TSLP、HIF-1α、RANKL在义齿修复后种植体周围炎患者龈沟液中的表达及意义

目的研究胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)在义齿修复后种植体周围炎(PI)患者龈沟液中的表达及意义。方法回顾性选取2019年8月至2023年8月大同市第五人民医院收治的义齿修复患者86例作为研究对象,根据术后3个月是否发生PI将患者分为预后良好组(n=61)和预后不良组(n=25)。比较两组患者的临床资料及术前龈沟液TSLP、HIF-1α及RANKL水平,采用多因素Logistic回归分析对龈沟液TSLP、HIF-1α及RANKL水平与义齿修复患者术后发生PI的关系进行分析,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析TSLP、HIF-1α及RANKL水平对义齿修复患者的预后评估价值。结果两组患者临床资料(性别、年龄、病程、义齿种植原因及种植颗数)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。预后良好组患者的龈沟液中TSLP、HIF-1α、RANKL水平分别为(122.57±11.30)ng/L、(417.79±115.43)ng/mL、(116.02±13.45)pg/μL,均明显低于预后不良组[(138.93±12.70)ng/L、(576.55±177.60)ng/mL、(133.24±15.69)pg/μL],差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析义齿修复患者预后,结果显示龈沟液中TSLP水平升高、HIF-1α水平升高和RANKL水平升高是义齿修复患者术后发生PI的独立危险因素(OR=1.119,95%CI:1.048~1.195;OR=1.007,95%CI:1.002~1.013;OR=1.065,95%CI:1.016~1.117;P<0.05)。ROC曲线分析龈沟液中TSLP、HIF-1α、RANKL水平预测义齿修复患者预后的价值,结果显示曲线下面积(AUC)值分别为0.833、0.786和0.809。其中,RANKL具有最高的特异度(0.852),而HIF-1α具有最高的敏感度(0.800),具有较好的预测价值(P<0.05)。结论龈沟液中TSLP、HIF-1α、RANKL水平升高是义齿修复患者术后并发PI的独立危险因素,且均具有较高的预测义齿修复患者预后的价值。

哮喘小鼠TSLP及其受体表达和布地奈德干预的影响

目的观察哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)及其受体(TSLPR)的表达和布地奈德(BUD)干预对其表达的影响。方法30只雌性昆明小鼠随机分成哮喘组、BUD干预组及正常对照组,每组10只。用卵清蛋白(OVA)进行致敏和激发,建立哮喘模型,同时进行BUD干预。酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清TSLP的水平及肺组织和脾脏中TSLP和TSLPR的表达。结果哮喘组小鼠外周血TSLP的水平较正常对照组明显上升,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);而BUD干预组小鼠外周血TSLP的水平较哮喘组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);BUD干预组虽高于正常对照组,但差别无统计学意义(P>0.05)。各组小鼠肺组织及脾脏TSLP和TSLPR的组间比较结果均与血清TSLP组间比较结果相似。结论哮喘小鼠血清TSLP的表达及肺组织和脾脏内TSLP和TSLPR的表达均增高。TSLP可能在哮喘中起着重要作用,BUD可明显抑制哮喘小鼠TSLP和TSLPR的表达,TSLP或TSLPR可能成为治疗哮喘的潜在靶点。

Ag85B调节小鼠髓样树突状细胞的成熟和TSLP介导下TSLPR和OX40L的表达

目的：研究抗原85B（Ag85B）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CSF和IL-4体外诱生C57BL/6小鼠未成熟的m DCs,并运用免疫磁珠分离的方法纯化,采用光镜和扫描电镜、流式细胞术进行形态学观察和细胞表型鉴定;分别用0、50、100、200μg/L不同浓度的Ag85B或TSLP作用于纯化并鉴定后的m DCs,培养24 h,流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD86、TSLPR和OX40L的表达,选取最佳的Ag85B或TSLP处理浓度。随后将m DCs随机分为空白对照组、Ag85B处理组、TSLP处理组和Ag85B＋TSLP处理组,培养24 h后检测m DCs的促炎表面分子TSLPR和OX40L的表达。结果：体外诱导培养7 d,倒置相差显微镜下可见细胞表面呈现不规则树突样突起,扫描电镜下见细胞类圆形,表面有少量皱褶和较少分叉的树突状突起,符合未成熟m DCs的形态学特点;纯化后的m DCs表达表面分子CD11c的细胞较表达共刺激分子CD80和CD86的细胞多,符合未成熟m DCs的表型特征。与空白对照组比较,50~200μg/L的Ag85B处理组m DCs表达CD80和CD86的细胞比率显著增高（P〈0.05）,表达TSLPR和OX40L的细胞比率无显著差异。与空白对照组相比较,50、100和200μg/L浓度的TSLP处理组的m DCs表达CD80和CD86的细胞比率均显著增加（P〈0.05）;与空白对照组和50μg/L TSLP处理组相比较,100μg/L和200μg/L TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率均显著升高（P〈0.05）。选取200μg/L作为Ag85B和TSLP的优化作用浓度,结果发现Ag85B处理组和Ag85B＋TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率较TSLP处理组均显著降低（P〈0.05）,与空白对照组比较差异不显著。结论：Ag85B可通过上调m DCs表达共刺激分子CD80和CD86促进其成熟,同时下调TSLP介导的m DCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L,推测Ag85B可能通过TSLP介导的m DCs途径抑制气道炎症。

结节性痒疹皮损中胸腺基质淋巴生成素及其受体表达的研究

目的探讨结节性痒疹(Prurigo nodularis,PN)皮损中胸腺基质淋巴生成素(TSLP)及其受体的表达情况。方法留取PN患者皮损处、皮损周围及正常皮肤标本,通过实时荧光定量PCR和免疫组化染色方法,分别从转录水平和蛋白水平比较各组之间TSLP、TSLP异源受体双链胸腺基质淋巴生成素受体(TSLPR)和白细胞介素-7受体α(IL-7RA)的表达差异。结果PN皮损与皮损周围相比,皮损部位TSLP、TSLPR和IL-7RA的相对表达量均略高于皮损周围,但是二者之间的差异均无统计学意义(t=0.667,P=0.519;t=0.945,P=0.367;t=0.151,P=0.883)。PN皮损部位与正常皮肤相比,TSLP表达差异无统计学意义(t=0.810,P=0.429),TSLPR和IL-7RA表达则显著高于正常皮肤(t=3.57,P=0.0051;t=2.552,P=0.0287)。PN皮损周围和正常皮肤相比,TSLP表达差异无统计学意义(t=0.448,P=0.659),TSLPR和IL-7RA表达高于正常皮肤,但是差异无统计学意义(t=1.659,P=0.128;t=1.732,P=0.114)。免疫组化染色结果显示PN皮损表皮全层TSLP呈阳性反应,真皮内部分炎症细胞及真皮神经纤维TSLPR呈阳性反应,IL-7RA广泛表达于表皮全层和真皮内炎症细胞。结论TSLP的2个异源受体亚单位TSLPR和IL-7RA在PN患者皮损处表达显著升高,提示TSLP-TSLPR通路可能参与PN瘙痒的发生。

胸腺基质淋巴细胞生成素与变态反应性疾病的关系

胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是由上皮细胞衍生的一类白介素7样细胞因子,于1994年由Friend等学者首次发现并报道。此后越来越多的研究表明,其广泛出现在变态反应性疾病中,在变态反应性疾病的发病机制中扮演重要角色。文章对近年来TSLP及其与变态反应性疾病密切相关性的研究进展作一综述。

Ag85B慢病毒抑制人支气管上皮细胞TSLP及其受体的表达

目的:研究结核分枝杆菌抗原85B(Ag85B)慢病毒对正常人支气管上皮细胞(NHBEC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受体TSLPR的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的机制。方法:将Ag85B基因重组质粒转入293T细胞,构建携带Ag85B和EGFP报告基因的慢病毒载体p LVXIRES-Neo-EGFP-Ag85B(Ag85B慢病毒)。用鉴定后的Ag85B慢病毒感染HEK293细胞,计算滴度并观察感染效率。利用Lipofectamine? 2000使Ag85B慢病毒感染体外培养NHBEC,设立空病毒感染和空白对照组。Real-time PCR和Western blotting检测Ag85B、TSLP和TSLPR mRNA和蛋白表达水平。结果:成功构建Ag85B慢病毒感染NHBEC体系,Ag85B慢病毒感染NHBEC 48 h后,荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,细胞生长状态良好,病毒滴度为2×1011TU/L,感染效率达到90%以上。Real-time PCR和Western blotting结果显示Ag85B慢病毒成功感染NHBEC,可见相应Ag85B mRNA和蛋白表达。与空病毒感染和空白对照组比较,Ag85B慢病毒感染组TSLP mRNA表达有下降趋势,TSLPR mRNA与TSLP和TSLPR的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:Ag85B慢病毒感染NHBEC可以抑制NHBEC的TSLP和TSLPR的表达,提示Ag85B可能通过靶向阻滞TSLP-TSLPR途径抑制哮喘气道炎症。

运动调控TSLP对高脂饮食下葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的作用及机制

目的观察运动对高脂饮食下葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的影响以及胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)在结肠炎中的作用及机制。方法小鼠随机分为静止(SED)对照组、SED+DSS组、SED+GW9662+DSS组、SED+吡格列酮+DSS组、运动(EXE)对照组、EXE+DSS组、EXE+GW9662+DSS组、EXE+吡格列酮+DSS组,每组10只。采用疾病活动指数和结肠组织病理学评估炎症程度,ELISA法检测血清炎症指标及TSLP表达情况,实时PCR法检测结肠组织中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)mRNA表达情况。结果各运动组小鼠疾病活动指数和结肠组织病理学评分均高于对应的静止组。各运动组血清白细胞介素(IL)-6表达水平均高于对应的静止组(P<0.05)。各运动组血清IL-1β表达水平均高于对应的静止组,其中SED+GW9662+DSS组与EXE+GW9662+DSS组比较有统计学差异(P<0.05)。除对照组外,各运动组血清TSLP表达水平均低于对应的静止组(P<0.05)。以各静止组为对照,对应的运动组PPAR-γmRNA相对表达水平均升高(P<0.05)。结论TSLP在溃疡性结肠炎中起保护作用,运动通过上调PPAR-γ下调TSLP来加重溃疡性结肠炎的发生。

胸腺基质淋巴细胞生成素、Toll样受体2和免疫球蛋白E对小儿银屑病湿疹病变的预测价值

目的 探讨血清胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、Toll样受体2(TLR2)和免疫球蛋白E(IgE)对小儿银屑病湿疹病变的预测价值。方法 选取275例血热证寻常型银屑病患儿为研究对象,根据是否出现湿疹病变分为实验组125例和对照组150例。比较2组患儿的临床资料和TSLP、TLR2、IgE表达水平,采用Pearson相关分析法分析实验组患儿TSLP、TLR2、IgE的相关性,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析TSLP、TLR2、IgE对小儿银屑病湿疹病变的诊断价值。结果 2组患儿年龄、性别、银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组患儿瘙痒发生率为96.00%(120/125),高于对照组的76.67%(115/150),差异有统计学意义(P<0.05)。实验组血清TSLP、TLR2表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05), 2组患儿IgE表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。TSLP与TLR2呈显著正相关(r=0.853,P<0.001), TLR2与IgE呈显著正相关(r=0.670,P<0.001), TSLP与IgE呈显著正相关(r=0.677,P<0.001)。ROC曲线显示,TSLP、TLR2和IgE预测小儿银屑病湿疹病变的曲线下面积分别为0.718、0.752和0.565。结论 小儿银屑病湿疹病变患者血清TSLP、TLR2、IgE水平呈两两正相关,且其TSLP、TLR2表达水平显著高于无湿疹病变患者。TSLP、TLR2均可预测小儿银屑病患者湿疹病变,且TLR2的预测效果更佳。

甾体衍生物02F04通过非核受体上调PAM212细胞胸腺基质淋巴细胞生成素的研究

目的:探索02F04诱导TSLP表达是否通过核受体介导。方法:一系列浓度的6种核受体,包括视黄酸受体(RAR)、维甲酸X受体(RXR)、过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)、维生素D受体(VDR)、糖皮质激素受体(GR)和肝X受体(LXR)的激动剂和抑制剂,单用或者与10 μmol/L 02F04联合刺激PAM212细胞24 h后,ELISA法测定培养上清中TSLP的蛋白水平,MTT法检测PAM212细胞的存活率。10 μmol/L 02F04刺激PAM212细胞4、8、12或24 h,实时荧光定量PCR 反应测定细胞中相应核受体靶向基因的表达。结果: VDR激动剂不能增加PAM212细胞中TSLP的表达。02F04不能诱导RAR、RXR和PPAR靶向基因的表达,且RARα、PPARγ和PPARδ的激动剂及抑制剂单用或与02F04合用后均不影响TSLP的产生;RARγ、RXR和GR激动剂可抑制细胞基本水平及02F04诱导水平的TSLP产生,而抑制剂未呈现出相反的结果。02F04可激活LXR并增加靶向基因ABCA1的表达,但LXR激动剂不能诱导TSLP产生,LXR抑制剂也不能抑制02F04诱导的TSLP表达。结论: 02F04具有甾体结构,但诱导TSLP的产生不能通过核受体作用而介导。

胸腺基质淋巴生成素受体及其抗体在哮喘小鼠气道炎症反应中的作用

目的探讨胸腺基质淋巴生成素受体（TSLPR）及其抗体在实验性哮喘小鼠气道炎症反应中的作用以及对气道树突状细胞（DCs）成熟和活化的影响。方法BALB／c小鼠随机分成A、B、C三组。B和C组小鼠腹腔注射卵清白蛋白（OVA）致敏，A组腹腔注射PBS作为正常对照。B和C组小鼠在OVA激发哮喘发作前分别吸入非特异性IgG和TSLPRIgG。采集各组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞分类计数，采用ELISA定量检测BALF中IL4、IL-5、IFN-γ和IL-10浓度。采集各组小鼠肺组织标本进行病理学检查，采用流式细胞术分别检测各组小鼠淋巴结和肺组织中DCs数量和表型。结果与A组小鼠比较，B和C组小鼠BALF中各种细胞因子水平均明显升高（P〈0．01）。C组小鼠BALF中IL4和IL-5水平低于B组（P〈0．05，P〈0．01），IFN-γ和IL-10水平高于B组（P〈0．05，P〈0．01）。C组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数也明显低于B组（P〈0．01）。B组小鼠支气管周围有大量炎性细胞浸润以及杯状细胞增生，黏液分泌增强，C组小鼠仅见微弱的炎性细胞浸润和杯状细胞增生。B组小鼠膈淋巴结中DCs数量以及肺组织中DCs的I-Ad、CD40、CD80和CD86表达水平均高于C组小鼠（P〈0．05）。结论TSLP／TSLPR具有促哮喘效应并与其调节气道DCs活性的作用密切相关，TSLPR抗体干预可明显减弱TSLP／TSLPR上述作用，故有作为抗哮喘药物的前景。

孟鲁司特对哮喘小鼠气道炎症及白细胞介素-13和-5的影响

目的探讨白三烯受体拮抗剂孟鲁司特通过核转录因子(nuclear transcription factor, NF)-κB-胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin, TSLP)通路对哮喘小鼠气道炎症及对白细胞介素(interleukin, IL)-13、-5的影响。方法 40只4周龄BALB/c雌性小鼠,随机分成正常对照组、模型组和低、中、高剂量组各8只。模型组和低、中、高剂量组采用卵清蛋白+氢氧化铝致敏法诱导哮喘模型。第22天始高、中、低剂量组每次雾化致敏前24 h给予孟鲁司特10、5、2.5mg/kg干预,连续灌喂7d;对照组和模型组于同时间点开始连续7 d给予等量生理盐水。于末次给药后24h取各组肺泡灌洗液进行白细胞分类并计数;采用ELISA法检测各组肺泡灌洗液中IL-13、-5及TSLP水平;取左侧肺组织进行HE、PAS、Masson染色常规病理组织学检查;采用Western blot法检测肺组织细胞质NF-κB p65、IκB及细胞核NF-κB p65的表达水平。结果模型组肺泡灌洗液淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞计数、IL-5、IL-13和TSLP水平高于对照组和低、中、高剂量组(P<0.01),低、中、高剂量组淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞计数和TSLP水平均依次降低(P<0.05);模型组肺组织细胞质NF-κB p65(0.64±0.05)、IκB (0.51±0.04)蛋白表达水平明显低于对照组(1.42±0.09、1.32±0.08)和低剂量组(0.71±0.11、0.62±0.09)、中剂量组(0.81±0.07、0.86±0.12)和高剂量组(0.83±0.09、0.89±0.08)(P<0.05),低、中、高剂量组低于对照组(P<0.05),低剂量组低于中、高剂量组(P<0.05);模型组肺组织细胞核NF-κB p65蛋白(1.32±0.12)表达水平明显高于对照组(0.32±0.03)、中剂量组(0.83±0.11)和高剂量组(0.79±0.08)(P<0.05),低剂量组(1.41±0.13)高于中、高剂量组(P<0.05),低、中、高剂量组高于对照组(P<0.05)。结论孟鲁司特可有效缓解卵清蛋白所致哮喘小鼠的Th2炎性反应,以5mg/kg剂量的效益最好,其作用可能是通过调控NF-κB通路,减少TSLP表达实现的。

固本防哮饮对支气管哮喘缓解期小鼠免疫失衡的影响

目的探讨固本防哮饮治疗支气管哮喘缓解期的可能作用机制。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为正常组、模型组、孟鲁司特钠组、固本防哮饮预防组、固本防哮饮高剂量组及固本防哮饮等效剂量组,每组6只。除正常组外其余各组采用卵蛋白致敏、雾化联合呼吸道合胞病毒滴鼻诱导建立支气管哮喘缓解期小鼠模型。造模后正常组、模型组给予蒸馏水20 ml/kg灌胃,固本防哮饮等效剂量、高剂量组分别给予24、36 g/(kg·d)固本防哮饮灌胃,孟鲁司特钠组给予孟鲁司特钠片2. 6 mg/(kg·d)灌胃,每日1次,共28天。固本防哮饮预防组从致敏第1天给予24 g/(kg·d)的固本防哮饮每日灌胃1次,共83天。比较各组小鼠肺组织病理变化,采用实时定量PCR法检测肺组织中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、胸腺基质淋巴细胞生成素受体(TSLPR)、GATA3 mRNA表达,Western Blotting法检测TSLP、TSLPR、GATA3蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验测定血清TSLP、TSLPR蛋白表达。结果病理学结果显示,正常组小鼠气道上皮平整,支气管管腔光滑,无明显炎性细胞浸润;模型组小鼠气道上皮不完整,肺泡壁增厚,同时气道黏膜层、黏膜下层以及血管周围组织可见大量炎性细胞浸润;固本防哮饮各治疗组和孟鲁司特钠组小鼠肺组织病理炎症均较模型组减轻,且各治疗组病理差异不明显。与正常组比较,模型组小鼠肺组织TSLP、TSLPR、GATA3 mRNA及蛋白表达显著升高(P <0. 05)。与模型组比较,各给药组小鼠肺组织TSLP、TSLPR、GATA3 mRNA及蛋白表达均不同程度降低(P <0. 05)。各组小鼠血清中TSLP、TSLPR蛋白表达差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论固本防哮饮可改善支气管哮喘缓解期的肺组织病理改变,其机制可能是抑制肺组织TSLP、TSLPR、GATA3表达,纠正肺组织Th1/Th2的偏移,从而调控机体的免疫功能。