血清Trx1、VILIP-1对急性分水岭脑梗死患者预后不良的预测价值

目的探究血清硫氧还蛋白1(Trx1)、视锥蛋白样蛋白-1(VILIP-1)对急性分水岭脑梗死(ACWI)患者预后不良的预测价值。方法选取2019年12月至2022年12月在河北省邯郸市第一医院就诊的126例ACWI患者作为研究对象。收集所有患者的临床资料。检测所有患者甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总胆固醇(TC)水平。根据随访90 d的改良Rankin量表评分将患者分为预后良好组和预后不良组。采用酶联免疫吸附试验检测ACWI患者血清Trx1、VILIP-1水平。采用多因素Logistic回归分析ACWI患者预后不良的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析Trx1、VILIP-1单独及2项指标联合检测对ACWI患者预后不良的预测价值。结果随访90 d结果显示,预后良好组患者85例,预后不良组患者41例。预后不良组大面积脑梗死患者比例,美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分,血清TG、TC、LDL-C水平均明显高于预后良好组,血清HDL-C水平明显低于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清Trx1水平明显低于预后良好组,血清VILIP-1水平明显高于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,NIHSS评分升高、VILIP-1水平升高是ACWI患者预后不良的危险因素(P<0.05),Trx1水平升高是ACWI患者预后不良的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Trx1、VILIP-1单独检测预测ACWI患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.782、0.814,均低于2项指标联合检测预测ACWI患者预后不良的0.905(Z=2.487、2.350,P<0.05)。结论血清Trx1水平降低和VILIP-1水平升高与ACWI患者预后不良有关,二者均可辅助判断患者预后情况,且二者联合检测对ACWI患者预后不良的预测价值更高。

PM_(2.5)暴露对氧糖剥夺后复氧复糖大鼠神经小胶质细胞的损伤作用及其机制

目的观察细颗粒物(PM_(2.5))暴露对氧糖剥夺后再复氧复糖(OGD/R)大鼠神经小胶质细胞系GMI-R1的损伤作用,并基于硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/NLR家族Pyrin结构域3(NLRP3)通路探讨相关机制。方法培养GMI-R1细胞并分为对照组、模型组、实验组、TXNIP抑制剂组。模型组、实验组、TXNIP抑制剂组制作OGD/R模型,对照组常规培养。实验组和TXNIP抑制剂组在造模前先进行50μg/m L PM_(2.5)暴露24 h,TXNIP抑制剂组PM_(2.5)暴露前给予10μmol/L的TXNIP抑制剂鲁斯可皂苷元预处理30 min。复氧24 h后采用流式细胞术检测死亡细胞,采用ELISA法检测各组培养基上清中的白细胞介素(IL)-18和IL-1β,采用Western blotting法检测各组细胞中的TXNIP、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD),采用免疫荧光法检测GSDMD-N。结果对照组、模型组、实验组细胞死亡率及培养液上清中IL-18、IL-1β水平依次升高,TXNIP抑制剂组细胞死亡率及培养液上清中IL-18、IL-1β水平低于实验组(P均<0.01)。对照组、模型组、实验组细胞中TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及焦亡相关蛋白GSDMD、GSDMD-N表达依次增高,TXNIP抑制剂组NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N蛋白表达低于实验组(P均<0.05)。结论PM_(2.5)暴露能加重OGD/R下GMI-R1细胞的损伤,加重炎症反应,机制可能与促进TXNIP/NLRP3通路活化和细胞焦亡有关。

血清CHI3L1、TXNIP水平对多囊卵巢综合征患者妊娠结局的预测价值

目的探究血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)水平对多囊卵巢综合征(PCOS)患者妊娠结局的预测价值。方法选取2021年6月至2023年1月临清市人民医院诊治的112例PCOS患者作为PCOS组,另选取同时间段同院孕检的健康孕妇105例作为对照组。比较PCOS组与对照组、PCOS组不同妊娠结局患者的临床指标,采用Pearson检验分析血清CHI3L1、TXNIP表达与孕酮水平、新生儿体重的相关性,采用多因素Logistic回归分析PCOS患者妊娠结局的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CHI3L1、TXNIP表达对PCOS患者妊娠结局的预测价值。结果妊娠结局不良组(n=43)的孕妇剖宫产率及黄体生成素、CHI3L1、TXNIP、孕酮、空腹血糖、空腹胰岛素水平均高于妊娠结局良好组(n=69)和对照组(P<0.05),新生儿体重低于妊娠良好组和对照组(P<0.05)。PCOS患者血清CHI3L1、TXNIP表达水平与孕妇孕酮水平均呈正相关(P<0.05)。剖宫产率及新生儿体重、黄体生成素、CHI3L1、TXNIP、孕酮、空腹血糖、空腹胰岛素水平均为PCOS患者妊娠结局的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清CHI3L1、TXNIP单独和联合预测PCOS发生的曲线下面积(AUC)分别为0.822、0.844、0.915,联合诊断高于CHI3L1、TXNIP任意单独诊断(P<0.05)。结论PCOS患者CHI3L1、TXNIP水平升高,两者联合对PCOS患者妊娠结局的预测价值更高。

金丝桃苷调节TXNIP/NLRP3信号通路对细菌性脑膜炎大鼠神经炎症的影响

目的:分析金丝桃苷(Hyp)调节硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对细菌性脑膜炎(BM)大鼠神经炎症的影响。方法:随机选择15只健康大鼠为健康组(尾静脉注射生理盐水),BM模型大鼠随机分为BM组(尾静脉注射生理盐水)、L-Hyp组(尾静脉注射10mg/kg Hyp)、H-Hyp组(尾静脉注射50mg/kg Hyp)、TXNIP-AAV组(尾静脉注射TXNIP-AAV)、AAV组(尾静脉注射AAV-NC)、白藜芦醇(Res)组(尾静脉注射30mg/kg Res)。采用Loeffler评分评估大鼠治疗后神经功能;血细胞分析仪测定白细胞(WBC)数量;酶联免疫吸附法分析脑脊液活性氧(ROS)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;测定各组大鼠脑组织含水量;HE染色观察脑组织病理学变化;TUNEL染色观察脑组织细胞凋亡;免疫印迹法分析脑组织中TXNIP、NLRP3、caspase-1、凋亡相关斑点蛋白(ASC)、离子钙结合适配分子1(Iba1)、IL-1β蛋白表达。结果:与健康组比,BM组脑脊液ROS、WBC、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及脑组织含水量、细胞凋亡率增加,Loeffler评分减少(P<0.05);与BM组比,L-Hyp组、H-Hyp组Loeffler评分增加,脑脊液ROS、WBC、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及脑组织含水量、细胞凋亡率减少(P<0.05);与H-Hyp组比,TXNIP-AAV组、AAV组脑脊液ROS、WBC、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及脑组织含水量、细胞凋亡率增加,Loeffler评分减少,Res组Loeffler评分增加,脑脊液ROS、WBC、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及脑组织含水量、细胞凋亡率减少(P<0.05)。健康组大鼠脑组织形态正常;BM组、TXNIP-AAV组、AAV组脑组织形态改变,细胞排列散乱,出现核皱缩;L-Hyp组、H-Hyp组、Res组脑组织形态有所改善,细胞坏死、皱缩减少。与健康组比,BM组脑组织中TXNIP、NLRP3、caspase-1、ASC、Iba1、IL-1β表达增加(P<0.05);与BM组比,LHyp组、H-Hyp组脑组织中TXNIP、NLRP3、caspase-1、ASC、Iba1、IL-1β表达减少(P<0.05);与H-Hyp组比,TXNIP-AAV组、AAV组脑组织中TXNIP、NLRP3、caspase-1、ASC、Iba1、IL-1β表达增加,Res组脑组织中TXNIP、NLRP3、caspase-1、ASC、Iba1、IL-1β表达减少(P<0.05)。结论:Hyp可能抑制BM大鼠神经炎症,其机制可能与抑制TXNIP/NLRP3通路有关。

血清TRX-1、NLRP3表达水平与儿童功能性消化不良的相关性研究

目的探讨血清硫氧还蛋白1(TRX-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达水平与儿童功能性消化不良(FD)的相关性。方法选取2022年5月至2023年6月就诊于石家庄市妇幼保健院的FD患儿45例为FD组;另选取健康儿童40例为对照组。采用实时荧光定量PCR测定血清TRX-1、NLRP3 mRNA表达水平,Spearman相关分析血清TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平与FD相关评分的相关性,多因素Logistic回归分析FD发生的影响因素。结果FD组血清TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05)。轻度组、中度组FD患儿血清TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平均低于重度组,轻度组TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA水平均低于中度组(P<0.05)。血清TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平与上腹痛、腹胀或上腹不适、恶心呕吐均呈正相关(P<0.05),与早饱、食欲不振或食量减少、嗳气均无相关性(P>0.05)。血清NLRP3 mRNA表达水平与总分呈正相关(P<0.05),血清TRX-1 mRNA表达水平与总分无相关性(P>0.05)。血清TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA水平升高是FD发生的独立危险因素(P<0.05)。结论血清TRX-1、NLRP3表达水平可能在FD的发病过程中发挥着重要作用。

炎症性肠病相关肠纤维化的分子机制研究进展

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)主要包括克罗恩病(Crohn′s disease,CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC),是一种病因和发病机制至今尚不十分明确的非特异性肠道疾病,肠纤维化是IBD的常见并发症,可同时发生在UC和CD中,也是其大多数长期并发症的基础,往往形成不可逆的脏器病理生理改变,严重影响IBD患者的预后。本文根据近年来国内外关于IBD肠纤维化发生机制的研究,对其发生过程中可能涉及到的细胞因子或分子途径作一综述。

舒芬太尼调节AMPK/TXNIP/NLRP3信号通路对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响

目的探讨舒芬太尼通过调节腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响。方法将人肺泡上皮Ⅱ型细胞(AECⅡ)细胞培养至对数期,然后分为对照组(正常葡萄糖培养)、脂多糖组(50μg/mL脂多糖诱导损伤)、低浓度舒芬太尼组(20μmol/L)、高浓度舒芬太尼组(40μmol/L)、高浓度舒芬太尼(40μmol/L)+AMPK-IN-3组(50μmol/L AMPK抑制剂)。MTT法检测细胞增殖能力,Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)双染色检测细胞焦亡,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,实时荧光定量PCR检测细胞焦亡相关因子半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、焦孔素D(GSDMD)mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中AMPK、磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、TXNIP、NLRP3蛋白表达。结果与对照组比较,脂多糖组AECⅡ细胞的细胞存活率降低,PI+阳性细胞增多,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α释放增加,Caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达增加,p-AMPK/AMPK表达减少,TXNIP、NLRP3表达增加(P<0.05)。与脂多糖组比较,低浓度舒芬太尼组、高浓度舒芬太尼组AECⅡ细胞的细胞存活率升高,PI+阳性细胞减少,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α释放减少,Caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达降低,p-AMPK/AMPK表达增多,TXNIP、NLRP3表达减少(P<0.05)。与高浓度舒芬太尼组比较,高浓度舒芬太尼+AMPK-IN-3组AECⅡ细胞存活率降低,PI+阳性细胞增多,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α释放增加,Caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达增加,p-AMPK/AMPK表达减少,TXNIP、NLRP3表达增加(P<0.05)。结论舒芬太尼可能通过调控AMPK/TXNIP/NLRP3信号通路改善脂多糖诱导的肺泡上皮细胞焦亡。

毛蕊花糖苷调节IRE1α/TXNIP/NLRP3信号通路对重症急性胰腺炎模型大鼠肺损伤的影响

目的探讨毛蕊花糖苷(acteoside,ACT)调节肌醇需求酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)通路对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)模型大鼠肺损伤的影响。方法大鼠随机分为SAP组、正常组、毛蕊花糖苷低剂量(ACT-L)组和高剂量(ACT-H)组、乌司他丁组、ACT-H+空载体组、ACT-H+IRE1α过表达腺病毒载体(Ad-IRE1α)组,每组12只。除正常组外,其他组大鼠均通过向胆胰管注入5%牛磺胆酸钠溶液的方式构建SAP模型,建模成功后给药2天,一天一次。检测血清脂肪酶、淀粉酶水平及肺湿重/干重比值的变化;HE染色检测胰腺、肺组织病理变化并评估病理评分;试剂盒检测肺组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平;ELISA检测肺组织中白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平;蛋白质印迹检测肺组织中IRE1α、TXNIP、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)蛋白水平。结果与正常组相比,SAP组大鼠胰腺水肿,有大量细胞坏死以及炎症细胞浸润,肺组织炎症细胞浸润明显,肺泡充血、肺泡壁水肿严重,胰腺、肺组织病理评分、血清中脂肪酶、淀粉酶水平、肺湿重/干重比值、肺组织中MDA、ROS水平、IL-18、IL-1β水平及IRE1α、TXNIP、NLRP3、caspase-1蛋白升高,肺组织中SOD水平降低(P<0.05);与SAP组相比,ACT-L组、ACT-H组、乌司他丁组大鼠胰腺及肺组织损伤有所改善,胰腺、肺组织病理评分、血清中脂肪酶、淀粉酶水平、肺湿重/干重比值、肺组织中MDA、ROS水平、IL-18、IL-1β水平及IRE1α、TXNIP、NLRP3、caspase-1蛋白降低,肺组织中SOD水平升高(P<0.05);与ACT-H+空载体组相比,ACT-H+Ad-IRE1α组大鼠胰腺及肺组织损伤加剧,胰腺、肺组织病理评分、血清中脂肪酶、淀粉酶水平、肺湿重/干重比值、肺组织中MDA、ROS水平、IL-18、IL-1β水平及IRE1α、TXNIP、NLRP3、caspase-1蛋白升高,肺组织中SOD水平降低(P<0.05)。结论ACT改善SAP大鼠肺损伤的机制可能与抑制IRE1α/TXNIP/NLRP3通路活化有关。

芍药苷预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤氧化应激的保护作用及对Nrf-2/TXNIP/NLRP-3信号通路的影响

目的探讨芍药苷(PF)对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)大鼠氧化应激的影响及其可能作用机制。方法选取65只SD大鼠采用结扎冠状动脉(冠脉)左前降支建立MIRI模型,造模成功后随机分为模型组、PF低、高剂量(60 mg/kg、120 mg/kg)组和西药(1 mg/kg盐酸地尔硫卓)组各15只,另设对照组。检测大鼠天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;HE染色观察心肌组织病理学变化;RT-PCR和Western blot检测心肌组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体蛋白3(NLRP-3)mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,各实验组AST、CK、CK-MB、LDH、MDA水平、TXNIP、NLRP-3 mRNA和蛋白水平降低,GSH-Px、SOD、CAT水平、Nrf2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与PF低剂量组比较,PF高剂量组以上指标效果更佳(P<0.05)。结论PF可减轻MIRI大鼠氧化应激,改善心肌损伤,可能与Nrf2/TXNIP/NLRP-3信号通路有关。

麻黄水提物减轻脂多糖诱导急性肺损伤的作用及机制研究

目的研究麻黄水提物通过活性氧(reactive oxygen species,ROS)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)/Nod样受体蛋白3(Nod like receptor protein 3,NLRP3)通路减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、麻黄水提物(400 mg/kg)组、三甲胺N-氧化物(trimethylamine N-oxide,TMAO,110 mg/kg)组、麻黄水提物(400 mg/kg)+TMAO(110 mg/kg)组,灌胃给药10 d后采用腹腔注射LPS(5 mg/kg)的方法建立LPS诱导ALI模型。造模后6 h,检测肺组织病理改变,支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症细胞分类,血清及BALF中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,肺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总抗氧化力(total antioxidant capacity,T-AOC)含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平。结果模型对照组大鼠出现肺组织内炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚的病理改变,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平均高于正常对照组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量低于正常对照组(P<0.05)。麻黄水提物组大鼠肺组织的病理改变较模型对照组改善,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平均低于模型对照组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量高于模型对照组(P<0.05)。麻黄水提物+TMAO组大鼠肺组织的病理改变较麻黄水提物组加重,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平均高于麻黄水提物组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量低于麻黄水提物组(P<0.05)。结论麻黄水提物可减轻LPS诱导ALI,并抑制炎症反应和氧化应激反应,其可能的分子机制与抑制ROS/TXNIP/NLRP3通路有关。

减量应用吸入型糖皮质激素对稳定期COPD急性加重风险影响的单中心前瞻性随机对照试验

目的探讨吸入型糖皮质激素减量应用对稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重风险影响。方法选取2019年1月至2021年11月开封市中心医院145例稳定期COPD患者,根据吸入型糖皮质激素剂量分为高剂量组(50μg/500μg沙美特罗替卡松,n=73)和低剂量组(50μg/250μg沙美特罗替卡松,n=72);另设空白对照组(n=72),不给予糖皮质激素。比较三组疗效、急性加重次数、不良反应及治疗前后外周血单个核细胞硫氧还蛋白结合蛋白/Nod样受体蛋白3(TXNIP/NLRP3)炎性小体通路、肺功能指标[第1秒用力肺活量占预计值的百分比(FEV1%)、第1秒用力呼气量(FEV1)、第1秒用力呼气量占所有呼气量的比例(FEV1/FVC)]、多因素分级系统(BODE)指数、COPD评估测试量表(COPD assessment test,CAT)评分。结果低剂量组、高剂量组治疗总有效率(87.50%、89.04%)、COPD急性加重次数(次,0.90±0.35 vs.0.78±0.49)比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗前后三组TXNIP/NLRP3炎性小体通路(外周血单个核细胞TXNIP、NLRP3表达及差值)、肺功能指标(FEV1/FVC、FEV1、FEV1%水平及差值)、BODE指数、CAT评分及差值比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后低剂量组、高剂量组外周血单个核细胞TXNIP[低剂量组:(0.96±0.26 vs.1.21±0.33)、高剂量组:(1.01±0.24 vs.1.30±0.28)]、NLRP3表达[低剂量组:(1.20±0.28 vs.1.52±0.44)、高剂量组:(1.15±0.33 vs.1.48±0.47)]、BODE指数[分,低剂量组:(2.91±0.34 vs.4.26±0.42)、高剂量组:(2.84±0.40 vs.4.14±0.55)]、CAT评分[分,低剂量组:(18.21±1.46 vs.23.61±2.73)、高剂量组:(17.75±1.74 vs.23.19±2.78)]均低于治疗前(P<0.05)。低剂量组不良反应发生率(8.33%)低于高剂量组(20.55%,P<0.05)。结论吸入型糖皮质激素低剂量、高剂量应用于稳定期COPD均可有效缓解炎症反应,改善肺功能及临床症状,预防稳定期COPD急性加重,且低剂量应用不良反应较少,更具安全性。

白杨素通过抑制IRE1α/TXNIP/NLRP3通路减轻糖尿病大鼠的肾组织损伤

目的 探讨白杨素(CHR)通过抑制肌醇需求酶1α(IRE1α)/硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路减轻糖尿病大鼠肾组织损伤的机制。方法 将健康SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、CHR组、CHR+溶剂对照组、CHR+IRE1α组,每组8只。除对照组外,其余各组高脂高糖饲料饲养联合30 mg/kg链脲佐菌素(STZ)注射构建糖尿病模型,CHR组、CHR+溶剂对照组、CHR+IRE1α组采用100 mg·kg^(-1)·d^(-1) CHR连续灌胃3周,CHR+溶剂对照组、CHR+IRE1α组同时分别腹腔注射1 m L磷酸缓冲液、1×10^(9) PFU/m L Ad-IRE1α病毒悬液;对照组、模型组腹腔注射等量生理盐水。观察大鼠一般情况并称重;检测空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐(s Cr)、血尿素氮(BUN)水平;苏木精-伊红染色观察肾组织形态;蛋白免疫印迹法检测肾组织中IRE1α、TXNIP、NLRP3、caspase-1、白介素-1β(IL-1β)蛋白表达情况。结果 模型组大鼠出现多饮、多尿、多食、消瘦情况,精神状态欠佳,肾小球肥大、基质增厚,肾小球毛细血管间有结节状粉红色玻璃样物,肾小管内皮气球样变,部分细胞出现核固缩现象;CHR组、CHR+溶剂对照组较模型组身体和精神状态有所改善,肾小球、肾小管病理现象缓解;CHR+IRE1α组相较CHR组肾小球肥大、基质变厚加重,肾小管出现病变。与对照组相比,模型组血液中FPG、TG、TC、LDL-C、s Cr、BUN水平及肾脏组织中IRE1α、TXNIP、caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白水平升高(P<0.05),体质量减轻(P<0.05),HDL-C水平降低(P<0.05);与模型组相比,CHR组血液中FPG、TG、TC、LDL-C、s Cr、BUN水平及肾组织中IRE1α、TXNIP、caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白水平降低(P<0.05),体质量增加(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05);与CHR组相比,CHR+IRE1α组血液中FPG、TG、TC、LDL-C、s Cr、BUN水平及肾组织中IRE1α、TXNIP、caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白水平升高(P<0.05),体质量减轻(P<0.05),HDL-C水平降低(P<0.05)。结论 CHR可能通过抑制IRE1α/TXNIP/NLRP3通路减轻糖尿病大鼠的肾组织损伤,发挥对肾组织的保护作用。

慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者外周血巨噬细胞极化和TXNIP/NLRP3水平与预后的关系探讨

目的探讨慢加急性乙型肝炎肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血巨噬细胞极化和外周血单个核细胞(PBMCs)硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化.方法2019年6年~2020年6月我院收治的HBV-ACLF患者57例和慢性乙型肝炎(CHB)患者43例,使用流式细胞仪检测外周血M1/M2型巨噬细胞比率,分离PBMCs,采用实时荧光定量RT-PCR法检测TXNIP、NLRP3和半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)mRNA水平,采用ELISA法检测血清白介素-6(IL)-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α).结果HBV-ACLF组M1型巨噬细胞比率和M1/M2细胞比值分别为(3.5±0.4)%和(1.2±0.2),显著高于CHB组[分别为(2.1±0.2)%和(0.6±0.1),P<0.05],而M2型巨噬细胞比率为(2.5±0.3)%,显著低于CHB组[(4.1±0.4)%,P<0.05];HBV-ACLF组血清IL-6和TNF-α水平分别为(37.9±4.2)ng/L和(2.3±0.2)pg/mL,显著高于CHB组[分别为(28.8±3.6)ng/L和(1.2±0.1)pg/mL,P<0.05],而血清IL-10水平为(1.4±0.2)pg/mL,显著低于CHB组[(2.9±0.3)pg/mL,P<0.05];HBV-ACLF组PBMCs NLRP3、TXNIP和caspase-1 mRNA水平分别为(0.5±0.1)、(0.7±0.1)和(1.2±0.1),显著低于CHB组[分别为(0.8±0.2)、(1.0±0.1)和(1.6±0.2),P<0.05];15例死亡患者外周血M1型巨噬细胞比率为(4.1±0.4)%,显著高于42例生存组[(3.3±0.3)%,P<0.05],而M2型巨噬细胞比率、PBMCs NLRP3和TXNIP mRNA水平分别为(1.9±0.2)%、(0.2±0.1)和(0.4±0.1),显著低于生存组[分别为(2.7±0.3)%、(0.6±0.1)和(0.8±0.1),P<0.05].结论HBV-ACLF患者外周血巨噬细胞向促炎方向极化,而TXNIP和NLRP3 mRNA水平下调可能与免疫功能被抑制有关.

七氟醚后处理对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞焦亡及TXNIP/NLRP3通路的影响

目的:基于硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路探究七氟醚后处理(SPostC)对缺氧复氧(HR)诱导的H9C2心肌细胞焦亡的影响。方法:体外培养H9C2心肌细胞,将细胞分为4组:正常对照组(NC组)、HR组、HR+SPostC组、HR+SPostC+TXNIP/NLRP3通路抑制剂白藜芦醇组(HR+SPostC+RES组)。采用CCK-8检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH含量;采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞膜孔的形成;采用Western blot法检测细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、IL-1β、IL-18及TXNIP/NLRP3通路相关蛋白TXNIP、NLRP3的表达;采用实时荧光定量PCR法检测TXNIP/NLRP3通路相关基因TXNIP、NLRP3的表达。结果:与NC组相比,其余3组细胞活力显著降低,而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显升高(P<0.05);与HR组相比,HR+SPostC组和HR+SPostC+RES组细胞活力显著升高(P<0.05),而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显降低(P<0.05);与HR+SPostC组相比,HR+SPostC+RES组细胞活力显著升高(P<0.05),而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显降低(P<0.05)。结论:SPostC可能通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路进而抑制HR诱导的H9C2心肌细胞焦亡。

甘蓝自交不亲和信号传导中SRK结合蛋白基因THL1的克隆与序列分析

采用PCR和RT PCR技术 ,从甘蓝基因组和柱头总RNA中扩增获得了 719bp的硫氧还蛋白(THL1)的全长基因序列和 4 30bp的cDNA序列。序列分析首次表明 ,克隆的THL1基因全序列有两个内含子 ,cDNA序列编码

甘蓝中硫氧还蛋白编码基因THL1的分子特性及表达研究

采用PCR和RT-PCR技术,以‘E1’甘蓝基因组DNA和柱头cDNA为模板对THL1基因进行扩增克隆,得到的片段长度分别为732bp和455bp。序列分析表明,克隆的DNA和cDNA序列与甘蓝‘西园四号’THL1的DNA和cDNA同源性分别为97.9%和98.3%,两条序列内含子的大小不同;同时,前者第2内含子不符合典型的GT-AG规则:即第2个内含子3′端碱基为AT。将THL1基因cDNA序列定向克隆到原核表达载体pET-43.1a(+),构建融合表达质粒pET43.1a(+)-THL1,在大肠杆菌BL21中表达出分子量为74kD的融合蛋白,经胰岛素检测,THL1有氧化还原活性,表明THL1在大肠杆菌中得到了正确表达。

甘蓝自交不亲和信号传导中THL1和SRK相互作用的体外检测

在甘蓝自交不亲和信号传导中SRK和THL1之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增了THL1和SRK激酶结构域(记为SRKE1)编码序列,构建了THL1原核表达质粒pET43.1-THL1,SRKE1原核表达质粒pET431-SRKE1和真核表达质粒pPIC9K-SRKE1,分别在宿主菌大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115中进行表达。THL1融合蛋白经胰岛素检测,表明表达的THL1有氧化还原活性。建立了体外检测蛋白质相互作用的新方法,并用该方法对THL1与SRKE1的相互作用进行了检测,结果表明THL1可与SRKE1相互作用并形成稳定的复合体,这为深入分析THL1与SRK相互作用机理提供了理论和技术基础。

甘蓝SCR、THL与SRK交替相互作用的酵母双杂交检测

eSRK(S位点受体激酶胞外域)、SCR/SP11(S位点富含半胱氨酸蛋白-S位点蛋白11)和THL1(类硫氧还蛋白)是甘蓝自交不亲和性信号传导过程重要的3个元件。利用PCR技术获得两种甘蓝SCR2(class-Ⅱ)、eSRK2(class-Ⅱ)、THL1、SRKJ(class-Ⅰ,SRK6激酶域)和eSRK28(class-Ⅰ)的编码序列,并分别构建以pGBKT7为载体的SCR2、THL1的重组诱饵质粒和以pGADT7为载体的eSRK2、eSRK28、SRKJ的重组猎物质粒。利用酵母双杂交系统验证eSRK2-SCR2、eSRK28-SCR2、SRKJ-THL1的相互作用。重组质粒在宿主细胞中未产生毒性及自激活作用,表明重组表达载体构建成功;组合Y2HGold〔pGBKT7-SCR2〕×Y187〔pGADT7-eSRK2〕在三缺平板(SD/-Trp-Leu-His/x-α-gal/AbA,TDO/x/A)上生长出蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3;组合Y2HGold〔pGBKT7-SCR2〕×Y187〔pGADT7-eSRK28〕能够在二缺平板(SD/-Trp-Leu)上生长,但在三缺平板上不生长,表明不同单倍型SRK-SCR可能不发生相互作用;组合Y187〔pGADT7-SRKJ〕×Y2HGold〔pGBKT7-THL1〕能够在四缺平板上生长,激活了4种报告基因(AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2)。相同的单倍型SRK与SCR之间能够相互作用,不同的单倍型之间不会发生相互作用;酵母中报告基因表达的数目和类型的差异反映了class-Ⅱ型内部的SCR-SRK和class-Ⅰ的SCR-SRK互作强度,Ⅰ型高于Ⅱ型;THL与SRK之间存在较高的互作强度。这为Ⅰ型和Ⅱ型不同的自交不亲和性表型所依赖的3个起始信号传导元件之间的识别程度差异提供了直接证据和新内容。

MIF活性区域相互作用蛋白的筛选

目的:筛选与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)催化巯基蛋白质氧化还原酶(TPOR)活性域相互结合的蛋白。方法:采用酵母双杂交系统进行筛选。首先构建pBTM116-MIF诱饵质粒,转化酵母菌株L40;将表达MIF催化TPOR活性域的L40酵母菌株制备成感受态菌,在人骨肉瘤cDNA文库中筛选。通过组氨酸(HIS3报告基因活性和β半乳糖苷酶实验,初步确定与催化TPOR活性域片段相互作用的蛋白,最终通过免疫共沉淀和免疫荧光技术来确认。结果:分别构建含野生型MIF的pBTM116-MIF和野生型硫氧还蛋白样蛋白2(TXNL2)的pACT2-TXNL2质粒,将其共转染L40酵母菌。HIS3报告基因活性检测和β半乳糖苷酶阳性实验结果提示TXNL2可能是与MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白。将重组质粒pcDNA3.1-Myc-TXNL2转染MCF7细胞,免疫共沉淀实验结果表明MIF抗体能够共沉淀Myc-TXNL2蛋白;免疫荧光结果显示Myc-TXNL2与MIF在细胞质中位置分布相同。结论:TXNL2可能是与MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白。本研究为MIF氧化还原机制的研究提供了新的实验依据。

木犀草素抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征的改善作用

目的:探讨木犀草素调控活性氧(ROS)/硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/NOD样受体相关蛋白3(NLRP3)信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的改善作用。方法:60只SD小鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素(20 mg·kg^(-1))组、邻苯三酚(PG)(75 mg·kg^(-1))组和木犀草素(20 mg·kg^(-1))+PG(75 mg·kg^(-1))组,每组12只。除对照组外,其他组小鼠采用气管滴注脂多糖(LPS)溶液的方法建立ARDS模型,对照组小鼠气管滴注等量生理盐水。称量各组小鼠右肺湿质量和干质量,并计算湿质量/干质量(W/D)比值,检测各组小鼠动脉血氧分压(PaO_(2)),HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,检测各组小鼠吸气阻力(Ri)、每分钟通气量(MV)和呼气峰流速(PEF),检测各组小鼠肺组织中ROS、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)水平及血清白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blotting法检测各组小鼠肺组织中TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠肺泡壁变厚,肺泡塌陷变形,肺间质水肿伴有大量炎性细胞浸润,肺组织有严重病理损伤,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平及TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平升高(P<0.05);MV、PEF、PaO_(2)和肺组织中GSH-Px及CAT水平降低(P<0.05)。与模型组比较,木犀草素组小鼠肺组织病理损伤均有所改善,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平和TXNIP、caspase-1、caspase-4及NLRP3蛋白表达水平均降低(P<0.05),MV、PEF和PaO_(2)及肺组织中GSH-Px和CAT水平均升高(P<0.05);PG组小鼠肺组织病理损伤均加重,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平及TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平均升高(P<0.05),MV、PEF和PaO_(2)及肺组织中GSH-Px和CAT水平均降低(P<0.05)。结论:木犀草素可通过抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路激活,减轻肺部炎症与氧化应激,改善ARDS小鼠肺损伤,修复其肺功能。