点突变Pro229Ser和Glu243Gly对耐热邻苯二酚2,3-双加氧酶性质的影响

采用ＰＣＲ随机诱变方法，研究氨基酸置换对耐热邻苯二酚２，３－双加氧酶性质的影响。 比较分析了突变体Ｐｒｏ２２９Ｓｅｒ和Ｇｌｕ２４３Ｇｌｙ与野生型酶的酶学性质。结果显示点突变 Ｐｒｏ２２９→Ｓｅｒ或Ｇｌｕ２４３→Ｇｌｙ并未改变酶的最适反应温度（均为６０℃）；突变体Ｐｒｏ２２９Ｓｅｒ （Ｋｃａｔ／Ｋｍ＝ ４．８９ ± ０．０１ × １０６ｍｏｌ－１ｓ－１）以及突变体 Ｇｌｕ２４３Ｇｌｙ（Ｋｃａｔ／Ｋｍ＝ ５． ８８±０． ０１× １０６ｍｏｌ－１ｓ－１）的催化能力与野生型酶（Ｋｃａｔ／Ｋｍ＝６．９７±０．０１× １０６ｍｏｌ－１ｓ－１）相比有所下 降；点突变Ｐｒｏ２２９→Ｓｅｒ大幅度降低了酶的热稳定性（△Ｔｍ≈ １０．２℃），而点突变Ｇｌｕ２４３－Ｇｌｙ 对酶的热稳定性影响较小（△Ｔｍ≈１．５℃）。推测Ｐｒｏ２２９对耐热邻苯二酚２，３－双加氧酶的热稳 定性有重要贡献。