高效液相色谱法测定跳骨片中士的宁的含量

目的：建立跳骨片中士的宁的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。C18色谱柱（4．6mm×150mm，5μm）；流动相为0．01mol·L^-1醋酸铵-甲醇-三乙胺（81：19：0．5．用冰醋酸调pH值3．8）；检测波长为254nm。结果：士的宁在0．198～1．185μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。r=0．9997．平均回收率为99．24％，RSD为0.87％。结论：该方法简单可行，重现性好，可用于跳骨片的质量控制。

跳骨片抑制大鼠膝骨关节炎Wnt/β-catenin信号转导通路介导炎症反应的机制研究

目的探讨跳骨片对大鼠膝骨关节炎(OA)Wnt/β-catenin信号转导通路介导炎症反应的机制。方法将30只8周龄雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、跳骨片组,每组10只。空白组不予任何处理,模型组、跳骨片组均采用改良Hulth法建立OA动物模型。建模成功后跳骨片组每天予跳骨片0.32 g/kg灌胃,空白组和模型组每天予等量生理盐水灌胃,干预12周后分别取3组大鼠双侧膝关节股骨髁、关节软骨和滑膜,将股骨髁常规固定、脱钙、包埋及切片,对切片分别进行苏木精-伊红(HE)、甲苯胺蓝染色,光镜下观察关节软骨组织形态学变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测滑膜中白细胞介素(IL)-1β、基质金属蛋白酶(MMP)-13、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;蛋白质免疫印迹检测关节软骨β-catenin、Wnt-4蛋白表达。结果模型组滑膜中,IL-1β表达量明显高于空白组和跳骨片组(P<0.01),MMP-13表达量高于空白组和跳骨片组(P<0.05),TNF-α表达量明显高于空白组(P<0.01)、高于跳骨片组(P<0.05);模型组关节软骨中,β-catenin蛋白表达量明显高于空白组和跳骨片组(P<0.01),Wnt-4蛋白表达量高于空白组和跳骨片组(P<0.05)。HE染色显示跳骨片组软骨破坏程度低于模型组,甲苯胺蓝染色显示跳骨片组软骨细胞蛋白多糖含量高于模型组(P<0.01)。结论跳骨片能抑制关节软骨Wnt/β-catenin信号转导通路,降低滑膜中IL-1β、MMP-13、TNF-α表达,抑制炎症反应介导的软骨基质降解,延缓关节软骨退变。

跳骨片水提物对体外大鼠关节软骨细胞活性的影响

目的:探讨跳骨片水提物对体外大鼠关节软骨细胞活性的影响。方法:4周龄SPF级SD大鼠5只,采用机械-Ⅱ型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞,倒置相差显微镜观察软骨细胞的形态结构,Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定软骨细胞。0,25,50,100μg·mL^(-1)跳骨片水提物对第3代软骨细胞,分别干预24,48,72 h后,MTT法检测细胞活性。结果:1Ⅱ型胶原免疫组化染色后软骨细胞胞浆呈棕黄色,为阳性;2以0μg·mL^(-1)跳骨片水提物干预的软骨细胞作为对照组,干预24 h后,50μg·mL^(-1)组软骨细胞活性明显高于对照组(P<0.05);干预48 h后,25,50μg·mL^(-1)组明显高于对照组(P<0.05);干预72 h后,25,50,100μg·mL^(-1)组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:跳骨片水提物在25,50,100μg·mL^(-1)时均可以促进软骨细胞的增殖,具有剂量和时间依赖性,其中50μg·mL^(-1)干预24 h后最为明显。

跳骨片质量控制方法的研究

目的 研究跳骨片质量控制方法 ,为制定跳骨片质量标准打下基础。方法 采用薄层色谱法对本品 4种药物进行定性鉴别 ,采用气相色谱法测定冰片的含量 ,薄层扫描法测定马钱子中士的宁、马钱子碱的含量。结果 4种药物薄层定性条件合适 ,斑点清晰 ,冰片、士的宁、马钱子碱含量测定条件稳定 ,灵敏度高 ,测定结果准确 ,重现性好。

跳骨片质量标准的研究

目的提高跳骨片的质量标准。方法采用TLC法对制剂中的麸炒枳壳和骨碎补进行了定性研究，采用HPLC法测定跳骨片中士的宁的含量。结果在0.1194-1.194μg范围内，士的宁进样量与峰面积响应值呈良好的线性关系，r=0.9999；平均回收率为98.5％，RSD=1.3％。结论本法准确灵敏可有效控制产品质量。

跳骨片不同极性部位对软骨细胞活性的影响研究

目的:研究跳骨片不同极性部位对软骨细胞活性的影响。方法:用跳骨片的水提物、醇提物、多糖以及醇提物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物及残留的水相共8个组分干预体外培养的软骨细胞,采用MTT法检测不同极性部位作用48h后软骨细胞的活性。结果:在一定剂量范围内,跳骨片的水提物、多糖,醇提物的乙酸乙酯萃取部位和水相干预组软骨细胞的活性增强,醇提物以及醇提物的石油醚、氯仿和正丁醇萃取部位干预组软骨细胞的活性降低。结论:跳骨片的水提物、多糖和醇提物的乙酸乙酯萃取及残留的水相部位能够促进软骨细胞的增殖,为跳骨片的有效部位。

跳骨片调控Wnt/β-catenin信号通路延缓骨关节炎关节软骨退变的机制研究

目的:探讨跳骨片调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路保护骨关节炎关节软骨的机制。方法:将30只2月龄雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、跳骨片组,每组10只。采用改良Hulth法建立骨关节炎动物模型。造模成功后跳骨片组给予跳骨片0.32 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,空白对照组和模型对照组给予等量生理盐水灌胃,干预12周后取大鼠关节软骨。Real-time PCR检测关节软骨β-catenin、Frizzled-2、GSK-3β、CKIεmRNA表达,Western blot法检测关节软骨CKIε、CollagenⅡ、PGS1蛋白表达,Massion染色法观察3组关节软骨胶原的表达及形态变化。结果:Real-time PCR结果显示,与空白对照组比较,模型对照组关节软骨β-catenin、Frizzled-2、CKIεmRNA表达明显上升(P <0.05,P> 0.05,P <0.05),而GSK-3βmRNA表达明显下降(P <0.05);与模型对照组比较,跳骨片组关节软骨β-catenin、Frizzled-2、CKIεmRNA表达明显下降(P <0.05,P> 0.05,P <0.05),而GSK-3βmRNA表达明显上升(P <0.05)。Western blot结果显示,与空白对照组比较,模型对照组关节软骨CKIε蛋白表达明显升高(P <0.05),而CollagenⅡ、PGS1蛋白表达明显降低(P <0.05,P <0.01);与模型对照组比较,跳骨片组关节软骨CKI-ε蛋白表达明显降低(P <0.05),CollagenⅡ、PGS1蛋白表达明显升高(P <0.01,P> 0.05)。Massion染色结果显示,空白对照组和跳骨片组关节软骨结构清晰,软骨层染色明显,软骨组织呈淡蓝色,胶原含量较高;模型对照组软骨层结构紊乱,染色较浅,胶原含量低。结论:跳骨片能调控Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎炎症反应,促进细胞外基质的合成,保护关节软骨。

原子荧光光度法测定跳骨片中可溶性砷、汞含量

目的建立测定跳骨片中可溶性砷、汞含量的原子荧光光度法。方法汞测定条件,总灯电流为30 mA,光电倍增管负高压为210 V,原子化器高度为10 mm,载气流量为40 mL/min,屏蔽气流量为1000 mL/min,水浴恒温振荡仪温度为(37±1)℃;砷测定条件,总灯电流为60 mA,光电倍增管负高压为240 V,其余同汞测定条件。结果砷和汞进样量在0~40 ng范围内与荧光强度值线性关系良好,平均回收率分别为98.90%和100.08%,RSD分别为1.43%和3.21%(n=6),精密度试验的RSD均小于1%(n=7)。结论该方法操作简便、结果准确、重复性好,可真实模拟体内环境,准确测定可溶性砷、汞的含量。

跳骨片中马兜铃酸A的HPLC限量检查

目的建立测定跳骨片中马兜铃酸A的高效液相色谱的分析方法。方：法采用RP-HPLC法测定。用NovapakC18色谱柱（250mm×4．6mm，5岬），以已腈一甲醇-1％冰醋酸溶液（28：28：44）为流动相，流速为lmL·min-1，检测波长390rim，柱温为宣温。进样量为5“k结果马兜铃醢A的保留时问约为14．7min，与其他峰的分离度大干1．5。马兜铃酸A的线性范围为0．49869ug·mL-1～3．49083ug·mL-1，y=0．9998，最低检测限为4．128×10_。pg（信噪比为5：1），平均回收率为97．89％（n=5）。结论＂ig7Y：,-k简便快速．灵敏度高，结果准确可靠，可用于跳骨片中马兜铃酸A的含量测定，跳骨片中马兜铃酸A未检出。

HPLC测定跳骨片中士的宁的含量

目的探讨跳骨片中士的宁的含量测定。方法采用HPLC进行测定结果峰面积与浓度线性关系良好,回归方程:Y=2136.6X+8.2881,r=1.0000。平均回收率100.76%,RSD 2.19%。结论方法简便快速,重现性好,可用于本制剂的质量控制。

HPLC法测定跳骨片中马钱子碱的含量

目的建立跳骨片中马钱子碱的含量测定方法.方法采用高效液相色谱法测定,色谱柱ODS C18,流动相:乙腈-10mmol·L-1庚烷磺酸钠与20mmol·L-1磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调pH至2.8)(20:80);检测波长:254nm.结果在0.07696～3.848μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.6%,RSD2.21%(n=9).结论本法简便,快速,重现性好.

LC-MS/MS法测定跳骨片中马兜铃酸Ⅰ含量

目的:建立LC-MS/MS法测定跳骨片中马兜铃酸Ⅰ含量。方法:采用Shim-pack Velox C_(18)色谱柱(2.1mm×100mm,2.7μm),以乙腈为流动相A,0.1%甲酸溶液为流动相B进行梯度洗脱;电喷雾离子源,MRM模式,ESⅠ+检测,离子对为358.9→296.0,358.9→298.2。结果:马兜铃酸Ⅰ在2.192~109.60ng·mL^(-1)范围内线性关系良好,r=0.99979;平均回收率为97.8%,RSD为1.95%,限度拟定为跳骨片中含马兜铃酸Ⅰ不得过0.233μg·g^(-1);对11批制剂进行检测,其含量均低于限度值。结论:该方法简便、快捷,灵敏度较高,可用于跳骨片中马兜铃酸Ⅰ的限量检查。