大豆巯基肽的共价色谱法制备及其MALDI-TOF-MS分析

建立了一种从复杂的大豆球蛋白酶解物中提取巯基肽的高选择性方法。首先,对大豆球蛋白酶解物中的二硫键用1,4-二硫苏糖醇进行还原,对还原剂的用量进行了考察和优化,提高了酶解物中的巯基肽含量。然后用Thiopropyl-Sephrose 6B共价色谱制备还原酶解物中的巯基肽,对共价色谱的吸附、解吸条件进行了考察和优化。研究表明:二硫键还原最佳1,4-二硫苏糖醇用量为20 mmol/L,还原之后酶解物中的巯基含量从1.8μmol/g提高到了113.8μmol/g。共价色谱的最佳条件为还原酶解物的上样量为酶解物中巯基含量占凝胶活性位点的80%,键合时间30 min;解吸时1,4-二硫苏糖醇浓度20 mmol/L,解吸时间20 min。此外,C18柱可以有效地将巯基肽中的1,4-二硫苏糖醇和2-巯基吡啶去除。MALDI-TOF-MS分析表明制备的巯基肽中可检测到45个肽段,其中36个肽段含有巯基,表明Thiolpropyl-Sepharose 6B共价色谱对巯基肽有很高的选择性。

核壳型Fe3O4@PDA@Au纳米材料对水牛角含巯基肽类成分的富集研究

目的通过制备核壳型Fe3O4@PDA@Au纳米材料对水牛角中含巯基(-SH)肽类成分进行富集、鉴定与表征。方法采用种子生长法制备核壳型Fe3O4@PDA@Au磁性纳米材料,将材料应用于水牛角提取液含-SH肽类成分的富集;分别采用Ellman法和多肽试剂盒测定富集前后溶液中-SH及多肽的含量;采用nano LC-MS/MS系统分析鉴定水牛角提取液肽类组成。结果Fe3O4@PDA@Au纳米材料对水牛角含-SH肽类成分的富集因子为23.41,水牛角提取液中共鉴定了4114个肽段,其中含有半胱氨酸(Cys)的肽段共11个;富集液中共鉴定了2254个肽段,其中含有Cys的肽段共709个,富集后的含Cys的肽段与总肽段的比值从0.003增加到0.314,表明材料对水牛角提取物中含-SH肽段完成了较好的富集。结论Fe3O4@PDA@Au纳米材料对水牛角中含巯基肽类成分具有良好的富集效果,对水牛角功效物质基础研究具有重要意义。

蒜素与大豆蛋白源巯基肽的二硫键结合物的制备及其表征

蒜素与谷胱甘肽等多肽中的半胱氨酸残基以二硫键形式结合被认为是葱属植物发挥其体内生理活性的第一步。蒜素和巯基肽体外均不稳定,制备蒜素与巯基的结合物有利于稳定发挥二者的生理活性。在制备还原或未还原大豆球蛋白、酶解物及其富集的巯基肽基础上,研究了蒜素与大豆蛋白源巯基肽的二硫键结合物的制备条件。结果表明:反应温度在24℃,反应p H 7.0,蒜素∶巯基摩尔浓度比=5∶4,反应时间1h条件下最佳,巯基反应完成度均达到95%以上。相同条件,还原后的蛋白比未还原的蛋白反应完成度更大。在最佳条件下,制得相应的产物,并对反应前后结合HPLC、MS-MS进行了一定表征,证明了结合物的结构。

蜈蚣毒素多肽RhTx的高效化学合成及复性折叠研究

二硫键的氧化折叠是合成二硫键构象锁定多肽的关键步骤.前人发展的二硫键氧化折叠策略主要有一次氧化折叠、多次氧化折叠和一锅法氧化折叠.目前对三种策略复性效率和收率等的比较性研究较少.分别采用三种氧化折叠策略制备目标蜈蚣毒素多肽RhTx.结果表明,两次氧化折叠策略的分离收率高于一次和一锅法氧化折叠策略,一锅法氧化折叠策略可能会导致较大比例的错误折叠.探索了数十毫克量级RhTx的高效制备方法,为进一步探索RhTx靶向TRPV1的结构机制等研究提供了工具分子.此外,对三种氧化折叠策略进行了系统比较,为二硫键构象锁定多肽的合成提供了参考.