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Artesunate Effect on Schistosome Thioredoxin Glutathione Reductase and Cytochrome c Peroxidase as New Molecular Targets in Schistosoma mansoni-infected Mice 被引量:2
1
作者 Amany A.Abdin Dalia S.Ashour Zeinab S.Shoheib 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2013年第12期953-961,共9页
Objective To investigate the possible effect of artesunate (ART) on schistosome thioredoxin glutathione reductase (TGR) and cytochrome c peroxidase (CcP) in Schistosoma mansoni-infected mice. Methods A total of ... Objective To investigate the possible effect of artesunate (ART) on schistosome thioredoxin glutathione reductase (TGR) and cytochrome c peroxidase (CcP) in Schistosoma mansoni-infected mice. Methods A total of 200 laboratory bred male Swiss albino mice were divided into 4 groups (50 mice in each group). Group I: infected untreated group (Control group) received a vehicle of 1% sodium carbonyl methylcellulose (CMC-Na); Group II: infected then treated with artesunate; Group III infected then treated with praziquantel, and group IV: infected then treated with artesunate then praziquantel. Adult S. mansoni worms were collected by Animal Perfusion Method, tissue egg counted, TGR, and CcP mRNA Expression were estimated of in $. mansoni adult worms by semi-quantitative rt-PCR. Results Semi-quantitative rt-PCR values revealed that treatment with artesunate caused significant decrease in expression of schistosome TGR and CcP in comparison to the untreated group. In contrast, the treatment with praziquantel did not cause significant change in expression of these genes. The results showed more reduction in total worm and female worm count in combined ART-PZQ treated group than in monotherapy treated groups by either ART or PZO, Moreover, complete disappearance (100%) of tissue eggs was recorded in ART-PZQ treated group with a respective reduction rate of 95.9% and 68.4% in ART- and PZQ-treated groups. Conclusion The current study elucidated for the first time that anti-schistosomal mechanisms of artesunate is mediated via reduction in expression of schistosome TGR and CcP. Linking these findings, addition of artesunate to praziquantel could achieve complete cure outcome in treatment of schistosomiasis. 展开更多
关键词 SCHISTOSOMIASIS ARTESUNATE PRAZIQUANTEL thioredoxin glutathione reductase Cytochrome c peroxidase
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细粒棘球绦虫TPx基因的克隆及序列分析 被引量:7
2
作者 李航 李文卉 +6 位作者 苟惠天 李永光 王艳华 张德林 贾万忠 史大中 付宝权 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期191-195,共5页
从自然感染病羊肝内收集细粒棘球绦虫(Eg)原头蚴,分别提取总RNA和基因组DNA。根据GenBank数据库中的细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因序列设计1对引物,以总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出EgTPx基因片段,同时以基因组DNA为... 从自然感染病羊肝内收集细粒棘球绦虫(Eg)原头蚴,分别提取总RNA和基因组DNA。根据GenBank数据库中的细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因序列设计1对引物,以总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出EgTPx基因片段,同时以基因组DNA为模板扩增出对应的基因组序列。PCR产物经纯化后连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后,进行序列测定和生物信息学分析。结果表明,成功扩增到中国青海株细粒棘球绦虫EgTPx基因片段,其开放阅读框为582 bp,编码193个氨基酸,与已知的EgTPx基因核苷酸序列及其编码蛋白氨基酸序列的同源性均为99%,有3个碱基发生变异,分别在245,306,318位由C变为T;引起1个氨基酸变异,由Ala82变为Val82。EgTPx具有典型的2-Cys型过氧化物氧还蛋白催化性位点Cys48和Cys169,以及周围保守的FVCP和VCPA序列。EgTPx基因的开放阅读框对应的基因组序列包含2个外显子和1个69 bp的内含子。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶 基因克隆 序列分析
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蛋白质组学方法研究TPx在肝风内动证中的表达及关系 被引量:8
3
作者 曾年菊 梁清华 +6 位作者 陈疆 区健刚 萧梅芳 张雨星 梁相辉 鄢东红 关勇军 《中华中医药学刊》 CAS 2008年第4期750-752,共3页
目的:从蛋白质组学角度研究中医肝风内动证的可能的标志性蛋白———硫氧环蛋白过氧化物酶(Peroxiredoxin/Thioredoxin peroxidase,TPx)在中医肝风内动三亚型中的表达,探讨其与中医肝风内动证的关系。方法:设肝阳化风证、血虚生风证、... 目的:从蛋白质组学角度研究中医肝风内动证的可能的标志性蛋白———硫氧环蛋白过氧化物酶(Peroxiredoxin/Thioredoxin peroxidase,TPx)在中医肝风内动三亚型中的表达,探讨其与中医肝风内动证的关系。方法:设肝阳化风证、血虚生风证、阴虚生风证、健康人组4组,抽取外周静脉血淋巴细胞并提取总蛋白行二维凝胶电泳,PDquestV7.3.1软件分析,质谱分析鉴定,找出各组共有的差异蛋白。结果:鉴定硫氧环蛋白过氧化物酶(Peroxiredoxin/Thioredoxin peroxidase,TPx)为中医肝风内动证与健康人组比较共同的差异蛋白。结论:硫氧环蛋白过氧化物酶(TPx)可能是中医肝风内动证的特异的标志蛋白。 展开更多
关键词 硫氧环蛋白过氧化物酶(tpx) 肝风内动证 蛋白质组学
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多头带绦虫TPx基因片段的克隆及原核表达 被引量:4
4
作者 李永光 李文卉 +8 位作者 李航 盖文燕 王鸿盛 姚菊霞 王艳华 张德林 贾万忠 Radu Blaga 付宝权 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期251-256,共6页
从自然感染的病羊脑内采集多头蚴原头节,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因片段,PCR产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后测序,发现克隆到的TmTPx基因片段开放阅读框为453 bp,编码150个... 从自然感染的病羊脑内采集多头蚴原头节,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因片段,PCR产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后测序,发现克隆到的TmTPx基因片段开放阅读框为453 bp,编码150个氨基酸。对TmTPx基因片段进行限制性酶切后连接到表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-TmTPx,转化大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21,以IPTG进行诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物。结果显示,成功表达了大小约为43 ku的融合蛋白。对表达产物纯化后免疫家兔,采集血清用ELISA测定抗体效价,发现兔抗TmTPx重组蛋白的抗体能够与多头蚴原头节抗原发生特异性反应,说明该重组蛋白具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 多头带绦虫 多头蚴 硫氧还蛋白过氧化物酶 重组蛋白 免疫原性
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外阴硬化性苔藓病变中的抗氧化酶变化
5
作者 徐倩倩 王威 +1 位作者 石洪爽 武昕 《临床与病理杂志》 CAS 2024年第1期1-7,共7页
目的:外阴硬化性苔藓(vulvar lichen sclerosus,VLS)是一种外阴皮肤瘙痒、变白的自身免疫性慢性炎症性疾病。目前VLS的发病机制尚不清楚,有研究表明其可能与氧化应激有关。本研究旨在通过探讨锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,... 目的:外阴硬化性苔藓(vulvar lichen sclerosus,VLS)是一种外阴皮肤瘙痒、变白的自身免疫性慢性炎症性疾病。目前VLS的发病机制尚不清楚,有研究表明其可能与氧化应激有关。本研究旨在通过探讨锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,MnSOD)、细胞质内过氧化物酶2(peroxidase 2,PRDX2)、硫氧还蛋白1(thioredoxin 1,TRX1)3种抗氧化酶在VLS中的表达情况及其与VLS发生和发展的关系。方法:选取中国医科大学附属第一医院妇科门诊手术切除的VLS组织标本40例(其中早期20例,进展期20例),外阴整形术切除的正常外阴皮肤组织标本20例。采用免疫组织化学SP方法检测MnSOD、PRDX2和TRX1蛋白在外阴皮肤组织中的表达情况,并在高倍显微镜下测定平均光密度值。采用Pearson相关分析计算VLS组织中MnSOD、PRDX2、TRX1三者之间的相关性。结果:VLS组织中MnSOD的平均光密度值低于正常外阴皮肤组织(P<0.05),早期VLS组织中MnSOD平均光密度值高于进展期VLS组织(P<0.05);VLS组织中PRDX2的平均光密度值高于正常外阴皮肤组织(P<0.05),早期VLS组织中PRDX2的平均光密度值低于进展期VLS组织(P<0.05);VLS组织中TRX1的平均光密度值高于正常外阴皮肤组织(P<0.05),早期VLS组织中TRX1平均光密度值低于进展期VLS组织(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示:MnSOD和PRDX2(r=-0.615)、MnSOD和TRX1(r=-0.881)的表达均呈负相关(均P<0.05);PRDX2和TRX1表达呈正相关(r=0.670,P<0.05)。结论:在VLS病变进展中,抗氧化酶MnSOD表达减少,PRDX2和TRX1表达增加。 展开更多
关键词 外阴硬化性苔藓 超氧化物歧化酶 过氧化物酶2 硫氧还蛋白1
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二色补血草硫氧还蛋白过氧化物酶基因LbTPx的克隆及其表达 被引量:2
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作者 刁桂萍 杨传平 王玉成 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期85-87,115,共4页
从二色补血草(Limonium bicolor)cDNA文库中分离出一个新的硫氧还蛋白过氧化物酶基因(LbTPx)全长cDNA序列。基因全长1 016 bp,其中:5’非翻译区146 bp,3’非翻译区69 bp,开放读码框(ORF)801 bp,共编码266个氨基酸;编码蛋白的分子质量为4... 从二色补血草(Limonium bicolor)cDNA文库中分离出一个新的硫氧还蛋白过氧化物酶基因(LbTPx)全长cDNA序列。基因全长1 016 bp,其中:5’非翻译区146 bp,3’非翻译区69 bp,开放读码框(ORF)801 bp,共编码266个氨基酸;编码蛋白的分子质量为47.99×10-24kg,理论等电点为(pI)8.83。利用荧光定量PCR方法研究了二色补血草LbTPx基因在NaCl、ABA、CuSO4、ZnCl2和CdCl2胁迫下不同时间的表达模式。结果表明:NaCl和CuSO4处理均能诱导LbTPx基因在二色补血草根和叶中的表达;ABA、ZnCl2和CdCl2处理则只能诱导LbTPx基因在二色补血草叶中的表达,而抑制其在二色补血草根中的表达。 展开更多
关键词 二色补血草 硫氧还蛋白过氧化物酶 实时定量PCR
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皱纹盘鲍HdhTPX2基因在毕赤酵母中的表达及抗氧化活性研究 被引量:1
7
作者 乔琨 方春华 +7 位作者 陈贝 彭会 潘南 蔡水淋 许旻 陈丽娇 郝华 刘智禹 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期463-469,共7页
为研究皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX2)蛋白的抗氧化活性,将HdhTPX2基因克隆至pPIC9K载体,通过电击转化至毕赤酵母GS115菌株中,获得重组表达质粒pPIC9K-HdhTPX2,经甲醇诱导及亲和层析纯化得到重组HdhTPX... 为研究皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX2)蛋白的抗氧化活性,将HdhTPX2基因克隆至pPIC9K载体,通过电击转化至毕赤酵母GS115菌株中,获得重组表达质粒pPIC9K-HdhTPX2,经甲醇诱导及亲和层析纯化得到重组HdhTPX2蛋白,并进行质谱鉴定及体外抗氧化功能检测。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-HdhTPX2,经表达条件的优化,在pH为7的培养基中用0.5%甲醇诱导表达72 h,分泌表达上清液中得到相对分子质量约为25 000的稳定表达产物,纯化后的蛋白经质谱鉴定为目的蛋白;体外活性测定发现,该蛋白清除羟自由基(·OH)能力强于维生素C,并对H2O2引起的细胞损伤具有一定的保护作用。研究表明,皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化物酶HdhTPX2在毕赤酵母表达系统中得到高效表达,重组表达产物具有抗氧化活性功能。 展开更多
关键词 皱纹盘鲍 硫氧还蛋白过氧化物酶 毕赤酵母 抗氧化
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甜菜M14品系硫氧还蛋白过氧化物酶(BvM14-Tpx)基因在原核及真核细胞中的抗氧化及抗盐能力分析 被引量:3
8
作者 赵晨曦 南景东 +3 位作者 马春泉 于冰 陈思学 李海英 《黑龙江大学工程学报》 2015年第3期62-67,83,共7页
甜菜M14品系是在栽培甜菜染色体基础上附加了野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系,具有抗逆、无融合生殖等优异特性。在前期工作中,通过RACE技术获得了甜菜M14品系硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase,Tpx)编码基因BvM14-Tpx... 甜菜M14品系是在栽培甜菜染色体基础上附加了野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系,具有抗逆、无融合生殖等优异特性。在前期工作中,通过RACE技术获得了甜菜M14品系硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase,Tpx)编码基因BvM14-Tpx的cDNA全长,此基因参与各种过氧化物的清除反应从而提高植物的抗逆性。构建了BvM14-Tpx基因的大肠杆菌表达体系,对转BvM14-Tpx基因的大肠杆菌BL21(DE3)菌体在H2O2胁迫下的生长曲线进行了测定,结果显示转基因菌株比对照菌株提前1h进入生长期,说明BvM14-Tpx基因能够缓解H2O2对大肠杆菌生长的抑制;同时构建了BvM14-Tpx基因的酿酒酵母表达体系,对H2O2及NaCl胁迫下的转基因酿酒酵母的研究表明,转基因酵母的生长好于对照,说明BvM14-Tpx基因可以提高转基因酵母的抗氧化及耐盐能力。 展开更多
关键词 甜菜M14品系 硫氧还蛋白过氧化物酶 大肠杆菌 酿酒酵母
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甜菜M14品系BvM14-Tpx基因克隆及原核表达体系下应答氧化胁迫功能的初步研究 被引量:2
9
作者 张庭跃 赵晨曦 +1 位作者 陈思学 李洪丽 《中国农学通报》 2020年第32期30-38,共9页
为了研究甜菜M14品系BvM14-Tpx基因的抗氧化功能,本试验以带有野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系M14品系为试验材料,利用RACE技术获得甜菜M14品系硫氧还蛋白过氧化物酶基因(BvM14-Tpx) cDNA全长,对其进行生物信息学分析,利用Real-tim... 为了研究甜菜M14品系BvM14-Tpx基因的抗氧化功能,本试验以带有野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系M14品系为试验材料,利用RACE技术获得甜菜M14品系硫氧还蛋白过氧化物酶基因(BvM14-Tpx) cDNA全长,对其进行生物信息学分析,利用Real-time PCR和半定量RT-PCR技术对该基因进行组织特异性表达分析,在原核表达体系下进行BvM14-Tpx基因应答氧化胁迫研究。生物信息学分析结果表明,BvM14-Tpx基因cDNA全长为1044 bp,包含最大的ORF为489 bp,编码162个氨基酸;含有过氧化物酶Ⅱ(PrxⅡ)型的保守结构域;BvM14-Tpx蛋白与豌豆(Pisum sativum L.)和苜蓿(Medicago truncatula L.)中Tpx蛋白的亲缘性较高。组织特异性表达分析结果表明,BvM14-Tpx基因在甜菜M14品系各组织表达量从高到低的顺序是根、茎、叶、花。通过原核表达体系下BvM14-Tpx基因应答氧化胁迫的研究,表明BvM14-Tpx基因能够提高大肠杆菌对于环境中氧化胁迫的适应能力,减轻H2O2对细菌生长的抑制。本研究对挖掘甜菜M14品系优质基因,提高甜菜对于非生物胁迫的抗性以及开展甜菜遗传改良工作具有重要意义。 展开更多
关键词 甜菜M14品系 硫氧还蛋白过氧化物酶基因 生物信息学 原核表达 氧化胁迫
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黄野螟硫氧还蛋白过氧化物酶Tpx基因的鉴定及表达分析 被引量:4
10
作者 程杰 吕子豪 林同 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期56-63,共8页
为阐明硫氧还蛋白过氧化物酶Tpx基因的表达模式并研究温度胁迫对其表达的影响,从黄野螟(Heortia vitessoides)成虫转录组文库中筛选获得黄野螟硫氧还蛋白过氧化物酶Tpx基因全长cDNA,命名为HvTpx(GenBank:MF521978)。序列分析显示,该序... 为阐明硫氧还蛋白过氧化物酶Tpx基因的表达模式并研究温度胁迫对其表达的影响,从黄野螟(Heortia vitessoides)成虫转录组文库中筛选获得黄野螟硫氧还蛋白过氧化物酶Tpx基因全长cDNA,命名为HvTpx(GenBank:MF521978)。序列分析显示,该序列开放阅读框长度为588bp,共编码195个氨基酸。HvTpx属于典型2-Cys类Tpx。HvTpx的氨基酸序列与棉铃虫(Helicoverpa armigera)同源性最高,为87%,与其他昆虫的同源性在75%以上。黄野螟与棉铃虫处在系统发育树的同一分支。RT-qPCR分析结果显示:HvTpx在成虫中的表达量高于其他发育阶段;HvTpx在幼虫中肠表达量最高;HvTpx在成虫腹部表达量最高,足部表达量最低;HvTpx在0℃、10℃和35℃的基因表达量显著高于对照(25℃)。结果说明这些温度可以诱导HvTpx表达上调。 展开更多
关键词 黄野螟 硫氧还蛋白过氧化物酶 基因表达模式 温度胁迫 RT-QPCR
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多头带绦虫TPx基因的生物信息学简析 被引量:1
11
作者 李永光 袁红 《畜牧兽医杂志》 2019年第4期1-6,共6页
从患病绵羊脑内采集多头蚴原头节,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因,PCR产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠埃希菌DH5α后测序,克隆到的TmTPx基因开放阅读框为591bp,编码196个氨基酸。运用DNASTAR... 从患病绵羊脑内采集多头蚴原头节,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因,PCR产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠埃希菌DH5α后测序,克隆到的TmTPx基因开放阅读框为591bp,编码196个氨基酸。运用DNASTAR、Rpsblast等软件对TmTPx基因进行生物信息学分析,能确定TmTPx的蛋白表面暴露区、蛋白骨架柔韧性、蛋白抗原指数、功能域等,利于从分子水平了解TmTPx的功能及多头带绦虫的生理代谢、进化分类。 展开更多
关键词 多头带绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶 生物信息学 分子水平
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小地老虎硫氧还蛋白过氧化物酶AiTPX1的分子特征及其对杀虫剂胁迫的响应
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作者 杨浩岚 赵乐 +4 位作者 曹付 江连强 刘苏 李茂业 李世广 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期258-270,共13页
【目的】硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)在昆虫抵御氧化胁迫中具有重要作用。本研究旨在鉴定小地老虎Agrotis ipsilon TPX基因,明确其编码蛋白质的抗氧化能力,阐明TPX基因在小地老虎不同发育期、不同组织以及在3种杀虫剂(高效氯氟氰菊酯、... 【目的】硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)在昆虫抵御氧化胁迫中具有重要作用。本研究旨在鉴定小地老虎Agrotis ipsilon TPX基因,明确其编码蛋白质的抗氧化能力,阐明TPX基因在小地老虎不同发育期、不同组织以及在3种杀虫剂(高效氯氟氰菊酯、辛硫磷和氯虫苯甲酰胺)胁迫下的表达模式,为深入了解小地老虎TPX基因的生理功能奠定基础。【方法】利用同源检索技术从小地老虎转录组中鉴定TPX基因,利用大肠杆菌表达重组蛋白并分析其抗氧化能力,使用实时荧光定量PCR技术分析TPX基因的表达模式,使用试剂盒检测幼虫体内H2O2的含量变化。【结果】从小地老虎转录组中鉴定了1个TPX基因的cDNA序列,命名为AiTPX1。根据其编码蛋白质的结构特征,结合系统进化分析结果,确定AiTPX1属于2-Cys家族。在大肠杆菌中成功表达了AiTPX1重组蛋白,该蛋白能够显著提高大肠杆菌在氧化胁迫下的存活率(P<0.05)。AiTPX1基因在小地老虎不同发育期和不同组织中均有表达,但在蛹期和幼虫中肠中表达量最高。使用LC50剂量的高效氯氟氰菊酯、辛硫磷和氯虫苯甲酰胺处理小地老虎幼虫后,幼虫体内H2O2含量显著升高,AiTPX1表达水平也显著上升。高效氯氟氰菊酯处理后24 h,AiTPX1表达水平为对照组的8.1倍(P<0.05),辛硫磷和氯虫苯甲酰胺处理后6 h,AiTPX1转录水平分别为对照组的6.5倍和6.0倍(P<0.05)。【结论】AiTPX1可能具有缓解高效氯氟氰菊酯、辛硫磷和氯虫苯甲酰胺引起的氧化胁迫的功能,从而增强小地老虎幼虫对3种杀虫剂的耐受性。 展开更多
关键词 小地老虎 硫氧还蛋白过氧化物酶 原核表达 杀虫剂 氧化胁迫 表达模式
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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及鉴定 被引量:8
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作者 王慧 侯秋莲 +2 位作者 张壮志 张富春 张文宝 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期430-434,共5页
目的克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase TPx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白抗原,免疫小鼠制备抗血清。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR的方... 目的克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase TPx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白抗原,免疫小鼠制备抗血清。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR的方法扩增EgTPx基因,克隆到原核表达载体pET-41b中,转化大肠杆菌BL21,经过IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,通过谷胱甘肽Sepharose4B层析柱分离纯化获得重组蛋白并免疫小鼠,制备抗血清。Western blot鉴定抗血清的特异性,ELISA测定抗体的效价。结果用PCR方法扩增获得的EgTPx基因长度为582bp,经酶切鉴定和序列测定,插入到原核表达载体的基因片段为EgTPx基因,SDS-PAGE结果显示表达融合蛋白相对分子质量约为54kDa,鼠抗EgTPx抗体能与融合蛋白和天然原头蚴抗原发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶256000。结论成功地制备了鼠抗EgTPx抗体,并能够特异识别原核表达的融合蛋白EgTPx和天然原头蚴抗原,为研制有效的包虫病疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶 融合蛋白 抗血清
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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的表达及抗原性分析 被引量:5
14
作者 李航 李文卉 +6 位作者 李永光 苟惠天 王艳华 张德林 贾万忠 史大中 付宝权 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期708-711,共4页
目的在原核系统表达并初步鉴定细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因重组蛋白的抗原性。方法对已构建的重组质粒pMD-18T-EgTPx进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-EgTPx,转化... 目的在原核系统表达并初步鉴定细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因重组蛋白的抗原性。方法对已构建的重组质粒pMD-18T-EgTPx进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-EgTPx,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,对表达产物纯化后用Western-blot方法和ELISA鉴定重组EgTPx蛋白的抗原性。结果构建的重组表达质粒pET30a-EgTPx阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定无基因突变,开放阅读框正确;含有pET30a-EgTPx重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为27 kDa,而且主要以包涵体形式存在;Western-blot和ELISA结果表明EgTPx重组抗原可以被棘球蚴感染羊阳性血清特异性识别。结论成功构建了pET30a-EgTPx表达质粒,EgTPx重组蛋白得到了高效表达,表达产物具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶(tpx) 基因表达 抗原性
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大剂量硒降低硒酶基因表达并致大鼠肝组织损伤 被引量:10
15
作者 刘琼 甘璐 +1 位作者 Abdella A li 徐辉碧 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期378-382,共5页
目的 : 探讨补充大剂量硒对谷胱甘肽过氧化物酶和硫氧还蛋白还原酶基因表达和酶活性的影响、以及对大鼠肝组织的作用。方法 : 给大鼠腹腔分别注射 0 ,2 0 ,40和 80 μg/ (kg·d)亚硒酸钠 -生理盐水 1 5d,取肝脏做组织切片 ,再将... 目的 : 探讨补充大剂量硒对谷胱甘肽过氧化物酶和硫氧还蛋白还原酶基因表达和酶活性的影响、以及对大鼠肝组织的作用。方法 : 给大鼠腹腔分别注射 0 ,2 0 ,40和 80 μg/ (kg·d)亚硒酸钠 -生理盐水 1 5d,取肝脏做组织切片 ,再将肝组织匀浆后通过反转录聚合酶链式反应半定量检测不同剂量亚硒酸钠对硒酶基因表达的影响 ,同时测定硒酶活性、肝组织硒含量及丙二醛含量。结果 : 补充亚硒酸钠 2 0 μg/ (kg· d)的鼠肝中 ,两类硒酶的 m RNA丰度及酶活性均增高 ,而补充 40和 80 μg/ (kg· d)亚硒酸钠的大鼠 ,两类硒酶的 m RNA丰度及酶活性均显著下降 (P<0 .0 5) ,且随补硒剂量升高下降幅度增大。而鼠肝硒含量则随补硒剂量升高而显著性增大 (P<0 .0 5)。与对照组相比 ,补充 40μg / (kg· d)亚硒酸钠的鼠肝脂质过氧化水平增高 (P<0 .0 1 ) ,肝组织在形态学上发生病变。结论 : 大剂量补硒降低鼠肝谷胱甘肽过氧化物酶和硫氧还蛋白还原酶基因表达和酶活性 ,并造成肝组织损伤。 展开更多
关键词 大剂量 硒酶基因表达 肝组织损伤 亚硒酸钠 谷胱甘肽过氧化物酶 硫氧还蛋白还原酶
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植物谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)研究进展 被引量:31
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作者 乔新荣 张继英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期7-13,共7页
逆境胁迫会诱导植物产生过多的活性氧(ROS),引起氧化胁迫,严重影响其生长发育。相应地,植物为适应诸多不良环境会产生多种抗氧化剂、抗氧化酶等协调氧化还原平衡,其中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)是植物体内重要的... 逆境胁迫会诱导植物产生过多的活性氧(ROS),引起氧化胁迫,严重影响其生长发育。相应地,植物为适应诸多不良环境会产生多种抗氧化剂、抗氧化酶等协调氧化还原平衡,其中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)是植物体内重要的抗氧化酶之一。对近年来植物中GPX的结构、亚细胞定位、酶催化底物特点及作用研究进展进行综述,并对未来可能的研究方向进行展望。 展开更多
关键词 谷胱甘肽过氧化物酶 硫氧还蛋白 胁迫耐性
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不同硒浓度日粮对小鼠肝脏和睾丸组织中部分硒蛋白mRNA水平的影响 被引量:6
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作者 郑良焰 张琴 +6 位作者 刘碧涛 郭凯 余文兰 刘正伟 陈叶 郭翠丽 唐兆新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期38-42,共5页
选取80只7周龄雄性BALB/c小鼠,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组20只,使Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组基础日粮中硒含量达到0.045、0.1、0.4和0.8mg/kg。结果表明:①Ⅰ组能显著降低小鼠肝脏中硒的沉积量(P<0.05);②Ⅰ组谷胱甘肽过氧化物酶1(glutath... 选取80只7周龄雄性BALB/c小鼠,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组20只,使Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组基础日粮中硒含量达到0.045、0.1、0.4和0.8mg/kg。结果表明:①Ⅰ组能显著降低小鼠肝脏中硒的沉积量(P<0.05);②Ⅰ组谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)的mRNA相对表达量明显低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),且Ⅱ、Ⅲ组在肝脏中差异显著(P<0.05),在睾丸中差异不显著(P>0.05);③Ⅰ、Ⅲ组肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPx4)的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),但均显著低于Ⅱ组(P<0.05),而各试验组间在睾丸中差异均不显著(P>0.05);④随着日粮中硒添加量的增加,肝脏和睾丸中硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase 2,TrxR2)的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。因此,在肝脏和睾丸组织中,饲喂低硒饲料能显著降低硒的沉积量和GPx1、GPx4、TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05);而饲喂高硒饲料能显著降低GPx1的mRNA相对表达量(P<0.05),同时显著增加TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05)。提示,硒对GPx1、GPx4和TrxR2mRNA相对表达量的调节存在组织差异性。 展开更多
关键词 谷胱甘肽过氧化物酶1 谷胱甘肽过氧化物酶4 硫氧还蛋白还原酶2 mRNA 肝脏 睾丸
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藻类硒蛋白研究进展 被引量:10
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作者 莫莹 李亚男 +1 位作者 王建 陈大清 《安徽农业科学》 CAS 2013年第17期7399-7403,共5页
硒是人体生长必须的基本元素。硒蛋白是由硒代半胱氨酸插入特异结合的蛋白。它在动物中的重要作用具有广泛的研究,而高等植物和酵母只有少量的相关研究。通过对藻类富硒机理、硒代谢途径、硒分布和形态、藻类硒蛋白等方面内容的总结、概... 硒是人体生长必须的基本元素。硒蛋白是由硒代半胱氨酸插入特异结合的蛋白。它在动物中的重要作用具有广泛的研究,而高等植物和酵母只有少量的相关研究。通过对藻类富硒机理、硒代谢途径、硒分布和形态、藻类硒蛋白等方面内容的总结、概括,重点介绍了藻类几种重要的硒蛋白。 展开更多
关键词 藻类 硒蛋白 谷胱甘肽过氧化物酶 硫氧还蛋白(TR)
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柽柳硫氧还蛋白过氧化物酶(ThPrx1)基因转入酵母的抗逆能力分析 被引量:5
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作者 贺琳 蒋丽丽 王玉成 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期101-104,共4页
从柽柳(Tamarix hispida)中克隆到了一个硫氧还蛋白过氧化物酶(Peroxiredoxin,Prx)家族基因(ThPrx1)。为了研究ThPrx1的抗逆功能,将ThPrx1基因构建到酵母表达载体pYES2中,转化到酿酒酵母(Saccha-romyces cerevisiae)中,获得重组酵母,并... 从柽柳(Tamarix hispida)中克隆到了一个硫氧还蛋白过氧化物酶(Peroxiredoxin,Prx)家族基因(ThPrx1)。为了研究ThPrx1的抗逆功能,将ThPrx1基因构建到酵母表达载体pYES2中,转化到酿酒酵母(Saccha-romyces cerevisiae)中,获得重组酵母,并用转空pYES2质粒的酵母作为对照。分别用NaCl、KCl、高温、低温、Cu-SO4、CdCl2、山梨醇、Na2CO3、甲基紫精胁迫条件处理转ThPrx1基因酵母(pYES2-ThPrx1)与对照(pYES2)酵母,来检测ThPrx1基因的抗逆能力。结果表明,ThPrx1基因具有抗NaCl、KCl、高温、低温、CuSO4、CdCl2、山梨醇、Na2CO3、甲基紫精胁迫的能力。研究结果提示该基因参与了柽柳的抗逆调控过程。 展开更多
关键词 柽柳 硫氧还蛋白过氧化物酶 抗逆 酵母表达
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阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆及序列分析(英文) 被引量:2
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作者 章家新 傅玉才 +1 位作者 刘红 郑晓红 《医学研究生学报》 CAS 2004年第8期680-684,共5页
目的 :获取阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆 ,研究其还原烷基氢过氧化物和氢过氧化物的抗氧化作用 ,以及调节由氢过氧化物介导的信号转换。 方法 :提取阴道毛滴虫的总RNA ,用λTripIEx2噬菌体载体构建cDNA表达文库 ,阳性质... 目的 :获取阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆 ,研究其还原烷基氢过氧化物和氢过氧化物的抗氧化作用 ,以及调节由氢过氧化物介导的信号转换。 方法 :提取阴道毛滴虫的总RNA ,用λTripIEx2噬菌体载体构建cDNA表达文库 ,阳性质粒cDNA克隆进行测序 ,并用生物软件RPS Blast,NCBIBlast和ClustalW等对 6个读码框架进行序列分析。 结果 :获得一株开放阅读框为 5 88对碱基的cDNA克隆 ,推测肽链有 196个氨基酸。序列分析表明 ,该肽链与衣滴虫过氧化物氧化还原酶 (Prx1蛋白 )及人的自然杀伤增强因子B分别有 5 6 %和 6 1%的同源性 ;除了两个高度保守的半胱氨酸作用基序外 ,还有蛋白激酶C磷酸化和酪氨酸激酶磷酸化作用基序 ,N 豆蔻酰化作用位点 ,脂质运载蛋白信号位点等。 结论 :该蛋白有 >5 6 %的可能性位于胞浆 ,和典型 2 CysPrx亚家族有很高 (5 6 %~ 6 2 % )的同源性 ,很可能是其中的一个新成员。 展开更多
关键词 阴道毛滴虫 硫氧还原蛋白过氧化物酶 过氧化物氧化还原酶
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