TPO、TSP-1和TGF-β_1在特发性血小板减少性紫癜患儿骨髓表达的改变及其意义

目的探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿骨髓血小板生成素(TPO)、血小板反应素1(TSP1)和转化生长因子β1,(TGFβ1)水平变化的意义。方法收集22例ITP患儿及17例相对正常儿童骨髓;ELISA法检测骨髓上清液TPO、TSP1和TGFβ1的含量。结果ITP患儿骨髓TSP1和TGFβ1水平均明显高于对照组(P<0.05);TPO水平稍高于对照组,但差异无显著性(P>0.05)。结论检测ITP患儿的TPO、TSP1和TGFβ1表达水平对研究ITP的发病机制有重要价值。

骨髓TPO与TGF-β1、TGF-βRⅢ的改变及其相关性在儿童ITP发病中的意义

目的 探讨骨髓内环境中的血小板生成素 (TPO)、转化生长因子 β1 (TGF -β1 )及巨核细胞中转化生长因子 β1 的Ⅲ型受体 (TGF -βRⅢ )在儿童特发性血小板减少性紫癜 (ITP)发病中的意义。方法 收集 2 8例急性ITP(AITP)患儿、16例慢性ITP(CITP)患儿和 2 0例相对正常儿童的骨髓 ;用Percoll密度梯度及免疫磁珠法分离骨髓巨核细胞 ;采用双抗体夹心ABC -ELISA法检测TPO、TGF -β1 水平 ;采用原位杂交法检测TGF -βRⅢ的表达情况。结果 ①AITP组与CITP组骨髓TPO的水平均高于对照组 ,且CITP组明显高于AITP组 (P <0 .0 5 ) ,但三组之间无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;②AITP组与CITP组骨髓TGF -β1 的水平及巨核细胞TGF -βRⅢ的表达均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且CITP组明显高于AITP组 (P <0 .0 5 ) ,三组之间有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;③除CITP组骨髓TPO与TGF -β1 的水平呈正相关关系外 (r =0 .65 3 ,P <0 0 5 ) ,其余两组均无明显相关性 (P >0 .0 5 )。结论 检测ITP患儿骨髓TPO、TGF -β1的水平及巨核细胞TGF -βRⅢ的表达情况对于研究ITP的发病机制以及早期分型和判断预后有重要参考价值。

特发性血小板减少性紫癜患者血清TPO水平变化及生血灵的干预作用

目的探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血清TPO水平变化及中药复方生血灵的干预作用。方法检测34例ITP患者血清TPO水平,并以20例健康体检者为对照;对ITP患者予生血灵治疗,观察治疗前后血清TPO水平、外周血小板、骨髓巨核细胞的变化情况。结果患者组血清TPO水平与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。患者组治疗后,血清TPO水平、PLT、骨髓巨核细胞计数均明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论特发性血小板减少性紫癜患者血清TPO水平无异常变化;生血灵复方具有促进特异性造血调控因子TPO分泌,促进巨核细胞增殖、分化和血小板产生的作用。

紫癜康颗粒对免疫性血小板减少性紫癜模型小鼠外周血小板、TPO的影响

目的:通过观察免疫性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠外周血小板计数、血小板生成素(thrombopoietin,TPO)含量的变化及紫癜康颗粒对其干预作用,探讨外周血小板计数、TPO含量变化与ITP发病之间的内在关系。方法:BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,中药对照组,西药对照组,紫殿康高、中、低剂量组,共7组,每组12只,采用腹腔注射豚鼠抗BALB/c小鼠血小板血清(APS)的方法造模,观察14 d,采用全自动血细胞分析仪检测外周血小板计数;酶联免疫方法检测ITP模型小鼠外周血TPO含量。结果:ITP时小鼠外周血小板计数、TPO含量明显降低,与对照组比较有统计学意义(P<0.05);紫癜康颗粒可以明显提高血小板计数和TPO的含量,而中剂量组疗效最佳。结论:ITP小鼠存在外周血小板数量的减少;调节巨核细胞的正性作用因子TPO参与了ITP的发病过程并发挥重要作用;紫癜康颗粒可明显提高外周血小板数量和TPO的含量,使ITP得以改善。

CD226在TPO诱导胎肝Lin-细胞增殖分化过程中的表达

目的研究CD226在造血干/祖细胞上的表达分布。TPO诱导胎肝造血干/祖细胞增殖分化过程中，CD226表达的变化及可能的信号调控途径。方法采用鸡尾酒单抗阴性分离富集Lin－造血干/祖细胞，培养于含TPO的无血清培养体系中，用PD98059阻断MAPK信号转导途径，流式细胞仪双荧光分析CD226、CD34、CD41a和CD61的表达。结果CD226在Lin－CD34＋细胞和Lin－CD34－细胞上均有表达。TPO可诱导Lin－CD41a－CD226－细胞先分化为CD41a＋CD226－细胞，再进一步分化为CD41a＋CD226＋细胞，TPO也可诱导Lin－CD226＋细胞表达CD41a和CD61。在培养的早期，PD98059可抑制CD34＋CD226＋细胞的减少，在晚期则可抑制CD41a＋CD226＋细胞的增多。结论CD226与造血干/祖细胞和巨核细胞的增殖分化可能具有密切的关系。

骨髓基质细胞条件培养液联合TPO体外扩增巨核系细胞

目的:探讨骨髓成纤维细胞条件培养液(F-CM)和骨髓内皮细胞条件培养液(E-CM)分别联用TPO对巨核系细胞的体外扩增作用。方法:分别收集纯的F-CM和E-CM,观察它们分别与TPO联用后对体外扩增成熟巨核细胞和巨核系祖细胞的作用。结果:F-CM或E-CM与TPO联用后对巨核系成熟细胞的扩增作用明显优于F-CM或E-CM单用(P<0.01或P<0.05);F-CM+TPO的扩增效果明显优于E-CM+TPO或SCF+TPO+IL-3+IL-6的扩增效果(P<0.01或P<0.05);F-CM或E-CM联合TPO后对祖细胞的扩增作用无明显改变(P>0.05)。结论:F-CM与TPO联用后可显著提高它们对成熟巨核细胞体外扩增的效率,其作用优于SCF+TPO+IL-3+IL-6;F-CM或E-CM与TPO联用后对巨核系祖细胞体外扩增作用与二者单用无显著差异。

rhTPO的分子克隆表达及活性测定

目的；分子克隆并表达具有生物学活性的人血小板生成素（rhTPO）。方法：采用PCR、序列测定、原核表达及亲和层析法。结果：以人全长的TPOCDNA为模板[1]，用PCR法获得了编码195个氨基酸残基的hTPO195cDNA并克隆至原核表达质粒pMal－p2中，以麦芽糖融合蛋白（MBP）方式进行了表达。经Amylose树脂系和层析纯化获得了较高纯度的rhTPO195融合蛋白。生物学活性测定结果显示，其促进体外培养的巨核细胞集落形成与日本麒麟（Kirin）公司产品类似。结论；获得了具有天然生物学活性rhTPO，并在原核细胞中获得表达。

TPO对MO7e细胞的作用探究

目的了解Thrombopoietin(TPO)对人原巨核细胞白血病细胞株MO7e细胞的影响,间接了解TPO使用剂量和时机与血小板动力学的关系。方法MTT法测定MO7e细胞的计数,得出TPO浓度—MO7e细胞增值曲线,倒置显微镜下观察MO7e细胞的计数和形态。结果TPO可提高MO7e细胞增值,当TPO浓度为256ng/ml时细胞计数达到最高,加入TPO48h后MO7e细胞计数达到最高。结论TPO可促进MO7e细胞增值,TPO最佳的用药剂量和用药时机是256ng/ml和48h。

分离与克隆中国人TPO基因片段及序列分析

应用ＲＴＰＣＲ技术从中国人胎肝细胞中分离出１个５６６ｂｐ大小的基因片段，经过克隆、限制性内切酶鉴定和序列分析证实为ＴＰＯ的ｃＤＮＡ片段．与ＧｅｎＢａｎｋ中发表的人ＴＰＯｍＲＮＡ的序列比较同源性在８２％～９９％之间，仅有２个碱基不相同，在１７５位密码子（５２３～５２５位的碱基）分别是ＣＧＧ和ＣＡＡ，即精氨酸（Ｒ）的位置上，中国人是谷胺酰氨（Ｇ）．而与测得的韩国人序列比较。

肝硬化患者血清TPO水平与APN和HA水平相关性探讨

目的:探讨肝硬化患者血清血小板生成素(TPO)水平与脂联素(APN)和HA的相关性。方法:应用放射免疫分析和酶联法对63例肝硬化患者进行血清TPO、APN和HA检测,并与35名正常健康人作比较。结果:肝硬化患者血清TPO、APN水平均非常显著地低于正常人组(P<0.01),而HA水平则显著地高于正常人组(P<0.01),血清TPO水平与APN水平呈正相关(r=0.6284,P<0.01),与HA水平呈负相关(r=-0.4982,P<0.01)。结论:肝硬化患者血清TPO、APN和HA水平与疾病的发生、发展密切相关,有重要的临床价值。

TPO和FL有效扩增脐血CD34+细胞为巨核前体细胞

目的探讨人脐血CD34+细胞在TPO和FL细胞因子组合作用下体外扩增为巨核前体细胞的效果,为开展血小板减少症的细胞治疗建立实验条件。方法本研究采用人脐血经免疫磁珠法纯化分离的CD34+细胞,研究TPO+FL细胞因子组合对体外巨核前体细胞的扩增效果。结果显示在TPO与FL组合的作用下,脐血CD34+细胞(n=6)显著地扩增为巨核前体细胞(CD61+CD41+细胞),作用14天为较理想时间。无论是全细胞数和CD34+细胞,或是CD61+CD41+细胞和CFUMK,经过体外扩增,均显著增加。结论研究表明脐血CD34+细胞在TPO和FL细胞因子组合作用下可有效地扩增为巨核前体细胞,第14天是培养较理想时间。

肿瘤化疗相关性血小板减少症(CIT)药物治疗新进展

化疗相关性血小板减少症(Chemotherapy-induced thrombocytopenia,CIT)是肿瘤患者化疗的常见不良反应,其不仅导致患者外周血血小板减少,增加患者出现自发性出血的风险,而且延长化疗周期从而降低化疗治疗效果,不利于肿瘤患者实现长期生存目标。每年均有不少中西医学者对CIT的药物治疗进行大量临床研究,在预防性使用、西药联用、中西药联用及患者实际获益对比等方面涌现大量临床数据,本文重点对2019年以来的CIT治疗中西医药物最新临床研究进展进行综述,以期为临床医师选用CIT治疗药物提供参考。

促血小板生成素途径在人脐血源基质细胞促进巨核细胞增殖中的作用

目的探讨促血小板生成素(TPO)途径在人脐血源基质细胞(hUCBDSCs)促进巨核细胞增殖中的作用。方法以巨核细胞系(HEL细胞)作为研究对象,实验分HEL/hUCBDSCs组、HEL/人骨髓基质细胞(hBMSCs)组和HEL悬浮培养组。ELISA法检测hUCBDSCs和hBMSCs培养上清中TPO水平,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测HEL细胞c-Mpl蛋白表达,RT-PCR检测c-Mpl mRNA表达。结果hUCBDSCs高分泌表达TPO,其分泌高峰在培养第8天,稍迟于hBMSCs;与hUCBDSCs共培养的HEL细胞经流式细胞仪和激光共聚焦检测,均显示其c-Mpl蛋白的表达明显增强(P<0.05),但RT-PCR检测结果显示不同培养条件下HEL细胞c-MplmRNA表达无显著性差异(P>0.05)。结论TPO途径可能是hUCBDSCs促进巨核细胞增殖的重要中间环节,部分机制可能是在翻译或翻译后修饰水平,通过上调TPO受体c-Mpl的表达来实现的。

血小板生成素和白细胞介素-11对慢性特发性血小板减少性紫癜巨核细胞的影响

目的 探讨重组人血小板生成素 (rh TPO)及联用重组人白细胞介素 - 11(rh IL - 11)对慢性特发性血小板减少性紫瘢 (CITP)患者骨髓巨核祖细胞增殖和成熟的影响。方法 采用血浆凝块法对 2 1例 CITP患者骨髓巨核祖细胞进行体外培养 ,培养体系中加入不同浓度的 rh TPO,或同时加 rh IL - 11两者联用。培养 14天后经 SZ-2 1(GP a)单抗和 ABC试剂盒染色观察集落生长数 ,用 MCDS- 2 0 10型超清晰度骨髓细胞分析系统进行巨核细胞的面积和直径测定。结果 CITP组骨髓巨核细胞面积及直径明显低于对照组 (P<0 .0 5 )。 rh TPO对 CITP患者的巨核细胞集落形成单位 (CFU - MK)总集落数、巨核细胞直径与面积均有促进作用 ,但无浓度依赖性。体外最适浓度为 10 ng/ ml;rh TPO与 rh IL - 11联用组较单用组的 CFU - MK、总集落数及面积、直径均显著增加。结论 CITP患者骨髓巨核细胞存在成熟障碍 ,体外 rh TPO单用及与 rh IL - 11联用均可促进 CITP患者巨核祖细胞的增殖与成熟 。

血小板生成素与急性放射病

巨核系造血功能障碍是导致急性放射病患者出血致死亡的主要原因之一。血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是巨核系造血的主要刺激因子,可促进照射后巨核系造血功能恢复,升高外周血小板数。在照射后早期应用TPO对急性放射病出血并发症的防治起到关键的作用。研究表明,TPO可能具有更强促进造血恢复的作用,本文就TPO治疗急性放射病的研究进展进行综述。

血小板生成素诱导胎肝CD34^+造血干/祖细胞增殖分化与周期蛋白表达的关系

为了解胚胎时期巨核细胞增殖分化特有的内在机制 ,本研究观察了在体外培养体系中 ,胎肝源CD3 4 +造血干 /祖细胞在血小板生成素 (thrombopoietin ,TPO)作用下增殖分化特征与相关周期蛋白B1、D1和D3表达及细胞内水平变化的关系。结果发现 :( 1)经 12d培养后 ,TPO使胎肝源CD3 4 +细胞数从 1× 0 5个细胞 /ml增加到 13 12± 4 0 6× 10 5个细胞 /ml,CD4 1+细胞增加到了 95 % ,CD3 4 +细胞下降到了 3 % ,大部分细胞的DNA倍性为 2N ,少数为 4N ,无大于 4N巨核细胞 ,TPO对MegaCultTm C胶原半固体培养体系中胎肝源CD3 4 +细胞形成CFU Mk集落产率的影响呈明显的剂量效应关系 ;( 2 )在整个培养期间 ,周期蛋白B1表达逐渐增加 ,并保持在一个高水平上 ,培养后期 ,高水平的周期蛋白B1出现在G1期细胞上 ;( 3 )周期蛋白D1和D3表达先增加 ,培养后期细胞内水平下降 ,且以G2期细胞为主。该结果提示 :( 1)TPO通过上调周期蛋白B1和在所有细胞周期时限上调周期蛋白D1和D3表达 ,促进巨核细胞祖细胞的增殖分化 ;( 2 )周期蛋白B1在G2 +M期的持续高水平和周期蛋白D1和D3在G2 +M期的水平下降 ,可能导致胎肝源巨核细胞核内有丝分裂延迟或阻滞。

重组人血小板生成素治疗原发免疫性血小板减少症的临床观察

目的观察重组人血小板生成素(rhTPO)治疗原发免疫性血小板减少症(ITP)的临床疗效及不良反应,并观察骨髓巨核细胞数与疗效的关系。方法 18例慢性难治性ITP患者皮下注射rhTPO 300 u/kg.d-1,疗程14 d或血小板>100×109/L后停药,动态观察患者血常规,定期监测肝、肾功能及凝血功能,并分析治疗有效患者骨髓巨核细胞数与血小板上升数值之间的相关性。结果 18例患者rhTPO治疗后,完全反应(CR)7例,有效(R)8例,无效(NR)3例。用药前血小板平均值为10±5.4×109/L,治疗后血小板计数平均最高值为116.4±82×109/L,与用药前比较差异有统计学意义(t=4.82,P<0.01)。多数患者对药物耐受良好。rhTPO治疗有效患者骨髓巨核细胞数与血小板上升数值呈正相关(r=0.582,P=0.003)。结论 rhTPO治疗慢性难治性ITP具有良好的疗效,不良反应轻微,骨髓巨核细胞数越多的患者疗效越显著。

脐血巨核祖细胞的体外扩增

目的联合血小板生成素(TPO)、白细胞介素-11(IL-11)和肝素用脐血CD34+细胞定向扩增巨核祖细胞。方法采用免疫磁珠法(M ACS)分选CD34+细胞,用TPO、IL-11和肝素定向扩增巨核祖细胞,巨核祖细胞集落分析(CFU-M K)测定巨核祖细胞扩增倍数,流式细胞术检测巨核祖细胞分化过程中不同细胞组群(CD34+、CD41a+、CD61+、CD34+CD41a+和CD41a+CD61+)的变化,免疫组织化学染色(CD41a)和透射电镜观察巨核细胞形态及超微结构,血小板体外活化实验及非肥胖性糖尿病/严重联合免疫缺陷鼠异种体内移植实验评价扩增的巨核祖细胞功能。结果单用TPO7d时,CD34+CD41a+细胞扩增(4.0±1.7)倍;与IL-11联用后扩增到(10.5±4.8)倍;再加入肝素后扩增达(29.9±6.4)倍,TPO+IL-11+肝素组扩增倍数为TPO组、TPO+IL-11组的7.5、2.85倍,与两组相比差异均有显著性(P<0.05)。TPO+IL-11+肝素组巨核祖细胞中大集落(>50个细胞/集落)达(106.8±26.9)倍,较TPO、TPO+IL-11组均有明显增加(P<0.05)。将扩增第7天的巨核细胞静脉输注于经放射预处理的非肥胖性糖尿病/严重联合免疫缺陷鼠,可明显加速其血小板及白细胞的恢复并提高小鼠生存率。电镜显示扩增的巨核细胞有一定的界膜发育等成熟特征,体外血小板活化实验证实,扩增的巨核细胞在体外可产生血小板。

血小板生成素对巨核细胞的增殖及保护作用体外研究

目的:观察巨核细胞中加入血小板生成素(thrombopoietin,TPO)之前和加入之后卡铂对其影响的变化,以及TPO对巨核细胞的促增殖作用,从而了解TPO对MO7e细胞的增殖及保护作用。方法:MTT法测定不同浓度的TPO对巨核细胞株MO7e作用24h、48h、72h的影响,作出增殖曲线。测定不同浓度卡铂对加入TPO前、后的MO7e细胞作用24h、48h的抑制率,求出半数抑制浓度(IC50),比较两者的抑制率和IC50。结果:MO7e细胞增殖率随TPO浓度增大而增大,TPO浓度为256ng/ml时,进入平台期。加入TPO后,卡铂对MO7e细胞的抑制率明显降低,IC50约为加入TPO前的2倍。结论:TPO可以促进巨核细胞增殖,该作用呈剂量依赖性,同时可减弱巨核细胞被化疗药物抑制,说明对巨核细胞有保护作用。

急性创伤病人血小板生成素水平改变及其对成纤维细胞体外生长的影响

目的观察急性创伤病人血清血小板生成素(TPO)水平的变化,及其对体外成纤维细胞生长的影响。方法在急性创伤(按意外和手术分组)12 h后随机采集26例病人的血液样本,用阻抗法测定外周血成分变化和酶联免疫吸附法(ELISA)测定其血清中的TPO含量改变。另随机选择26例健康体检个体作正常对照。同时,观察不同浓度的TPO对骨髓成纤维细胞集落(CFU-F)生长的影响。结果外周血中血液成分(包括WBC、RBC、HB、HCT和PLT)在创伤后组间比较差异无显著性(P>0.05),观察组与对照组比较差异也无统计学意义(P>0.05);急性创伤病人血清样本中TPO水平均比对照组升高(P<0.01),而创伤的类别间则差异没有显著性(P>0.05)。体外实验进一步证明,TPO能显著地促进成纤维细胞生长,并呈剂量依赖性,最大的有效浓度为50 ng/mL。结论造血生长因子TPO在急性创伤时病人的血清中存在显著的升高,而且升高与血小板数目没有明显的相关;同时,体外研究证实,TPO有促成纤维细胞生长作用。提示创伤后的TPO有机体应激反应性升高,并可能参与创伤的修复与愈合。