织进行病原菌的分离和培养,利用柯赫式法则验证其致病性。通过对分离菌株的形态学特征,以及ITS、LSU和TUB2多位点序列分析,确定引起甜瓜及栝楼蔓枯病的病原菌为亚隔孢壳菌Stagonosporopsis citrulli。采用菌丝生长速率法测定了7种杀菌剂对病原菌代表性菌株的室内毒力,结果显示,啶酰菌胺、咪鲜胺对其抑制效果较好,其EC_(50)值在0.010 6~0.043 8μg·mL^(-1),可优先选择这两种药剂进行轮换使用防治该病害。

栝楼蔓枯病病原鉴定及不同中草药提取物的抑菌活性研究

为探明栝楼蔓枯病的发生情况及病原种类,筛选出针对该病害的高效植物源抑菌剂,本研究对安徽省潜山市栝楼基地蔓枯病的田间症状进行了调查,对其病原进行了分离和纯化。根据形态学和分子生物学鉴定结果,将栝楼蔓枯病病原确定为Stagonosporopsis caricae。通过室内抑菌试验,测定了20种中草药提取物对S.caricae的抑菌活性,发现当提取物质量浓度为15 mg·mL^(-1)时,蛇床子、博落回提取物对S.caricae的抑制率>90%,苦参、虎杖提取物的抑制率>80%;蛇床子和苦参提取物对该病菌的EC_(50)值分别为0.1648~0.5289和0.7347~0.8332 mg·mL^(-1),抑菌活性最为明显。该研究为栝楼蔓枯病的绿色防控提供了理论依据。

甜瓜抗蔓枯病种质资源的筛选及RAPD分析

采用甜瓜蔓枯病病菌孢子悬浮液对208份甜瓜种质资源进行苗期人工接种鉴定,发现86份材料表现抗病,122份材料表现感病。用RAPD标记对抗性表现最优的29份材料进行分析,14个引物共扩增出116条多态性条带,平均每个引物为8.29条。Shannon多样性指数和Nei's基因多样性指数分别为0.4331和0.2855,表明这些抗源材料遗传差异较大。UPGMA聚类分析将这29份抗性种质明显划为普通型和野生型两大类,种质问还表现出一定的地域特性。

甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-3的ISSR分子标记

以甜瓜抗病资源PI511890和感病自交系‘白皮脆’及其F1、BC1P1、BC1P2、F2群体为材料,苗期接种蔓枯病菌(Didymella bryoniae)进行遗传分析。结果表明:(1)对甜瓜苗期蔓枯病菌接种鉴定结果显示,抗源PI511890的抗病基因Gsb-3由显性单基因控制。(2)利用集团分离分析及ISSR分析技术,引物ISSR-100扩增出的多态性条带与Gsb-3表现连锁关系,该多态性片段大小为900bp。(3)统计ISSR-100在182个F2单株上的多态性,并用Join-Map 4.0软件分析结果显示,ISSR-100与Gsb-3遗传连锁距离为8.3cM,定名为ISSR-100900。研究认为,ISSR-100900可作为甜瓜抗蔓枯病分子育种的备选分子标记。

甜瓜蔓枯病离体接种方法初步研究

以感病品系"白皮脆"和抗源"PI 140471"的离体叶片为试验材料,初步研究甜瓜蔓枯病离体接种方法。离体接种后将叶片置于26±1℃、16 h光照/8 h黑暗及90%的相对湿度条件下培养,2 d后感病品系的离体叶片出现褐化病斑,发病率达60%左右,4 d后病斑开始扩大,离体叶片发病率为100%;抗病材料和对照则没有被浸染,未出现病斑。采用离体叶片和苗期活体两种接种方法,对10个厚皮甜瓜新品种进行蔓枯病抗性鉴定筛选,结果表明两种方法接种后的发病率和病情指数均呈正相关,病情指数的相关系数达0.44,两种方法的鉴定结果基本一致。因此,离体叶片接种方法可用于快速鉴定甜瓜蔓枯病抗病性。

甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-2的ISSR分子标记

甜瓜蔓枯病(Didymella bryoniae)是危害我国甜瓜的一种主要病害。以抗蔓枯病种质资源PI 157082与感病的甜瓜自交系白皮脆为亲本,建立了抗感F2代群体,对亲本、F1及134个F2代群体进行了苗期抗蔓枯病接种鉴定。利用集团分离分析法(bulked segregant analysis,BSA)在F2代建立抗感基因池,以抗感基因池为模板,对72条ISSR引物进行PCR扩增筛选。共有3条引物在F2代抗感基因池之间扩增出多态性片段,用双亲、F1和F2代抗感单株对这3条引物进一步验证,其中引物ISSR-57扩增出的多态性条带与抗性基因Gsb-2表现连锁关系,该多态性片段大小为560 bp,与Gsb-2的遗传连锁距离为11.3 cM,定名为ISSR-57560。ISSR-PCR扩增体系稳定、重复性好,ISSR-57560可以作为甜瓜抗蔓枯病辅助选择的备选分子标记。

不同抗性甜瓜接种蔓枯病菌后内源激素含量变化及其相关基因的表达分析

[目的]本文旨在研究甜瓜抗感材料中内源激素含量及其相关基因表达量的分析,了解甜瓜抗蔓枯病的抗性机制。[方法]以抗蔓枯病甜瓜抗源PI420145和感蔓枯病甜瓜‘白皮脆’(对照)为材料,在接种蔓枯病菌后的不同时间(0、1、2、3、5、7 d)进行取样,测定内源激素乙烯、茉莉酸及水杨酸的含量,并利用荧光定量PCR技术分析叶片中乙烯、茉莉酸、水杨酸等防御信号途径中相关基因的表达特征。[结果]抗蔓枯病甜瓜材料PI420145叶片中的乙烯含量整体低于感蔓枯病材料‘白皮脆’,但在接种0和7 d时茉莉酸含量均高于‘白皮脆’,并且水杨酸含量也基本高于‘白皮脆’。在接种前期(0~3 d),PI420145叶片中乙烯途径相关基因ACS、EIN2的表达量显著高于‘白皮脆’,接种后期(5~7 d)ACS在PI420145中下调表达并且表达量显著低于‘白皮脆’。PI420145叶片中茉莉酸途径相关基因COI1、PDF1.2的表达量分别在接种后期和接种前期基本显著高于‘白皮脆’,而AOS表达量在接种后期则极显著低于‘白皮脆’。在PI420145叶片中除接种后1 d外,水杨酸途径相关基因EDS5的表达量均显著高于‘白皮脆’,而ICS、NPR1的表达量分别在接种后期和接种前期基本显著高于‘白皮脆’。[结论]PI420145叶片中低浓度的乙烯以及高浓度的茉莉酸和水杨酸提高了其对蔓枯病的抗病能力,PI420145叶片中EIN2、PDF1.2、EDS5和NPR1在接种早期的高表达促使其比‘白皮脆’更早一步对蔓枯病菌的侵染作出反应。

抗蔓枯病甜瓜突变体edr2抗病现象的初步研究

【目的】蔓枯病常引起甜瓜毁灭性的损失,研究甜瓜与蔓枯病菌互作的功能基因对选育抗蔓枯病的甜瓜品种是非常重要的。【方法】采用农杆菌侵染子叶外植体的方法产生T-DNA插入的甜瓜突变体,人工气候箱内离体和大棚内幼苗接种蔓枯病菌,筛选蔓枯病抗性增强的突变体株系,并且初步研究该突变体的抗病机制。【结果】一个蔓枯病抗性明显增强的突变体,命名为edr2,该突变体是T-DNA单拷贝插入甜瓜染色体引起的,edr2的蔓枯病抗性和标记基因卡那霉素抗性基因共分离。蔓枯病菌在突变体甜瓜edr2上的侵染过程与在野生型甜瓜上相比,分生孢子萌发率降低、芽管的伸长和菌丝的生长较迟缓。蔓枯病菌的侵染能引起edr2突变体发生细胞程序性死亡,但是不引起野生型甜瓜的细胞发生程序性死亡。【结论】edr2突变体抗性增强,不但抑制病菌在植株体内的生长,并且诱导自身的抗性。本研究为选育抗蔓枯病的甜瓜品种提供了新的思路,为挖掘甜瓜-蔓枯病菌互作的基因提供支持。

甜瓜蔓枯病病原鉴定及其生物学特性

从江苏省部分地区感染蔓枯病的甜瓜茎上分离病原菌,并对其形态学、生物学特性及致病力进行了研究。结果表明,共分离得到4株甜瓜蔓枯病菌株,这4株病菌的最适生长温度为25℃,培养基pH值对病菌生长的影响不大。另外,对这4个菌株的核糖体RNA基因内转录间隔区(rDNA-ITS)进行了PCR扩增和序列测定,并在GenBank中进行了Blast搜索和比对分析,根据rDNA-ITS序列分析结果结合甜瓜病株症状和病菌的形态学特征,初步认为江苏省甜瓜蔓枯病的病原菌为Didymella bryoniae(Auersw.)Rehm.,其无性型为西瓜壳二孢Ascochyta citrullinaSmith.

西瓜种质资源的抗蔓枯病性鉴定及其利用

对引进及系统选育的部分西瓜种质资源及其新组合进行了室内苗期及大田成株期的抗蔓枯病性的人工接种鉴定。根据各鉴定材料的苗期和成株期的病情指数进行方差分析 ,结果表明 :以美国引进提纯的All goldenproducer、All sweetscarlet和自育的新品系A5 6、H2 5等四个种质材料的抗蔓枯病性最强。而以抗病种质为亲本所配制的各新组合的苗期和成株期病情指数方差分析结果表明 ,以高抗种质为亲本所配制的两个新组合 2 0 39和 2 0 5 8的抗蔓枯病性最强 ,表明西瓜的抗蔓枯病性状属于显性遗传 ,其中 2 0 5 8不仅综合抗病性强 ,且品质优良 ,丰产潜力大 ,具有示范推广市场前景。

新疆甜瓜地方品种资源蔓枯病抗性鉴定

【目的】蔓枯病是危害甜瓜的一种重要病害,鉴定抗病种质资源并选育抗病品种,为防治蔓枯病提供有效措施。【方法】利用苗期人工接种方法,对140份新疆甜瓜地方品种资源进行蔓枯病抗病性筛选鉴定。【结果】第一次调查病害时,黄旦子等53个地方品种在叶部症状表现抗病,除红肉阿克拉瓦提外所有地方品种在茎部症状表现高抗;第二次调查结果显示,所有地方品种在叶部症状表现感病,但秋黄皮白肉可口奇等5个地方品种在叶部症状较轻,秋黄皮白肉可口奇等6个地方品种在茎部症状表现抗病;蔓枯病在甜瓜植株的叶部症状和茎部症状呈正相关,发病后期相关指数达0.88。【结论】甜瓜蔓枯病在叶部的症状出现较早,病害程度较严重,但叶部和茎部症状相关性显著。地方品种秋黄皮白肉可口奇高抗蔓枯病,卡拉克赛、炮台红、哈密加格达、塔城冬甜瓜和白兰瓜5个地方品种对蔓枯病具有一定的抗病性。

瓜类蔬菜蔓枯病研究概况

蔓枯病(gummy stem blight)是近几年在瓜类蔬菜上发生和蔓延较快的一种病害,对生产造成的损失日益严重。本文对瓜类蔓枯病的病原菌、发病规律及为害症状、抗病性鉴定技术、抗病资源、抗性遗传规律、抗病基因分子生物学研究及防治方法等方面进行了系统的综述。针对目前研究中存在的问题,提出了今后的研究方向和重点。

西瓜品种资源对枯萎病和蔓枯病的抗性鉴定

采用室内苗期人工接种鉴定方法,对国内外引进和育成的78份西瓜品种资源进行了枯萎病和蔓枯病的人工接种双重抗性鉴定,筛选出Smokylee、Summit、Sugarlee、Calhoun Gray、Dixielee、Texa W5、Conqueror等9份高抗枯萎病的单抗种质,及AU-Sweet Scarlet、AU-Jubilant、AU-Producer、W6-9、W23-18和W23-47为中抗蔓枯病兼抗枯萎病的双抗种质,并对双抗种质材料的主要农艺性状进行了考察。

西瓜蔓枯病分子诊断技术研究

本文测定西瓜上的西瓜蔓枯病菌(D idym ella bryoniae)、西瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)及西瓜枯萎病菌(Fu-sarium oxysporumf.sp.niveum)的rDNA的ITS序列,比对近缘种及西瓜上不同病菌的ITS序列同源性,设计出特异性上游引物XM-2和下游引物XM-R2。经过对XM-2/XM-R2引物的PCR扩增条件的优化,可以扩增出一条344bp的西瓜蔓枯病菌特异性DNA条带。上述方法可以检测到pg以上的蔓枯病菌基因组DNA,并且可以准确扩增出西瓜蔓枯病自然病样中特异性的DNA片段。本文建立了一项西瓜蔓枯病分子检测技术,该方法准确、快速、可靠,可用于西瓜蔓枯病田间的快速诊断。

西瓜品种资源的蔓枯病抗性鉴定与评价

对收集引进的42份西瓜品种资源进行了大田成株期及室内苗期蔓枯病抗性的人工接种鉴定。各品种苗期和成株期抗病性的鉴定结果表明,这些品种中没有免疫和高抗的品种,苗期和成株期抗病性表现一致,较好的品种有5个,其中中抗的品种有3个,分别是从美国引进的Au-producer、All-sweet scarlet和Au-Jubilant;耐病品种2个,分别是Sugarlee和SSDL。其中,有8个品种表现较强的综合抗病性,兼具优质、高糖、高产、耐贮及早熟等优良农艺性状,可以作为抗病、优质、早熟西瓜新品种选育的亲本材料。

广谱拮抗放线菌C28的鉴定及其对甜瓜蔓枯病的防治效果

【目的】研究放线菌C28对12种植物病原真菌的抑菌作用及对盆栽甜瓜蔓枯病的防治效果,并对该放线菌进行分类鉴定。【方法】采用琼脂块法、生长速率法研究放线菌C28对靶标病原真菌的抑菌作用;通过盆栽试验研究C28对甜瓜蔓枯病的防治效果;根据形态特征、生理生化特性及16SrDNA序列分析确定C28的分类地位。【结果】①放线菌C28对供试病原真菌具有一定的广谱拮抗性,拮抗圈直径为10.0～22.5mm;其无菌发酵滤液对病原真菌菌丝生长具有明显的抑制作用,无菌发酵滤液原液对木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)、层出镰刀菌(F.proliferatum)及葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)的抑菌率分别高达95.0%,90.0%及93.1%。②用放线菌C28无菌发酵滤液稀释104倍处理甜瓜种子后,甜瓜胚轴、胚根长度较对照(无菌水处理)增加37.1%和12.5%;种子简明活力指数高达141.7,与对照差异显著(P<0.05)。③用C28无菌发酵滤液原液喷施处理后,甜瓜蔓枯病病情指数较对照显著下降(P<0.05),预防和治疗效果分别为42.4%和40.0%。④根据形态特征、生理生化特性及16SrDNA序列分析,将放线菌C28鉴定为球孢链霉菌球孢亚种(Streptomyces globisporus subsp.globisporus)。【结论】球孢链霉菌球孢亚种C28对多种病原真菌具有广谱拮抗性,对甜瓜蔓枯病具有良好的抑菌和生防效果,对瓜类种子萌发和生长具有一定的促进作用。

菜瓜蔓枯病苗期抗性鉴定方法比较

以不同菜瓜为试验材料,采用室内苗期活体接种和离体叶片接种2种方法,研究42份菜瓜材料对蔓枯病的抗性,分析离体叶片菌丝块接种的菌丝侵染扩展半径(lesion radius)与苗期活体接种发病情况相关性,比较不同菜瓜对蔓枯病抗性的差异,筛选优质的抗蔓枯病菜瓜资源。结果表明,离体叶片菌丝块接种的菌丝侵染扩展半径与苗期活体接种平均病情级别数的相关性达到0.906(P≤0.05),同时筛选出10份对蔓枯病具有中等抗性的菜瓜材料。

甜瓜蔓枯病抗性QTL定位的研究

【目的】探讨甜瓜（Cucumis melo L.）蔓枯病抗性遗传规律并筛选出抗性连锁分子标记位点。【方法】高抗蔓枯病品系JGD-3做母本，感蔓枯病品系S717做父本，杂交构建包含122个单株的R代群体，各单株分别自交得到相应的F，代家系；分别于2010年秋季和2011年春季叶片人工喷雾苗期接菌，完成蔓枯病抗性遗传规律鉴定；基于已构建对应分子标记连锁图谱，联合复合区间定位蔓枯病抗性数量基因位点（QTL）。【结果】两种环境下共检测到甜瓜蔓枯病抗性5个QTL（gsb1．1，gsb2．1，gsb3．1，gsb5．1和gsb6．1）作用位点，位于连锁群1，2，3，5和6上，单个QTL解释贡献率于2．5％。23．0％之间。两种环境中稳定重复检测的QTL是gsb1.1和gsb6．1；gsb2．1在2010年秋季被检测出．gsb3．1和gsb5．1在2011年春季检测到。两种环境下检测的QTL解释表型变异总和是42．0％（2010年秋季）和49．0％（2011年春季）。【结论】以甜瓜JGD-3为抗源鉴定蔓枯病抗性为数量遗传性状由多基因共同控制，有2个QTL位点在两种环境中被重复检测；与QTLs紧密连锁的标记（〈5cM）为分子标记辅助选择（MAS）甜瓜抗蔓枯病品系和蔓枯病抗性基因分离、克隆提供了技术支撑。

黄瓜-酸黄瓜渐渗系的验证及其抗蔓枯病筛选

[目的]验证黄瓜-酸黄瓜渐渗系群体真实性,获得渐渗系中抗蔓枯病株系。[方法]通过观察统计渐渗系群体的重要农艺性状,利用酸黄瓜特异的SSR标记检测渐渗系材料的真实性,并采用温室苗期人工接种鉴定的方法,对黄瓜-酸黄瓜种间杂交后代(86份渐渗系)群体进行苗期接种鉴定,筛选抗蔓枯病材料。[结果]这些渐渗系在植物学性状上介于两亲本之间,具有部分野生种特有性状,如黑刺、节间短、多分枝等;SSR分子标记能在渐渗系中扩增出野生酸黄瓜的特异DNA片段,从分子水平上证实其为野生酸黄瓜与栽培黄瓜种间杂交后代;从黄瓜-酸黄瓜渐渗系群体中筛选出8份抗性材料,分别为CSIL2、CSIL41、CSIL49、CSIL52、CSIL57、CSIL58、CSIL59、CSIL72,占供试材料的9%。[结论]通过远缘杂交培育渐渗系是拓宽作物遗传的基础,从渐渗系中筛选的8份抗性材料为开展黄瓜抗蔓枯病育种研究提供了抗源材料,同时也为黄瓜抗蔓枯病育种实践奠定了基础。

芽孢杆菌B96-II对芦笋茎枯病的防治及机制研究

试验表明,芽孢杆菌B96-II对芦笋茎枯病菌(Phomopsis asparagiSacc)菌丝生长的抑制率为89.62%,对孢子产生的抑制率为99.65%;对芦笋茎枯菌的田间防治效果为93.10%。研究表明,B96-II的拮抗蛋白对芦笋茎枯菌有明显的抑制活性;对芦笋的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)均有激活和诱导作用。B96-II处理后30 d,芦笋组织的SOD活力较对照提高254.98%,CAT活力提高81.84%,POD活性提高22.13%,PPO活力提高146.67%,PAL活力提高171.60%。