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耳穴埋籽超前镇痛对TLH患者术后早期康复效果研究 被引量:1
1
作者 王俊蕊 付菊芳 +1 位作者 丁玉兰 刘芳 《按摩与康复医学》 2023年第9期41-44,共4页
目的:观察耳穴埋籽超前镇痛对TLH患者术后早期康复效果的影响,并比较不同时机耳穴埋籽的效果差异。方法:将123例TLH患者随机分为对照组、术后组和超前组各41例,对照组给予手术前后常规治疗和护理,术后组在对照组基础上于术后6h进行耳穴... 目的:观察耳穴埋籽超前镇痛对TLH患者术后早期康复效果的影响,并比较不同时机耳穴埋籽的效果差异。方法:将123例TLH患者随机分为对照组、术后组和超前组各41例,对照组给予手术前后常规治疗和护理,术后组在对照组基础上于术后6h进行耳穴埋籽,超前组在对照组基础上于术前24h进行耳穴埋籽,比较三组患者术后6、12、24、48、72h静息和活动状态下的NRS评分、术后首次下床活动时间和不良反应发生率。结果:三组患者静息和活动状态下NRS评分的时间效应差异、组间效应差异均有统计学意义(P<0.05);术后首次下床活动时间组间差异有统计学意义(P<0.05),术后组和超前组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),但术后组与超前组相比差异无统计学意义(P>0.05);术后腹胀和恶心呕吐等不良反应的发生率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:不同时机耳穴埋籽均有利于减轻患者静息和活动状态下的疼痛程度,缩短患者术后首次下床活动时间,减轻患者术后不良反应的发生,但超前镇痛干预效果甚佳,耳穴埋籽超前镇痛可作为今后TLH患者术后快速康复方案中的一部分。 展开更多
关键词 腹腔镜下全子宫切除手术(tlh) 耳穴埋籽 超前镇痛 早期康复
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副溶血弧菌tlh基因的克隆、表达及功能的研究 被引量:3
2
作者 李志峰 聂军 +3 位作者 戴迎春 刘翼 陈清 俞守义 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期193-195,共3页
目的 构建融合表达载体pET32a+-tlh ,获得具有生物活性功能的蛋白。方法 用PCR法扩增tlh全序列 ,克隆入 pET32a +高效表达载体进行诱导表达 ,亲和层析纯化目的蛋白 ,采用逐步透析的复性方法 ,并对复性产物进行功能检测。结果与结论 ... 目的 构建融合表达载体pET32a+-tlh ,获得具有生物活性功能的蛋白。方法 用PCR法扩增tlh全序列 ,克隆入 pET32a +高效表达载体进行诱导表达 ,亲和层析纯化目的蛋白 ,采用逐步透析的复性方法 ,并对复性产物进行功能检测。结果与结论 成功构建了融合表达载体pET32a +-tlh ,在大肠杆菌DE3 中表达产物以包涵体形式存在 ,复性后的蛋白在卵磷脂存在下具有溶血活性。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 tlh基因 克隆 表达 溶血活性
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副溶血弧菌tlh基因的克隆及序列分析 被引量:8
3
作者 李志峰 聂军 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期10-12,共3页
目的 构建副溶血弧菌不耐热性溶血毒素 (thermolabilehemolysin ,TLH)tlh基因重组质粒。方法 根据已知GenBank中的tlh基因序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从副溶血弧菌基因组DNA中扩增编码TLH的基因片段 ,克隆至pET32a+ 质粒 ,转... 目的 构建副溶血弧菌不耐热性溶血毒素 (thermolabilehemolysin ,TLH)tlh基因重组质粒。方法 根据已知GenBank中的tlh基因序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从副溶血弧菌基因组DNA中扩增编码TLH的基因片段 ,克隆至pET32a+ 质粒 ,转化大肠杆菌DH5感受态细胞 ,经酶切及PCR鉴定 ,而后进行测序。结果 tlh基因体外扩增产物大小约1 30 0bp ,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合。 结论 在国内首次克隆了副溶血弧菌tlh基因 。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 tlh基因 克隆 序列分析 特异性诊断靶抗原
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副溶血弧菌tlh基因克隆载体和表达载体的构建 被引量:4
4
作者 李志峰 聂军 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期418-419,共2页
目的 构建含副溶血弧菌 (vibrioparahaemolyticus,VP)tlh基因克隆载体和表达载体 ,检测并鉴定表达载体在转化菌的表达 ,为制备单抗、诊断试剂及进一步深入研究不耐热性溶血毒素 (TLH)的功能奠定基础。方法 根据Gen bank的tlh全基因序... 目的 构建含副溶血弧菌 (vibrioparahaemolyticus,VP)tlh基因克隆载体和表达载体 ,检测并鉴定表达载体在转化菌的表达 ,为制备单抗、诊断试剂及进一步深入研究不耐热性溶血毒素 (TLH)的功能奠定基础。方法 根据Gen bank的tlh全基因序列 ,设计一对附加EcorⅤ和HindⅢ两个限制性内切酶酶切位点的特异性引物 ,以VP基因组DNA为模板 ,用高保真Taq酶扩增出tlh基因。连接pGEM -T载体构建克隆载体 ,测序鉴定后 ,再用EcorⅤ和HindⅢ酶切回收目的基因并克隆至表达载体 pET32a+,采用PCR和双酶切鉴定筛选阳性质粒 ,转化DE3 ,IPTG诱导 ,用SDS -PAGE检测tlh的表达。结果 扩增的目的基因与GenBank的tlh比较具有 99%的同源性 ,重组表达载体转化DE3 ,能表达融合蛋白。结论 本研究成功扩增出完整的tlh基因 ,构建了克隆载体和表达载体 ,获得融合表达的目的蛋白。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 tlh基因 PCR 克隆载体 表达载体
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VHH/TLH溶血素基因在海洋弧菌中分布的研究(英文) 被引量:1
5
作者 王淑娴 张晓华 +2 位作者 钟英斌 孙铂光 陈吉祥 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期874-881,共8页
哈维氏弧菌(V.harveyi)的VHH溶血素是对海水养殖鱼类的潜在致病因子。哈维氏弧菌的VHH溶血素基因与副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的TLH热不稳定性溶血素基因具有高度相似性,其氨基酸序列的相似性达到85.6 %。根据哈维氏弧菌vhhA... 哈维氏弧菌(V.harveyi)的VHH溶血素是对海水养殖鱼类的潜在致病因子。哈维氏弧菌的VHH溶血素基因与副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的TLH热不稳定性溶血素基因具有高度相似性,其氨基酸序列的相似性达到85.6 %。根据哈维氏弧菌vhhA溶血素基因序列,合成一个地高辛标记的VHH基因探针,利用其进行Southern Blot ,检测VHH溶血素基因在57株弧菌(包括26株国际标准菌株,20株哈维氏弧菌,11株副溶血弧菌)中的分布情况。结果显示,VHH基因探针与13株弧菌标准菌株有强杂交信号,包括2株溶藻胶弧菌(V.alginolyticus) ,2株哈维氏弧菌以及1株霍氏格里蒙菌(Grimontia hollisae) ,坎贝氏弧菌(V.campbellii) ,辛辛那提弧菌(V.cincinatiensis) ,费氏弧菌(V.fischeri) ,拟态弧菌(V.mimicus) ,飘浮弧菌(V.natriegens) ,副溶血弧菌,解蛋白弧菌(V.proteolyticus)和火神弧菌(V.logei)。与6株弧菌标准菌株有弱杂交信号,包括鳗弧菌(V.anguillarum) ,河口弧菌(V.aestuarianus) ,美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae subsp.damselae) ,河弧菌(V.fluvialis) ,弗尼斯弧菌(V.furnissii)和创伤弧菌(V.vulnificus) ,而另外7株弧菌标准菌株中无杂交信号。所有的哈维氏弧菌菌株至少含有一条杂交带,其中菌株VIB645 , VIB 648和SF-1分别含有2条杂交带。11株副溶血弧菌中均含有一条杂交带。上述数据表明,vhh/tlh溶血素基因广泛分布于弧菌中,尤其是哈维氏弧菌相关菌株和费氏弧菌相关菌株中。另外对鳗弧菌VIB 72 ,坎贝氏弧菌VIB 285 ,飘浮弧菌VIB 299和哈维氏弧菌VIB 647的vhh/tlh溶血素基因进行克隆并测序,其氨基酸序列与VHH溶血素和TLH溶血素氨基酸序列的同源性分别为67 %~99 %和69 %~91 %。对vhh/tlh溶血素基因在弧菌中的分布研究,将有助于进一步确定这类溶血素基因在病原弧菌致病性中的作用。 展开更多
关键词 弧菌 哈维氏弧菌 副溶血弧菌 溶血素基因 VHH tlh
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半定量RT-PCR检测副溶血弧菌tlh基因的表达差异
6
作者 陈星 潘迎捷 +1 位作者 孙晓红 赵勇 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期141-145,共5页
副溶血弧菌是广泛存在于近海区域、盐湖和海产品中的食源性致病菌,会引起大规模的食物中毒。TLH是副溶血弧菌最主要的毒力因子之一,通过比较tlh的表达量可以间接比较同种菌株在不同应激条件下以及不同菌株之间的毒力差异。本文以在不同... 副溶血弧菌是广泛存在于近海区域、盐湖和海产品中的食源性致病菌,会引起大规模的食物中毒。TLH是副溶血弧菌最主要的毒力因子之一,通过比较tlh的表达量可以间接比较同种菌株在不同应激条件下以及不同菌株之间的毒力差异。本文以在不同条件下培养的三株Vp为材料,分别提取其总RNA,以16SrRNA为内标基因,运用半定量反转录—多聚酶链反应(RT-PCR)检测副溶血弧菌不耐热溶血毒素(tlh)基因在不同应激条件下的表达差异。结果表明,在5%的盐度下,三株Vp的tlh基因的表达量都高于其他盐浓度;25℃下,tlh的表达量高于在其他温度条件下;在三株Vp中,ATCC33846中tlhmRNA的表达量最低,ATCC33847中的表达量最高。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 tlh 16S RRNA RT—PCR 基因表达
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副溶血弧菌tlh基因缺失株的构建
7
作者 赵永刚 唐小千 战文斌 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2011年第1期10-15,共6页
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticuss,VP)是我国海水养殖鱼、虾、贝类的重要病原,其主要致病因子热不稳定性溶血素(thermolabile hemolysin,TLH)的功能和致病性仍不十分清楚。本研究利用PCR技术从VP临床分离株的基因组DNA中扩增出tlh基... 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticuss,VP)是我国海水养殖鱼、虾、贝类的重要病原,其主要致病因子热不稳定性溶血素(thermolabile hemolysin,TLH)的功能和致病性仍不十分清楚。本研究利用PCR技术从VP临床分离株的基因组DNA中扩增出tlh基因,利用同源重组技术,构建了副溶血弧菌tlh基因打靶载体;利用PCR方法筛选tlh基因缺失株,并在卵磷脂存在条件下进行溶血性检测,结果在5%兔血平板上能够引起溶血,5%的马血琼脂平板未出现溶血现象,说明tlh基因敲除成功。本研究成功构建了副溶血弧菌tlh基因缺失株,为进一步研究tlh基因致病性和溶血机制提供了必要的实验菌株,为副溶血弧菌其他基因的敲除提供了可行性依据。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 tlh基因 同源重组 基因敲除 溶血活性
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抗副溶血弧菌TLH蛋白多克隆抗体的制备及其ELISA双抗体夹心检测法的研究 被引量:11
8
作者 杜玉萍 陈清 +1 位作者 柯雪梅 俞守义 《华南预防医学》 2007年第1期19-21,26,共4页
目的分别制备抗副溶血弧菌及其不耐热溶血毒素(thermolabile hemolysin,TLH)的多克隆抗体,建立检测副溶血弧菌TLH的酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法。方法以副溶血弧菌及其TLH分别免疫健康雄性新西兰大白兔和雌性BALB/C小鼠,制备... 目的分别制备抗副溶血弧菌及其不耐热溶血毒素(thermolabile hemolysin,TLH)的多克隆抗体,建立检测副溶血弧菌TLH的酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法。方法以副溶血弧菌及其TLH分别免疫健康雄性新西兰大白兔和雌性BALB/C小鼠,制备兔抗副溶血弧菌多克隆抗体及小鼠抗TLH多克隆抗体,以间接ELISA法检测两种抗体效价,并以棋盘法筛选两种多克隆抗体用于夹心检测TLH的效价。结果兔抗副溶血弧菌多克隆抗体效价达1∶6400,鼠抗TLH多克隆抗体效价为1∶102 400,经筛选确定以1∶800稀释的兔抗副溶血弧菌多克隆抗体包被酶标板,与1∶1600稀释的鼠抗TLH抗体建立了ELISA双抗体夹心法。结论兔抗副溶血弧菌多克隆抗体可与TLH呈特异性反应,以此建立的双抗体夹心法检测副溶血弧菌TLH可获较满意结果,此实验可为进一步建立简便、快速的副溶血弧菌检测方法奠定基础。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 不耐热溶血毒素 多克隆抗体 酶联免疫吸附测定
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广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌3种毒力基因检测及tlh基因的蛋白表达 被引量:1
9
作者 刘杰 贺晓晨 +7 位作者 黎姗梅 黄艳华 张振豪 黄德生 杨廷雅 吴伟锋 梁静真 黄钧 《河北渔业》 2020年第8期28-32,共5页
采用PCR技术检测分离自广西钦州、北海和防城港3市凡纳滨对虾样品中的67株副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)3种毒力基因tdh、trh和tlh的携带情况,并将tlh基因进行原核表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析。结果显示,67株副溶... 采用PCR技术检测分离自广西钦州、北海和防城港3市凡纳滨对虾样品中的67株副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)3种毒力基因tdh、trh和tlh的携带情况,并将tlh基因进行原核表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析。结果显示,67株副溶血弧菌均未扩增出tdh和trh基因,而tlh基因检出率为100.0%,所检副溶血弧菌的毒力基因型为tdh-trh-tlh+。成功构建了原核表达质粒pET-28a-tlh,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测得到大小约为53 kDa的产物,与预测值相符。经Western blotting鉴定,该重组表达产物能与抗6×His标签的单克隆抗体发生特异性反应。 展开更多
关键词 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus) tdh基因 trh基因 tlh基因 蛋白表达
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Usefulness of Detailed Analysis with Operative Procedure of Total Laparoscopic Hysterectomy (TLH) Done a Single Surgeon, to Master the Surgical Technique of TLH and Gain Higher Proficiency
10
作者 Tsutomu Muramoto Shin Takenaka +2 位作者 Ryo Koike Megumi Sano Kyosuke Kamijo 《Open Journal of Obstetrics and Gynecology》 CAS 2022年第11期1183-1190,共8页
Objective: To analyze the relationship between the numbers of cases experienced and the operation time for a single surgeon aiming to master the TLH surgical technique. Material and Methods: Retrospective data analysi... Objective: To analyze the relationship between the numbers of cases experienced and the operation time for a single surgeon aiming to master the TLH surgical technique. Material and Methods: Retrospective data analysis of women who underwent TLH for benign diseases between April, 2014 and March, 2016 was conducted by a single surgeon in a single hospital (Showa University of Fujigaoka Hospital). We divided the main procedures of the TLH operation into five sections, and measured the time required for each section. These cases were divided into three groups, group 1, 2, and 3. Results: There were 54 cases of TLH over two years for a single surgeon, and 21 cases that included essential operative procedures were divided into three groups of seven cases each. The average duration of the surgery (min.) was 178.3 ± 48.2 in the group 1, 128.3 ± 15.6 in the group 2, and 111.3 ± 15.9 in the group 3. A significant reduction in the required time was observed between group 1, 2, and 3 groups. As the number of cases increased, the operation time became statistically significantly shorter for every section except B and D. The skill growth rate was different at each section. Conclusion: For a single surgeon, as the number of surgical cases increased, we recognized the increased skill with the procedure in every section and the rate of skill growth differed for different sections. The difference of growth rate for each section implied that the number of operative cases required for a surgeon in each section was different. 展开更多
关键词 Total Laparoscopic Hysterectomy on the Job Training Learning Curve Surgical Technique of tlh
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荧光定量PCR法检测副溶血弧菌tlh和tdh基因的表达差异 被引量:10
11
作者 陈星 潘迎捷 +1 位作者 孙晓红 赵勇 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1077-1083,共7页
副溶血弧菌是广泛存在于近海区域,盐湖和海产品中的食源性致病菌,会引起大规模的食物中毒。TLH(不耐热溶血毒素)和TDH(耐热直接溶血毒素)是副溶血弧菌最主要的毒力基因,通过比较毒力基因的表达量可以间接比较同种菌株在不同应激条件下... 副溶血弧菌是广泛存在于近海区域,盐湖和海产品中的食源性致病菌,会引起大规模的食物中毒。TLH(不耐热溶血毒素)和TDH(耐热直接溶血毒素)是副溶血弧菌最主要的毒力基因,通过比较毒力基因的表达量可以间接比较同种菌株在不同应激条件下以及不同菌株之间的毒力差异。本文以在不同条件下培养的3株Vp为材料,分别提取其总RNA,以16S rRNA为内标基因,运用荧光定量PCR技术检测副溶血弧菌TLH和TDH基因在不同应激条件下的表达差异。结果表明:不同菌株和同种菌株在不同应激条件下tlh、tdh基因表达差异均显著;tlh的最适表达条件分别为5%盐度和20°C;tdh的最适表达条件分别为1%盐度和25°C。运用SPSS软件对实验结果进行统计学分析表明:菌株对tlh表达的影响大于盐度大于温度;菌株对tdh表达的影响大于温度大于盐度。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 tlh TDH RT-PCR 基因表达
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PCR法制备地高辛标记DNA探针斑点杂交检测副溶血性弧菌tlh基因 被引量:3
12
作者 曹小红 朱雪兰 +1 位作者 陈艳 刘秀梅 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2009年第4期340-343,共4页
目的建立检测副溶血性弧菌种特异性tlh基因的斑点杂交方法。方法采用PCR法制备地高辛标记DNA探针,建立斑点杂交条件。杂交反应条件优化如下:杂交温度65℃,杂交时间9~12h,探针使用浓度100~125pg/ml。结果地高辛标记tlh基因探针长度为45... 目的建立检测副溶血性弧菌种特异性tlh基因的斑点杂交方法。方法采用PCR法制备地高辛标记DNA探针,建立斑点杂交条件。杂交反应条件优化如下:杂交温度65℃,杂交时间9~12h,探针使用浓度100~125pg/ml。结果地高辛标记tlh基因探针长度为450bp,标记产量为50μg/ml。探针具有较高的灵敏度和特异性,可重复使用4次。结论本方法具有快速、简便、高效的特点,适用于副溶血性弧菌菌株的鉴定。 展开更多
关键词 弧菌 副溶血性 DNA探针 tlh基因 斑点杂交
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基于tlh基因病原副溶血弧菌LAMP检测方法的建立 被引量:2
13
作者 秦国民 白雪松 +3 位作者 毕可然 阎斌伦 秦蕾 张晓君 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第3期39-42,209,共5页
为了研究副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的快速分子生物学检测方法,试验以副溶血弧菌特异性tlh基因为分子靶标设计引物,利用环介导恒温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立病原副溶血弧菌的快速检测方法。结果... 为了研究副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的快速分子生物学检测方法,试验以副溶血弧菌特异性tlh基因为分子靶标设计引物,利用环介导恒温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立病原副溶血弧菌的快速检测方法。结果表明:特异性检测仅副溶血弧菌基因组DNA可扩增出阶梯状条带,且反应产物中加入荧光染料SYBR GreenⅠ后呈现明显的绿色阳性反应;而鳗弧菌、河口弧菌、美人鱼弧菌、霍乱弧菌、哈氏弧菌、鱼肠道弧菌这6种对照病原菌均未出现任何扩增条带,且反应产物中加入荧光染料SYBR GreenⅠ后呈现橙色阴性反应;灵敏度检测的最低检测限为42 cfu/mL;对人工染菌的9种水产品检测均可获得阳性扩增结果;该方法检测时间从核酸抽提到结果分析仅需1 h左右,较传统方法操作简单、耗时短、不需昂贵仪器。说明该方法可用于针对副溶血弧菌的进出口检验检疫、食品安全检测及由该菌引起的水产动物疾病的诊断与分子流行病学调查。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 tlh基因 环介导恒温扩增(LAMP)技术 荧光染料SYBRGreenI
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副溶血弧菌TLH基因检测 被引量:4
14
作者 曾转萍 廖日房 +1 位作者 李红玉 许雅 《中国卫生检验杂志》 CAS 2009年第6期1338-1339,共2页
目的:对副溶血弧菌(Vibrio parahaem olyticus,Vp)临床分离株中不耐热溶血素(thermolab ile hemolysin,TLH)基因进行检测,评价TLH基因在临床检测中的价值,为副溶血弧菌快速检测和新国标方法的建立打下基础。方法:用PCR方法对副溶血弧菌... 目的:对副溶血弧菌(Vibrio parahaem olyticus,Vp)临床分离株中不耐热溶血素(thermolab ile hemolysin,TLH)基因进行检测,评价TLH基因在临床检测中的价值,为副溶血弧菌快速检测和新国标方法的建立打下基础。方法:用PCR方法对副溶血弧菌临床分离株的不耐热溶血素(TLH)溶血素基因进行检测。结果:所有副溶血弧菌菌株均可检测到TLH基因。结论:TLH基因在副溶血弧菌的检测中有一定的价值。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 tlh 致病基因
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基于tlh和toxR基因的副溶血弧菌双重PCR检测方法 被引量:2
15
作者 白雪松 秦国民 +4 位作者 阎斌伦 毕可然 秦蕾 高雨 张晓君 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期102-104,共3页
为了研究副溶血弧菌双重PCR检测方法,试验采用tlh和toxR基因序列设计2对特异性引物进行双重PCR检测,扩增出450 bp和368 bp目的片段。结果表明:在同一PCR反应体系中仅副溶血弧菌可同时扩增出2种基因片段,4株对照菌无任何扩增条带;该双重... 为了研究副溶血弧菌双重PCR检测方法,试验采用tlh和toxR基因序列设计2对特异性引物进行双重PCR检测,扩增出450 bp和368 bp目的片段。结果表明:在同一PCR反应体系中仅副溶血弧菌可同时扩增出2种基因片段,4株对照菌无任何扩增条带;该双重PCR检测方法最低能检测1.660 7×103cfu/mL菌体浓度的副溶血弧菌。说明试验所建立的双重PCR检测方法特异性强、敏感性高、方法简单、用时短,可用于副溶血弧菌引起的水产动物疾病的诊断与分子流行病学调查。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 tlh基因 toxR基因 双重PCR
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副溶血性弧菌不耐热溶血素的生物信息学分析与分子动力学模拟
16
作者 张德福 于振兴 +4 位作者 张明 吕欣然 张永勤 张国清 励建荣 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期251-257,I0009-I0012,共11页
副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性人畜共患致病菌,可引发人类胃肠炎等食源性疾病。副溶血性弧菌具有多种毒力因子,热不稳定溶血素(thermolabile hemolysin,TLH)即是其中之一。该研究对副溶血性弧菌的tlh基因进行了克隆及测序,对tlh基因编码... 副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性人畜共患致病菌,可引发人类胃肠炎等食源性疾病。副溶血性弧菌具有多种毒力因子,热不稳定溶血素(thermolabile hemolysin,TLH)即是其中之一。该研究对副溶血性弧菌的tlh基因进行了克隆及测序,对tlh基因编码的TLH蛋白进行了生物信息学分析及结构和功能预测。结果表明,TLH蛋白由418个氨基酸组成,预测分子质量为47.36 kDa。在TLH蛋白中确定了几个保守的结构域和基序,包括SGNH水解酶结构域和GDSL基序;对TLH蛋白的三维结构进行了同源建模及验证,在此基础上通过分子动力学模拟分析其稳定性、与4-硝基苯基月桂酸酯(p-nitrophenylaurate,PNPL)的相互作用能力及结合底物对结构紧密度和残基灵活性的影响,揭示了催化三联体Ser153-His390-Asp393周边是一个重要的药物靶点活性口袋,具有高度保守的残基序列,并在底物结合后表现出残基灵活性差异。该研究分析了副溶血性弧菌TLH蛋白的性质和结构,可以为保障水产品的安全性、提高水产品原料安全评价水平提供理论支持。 展开更多
关键词 基因克隆 副溶血性弧菌 不耐热溶血素(tlh) 生物信息学分析 分子动力学模拟
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TVH、TLH、TAH对子宫肌瘤患者性功能和卵巢功能的影响对比 被引量:10
17
作者 康媛 崔亚杰 +1 位作者 李佩 姬超 《中国妇产科临床杂志》 CSCD 北大核心 2019年第1期16-18,共3页
目的比较阴式全子宫切除术(TVH)、腹腔镜全子宫切除术(TLH)、开腹全子宫切除术(TAH)对子宫肌瘤患者性功能和卵巢功能的影响。方法选择75例子宫肌瘤患者,随机分为三组,分别采取TVH、TLH、TAH治疗。比较三组的疗效、性功能和卵巢功能。结... 目的比较阴式全子宫切除术(TVH)、腹腔镜全子宫切除术(TLH)、开腹全子宫切除术(TAH)对子宫肌瘤患者性功能和卵巢功能的影响。方法选择75例子宫肌瘤患者,随机分为三组,分别采取TVH、TLH、TAH治疗。比较三组的疗效、性功能和卵巢功能。结果 TLH组术中出血量、住院时间及排气时间均明显优于TVH组和TAH组(P <0.05);TLH组的性功能评分明显高于TVH组和TAH组(P <0.05),且TVH组明显高于TAH组(P <0.05);术后6个月,三组的血清FSH和LH水平均明显升高(P <0.05),E2水平均明显降低(P <0.05),且与TLH组和TVH组相比,TAH组变化更显著(P <0.05)。结论 TVH、TLH、TAH对子宫肌瘤患者性功能和卵巢功能均会产生一定程度的损伤,其中,TLH对患者性功能和卵巢功能的影响最小。 展开更多
关键词 阴式全子宫切除术 腹腔镜全子宫切除术 开腹全子宫切除术 子宫肌瘤 性功能 卵巢功能
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副溶血弧菌与嗜水气单胞菌双重PCR检测方法的建立
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作者 许佳乐 陈忠伟 +11 位作者 陈婷婷 许艺兰 全琛宇 卢冰霞 林森 梁盼 曾家家 江新华 秦毅斌 黄广杰 何颖 欧阳康 《中国动物检疫》 CAS 2023年第5期102-106,120,共6页
为建立一种可精准、快捷鉴别检测副溶血弧菌(VP)及嗜水气单胞菌(AH)的方法,根据GenBank公布的VP Tlh基因及AH aerA基因保守区序列,设计合成两对特异性引物,通过优化反应体系及反应程序,成功建立了一种可同时检测VP与AH的双重PCR方法,并... 为建立一种可精准、快捷鉴别检测副溶血弧菌(VP)及嗜水气单胞菌(AH)的方法,根据GenBank公布的VP Tlh基因及AH aerA基因保守区序列,设计合成两对特异性引物,通过优化反应体系及反应程序,成功建立了一种可同时检测VP与AH的双重PCR方法,并开展了特异性及敏感性试验。结果显示:VP Tlh和AH aerA基因扩增条带大小分别为500、760 bp;反应体系中Tlh与aerA基因引物最优浓度分别为7.5、10.0 nmol/L,反应程序中最佳退火温度为56.8℃;该方法对VP、AH的最低可检出细菌浓度均为1.2×10^(3)CFU/mL;对地衣芽孢杆菌、微小杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡阳芽孢杆菌、普通变形杆菌、维氏气单胞菌、布氏柠檬酸杆菌、豚鼠气单胞菌、霍乱弧菌、拟态弧菌、简氏气单胞菌等其他非目标菌均无交叉反应,仅对VP和AH呈特异性阳性扩增。综上,本研究建立了一种可快速鉴别诊断VP、AH的双重PCR检测方法,其特异性强、灵敏度高,可为VP、AH等细菌性病原引发的水生动物疫病的快速诊断、监测及有效防控提供技术支持。 展开更多
关键词 双重PCR 副溶血弧菌 嗜水气单胞菌 tlh基因 aerA基因 快速诊断
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副溶血弧菌LAMP检测方法的建立 被引量:71
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作者 徐芊 孙晓红 +1 位作者 赵勇 潘迎捷 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期66-72,共7页
副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是一种能引起食源性疾病的重要病原菌。首次将一种新颖的核酸扩增技术-环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)应用于副溶血弧菌的快速检测。针对副溶血弧菌不耐热溶血毒素... 副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是一种能引起食源性疾病的重要病原菌。首次将一种新颖的核酸扩增技术-环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)应用于副溶血弧菌的快速检测。针对副溶血弧菌不耐热溶血毒素基因(tlh)设计4条特异性引物(两条内引物和两条外引物)进行LAMP扩增,对扩增反应进行优化,最佳反应时间为60min,反应温度为60℃。对12种细菌共28株菌进行LAMP扩增,仅14株副溶血弧菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性。副溶血弧菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为90fg和24cfu/ml。对模拟食品样品进行直接检测,检测限为89cfu/g。结果表明,该方法检测副溶血弧菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低,1小时即可完成,有望发展成为快速检测副溶血弧菌的有效手段。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 环介导等温扩增技术(LAMP) 不耐热溶血毒素基因(tlh) 检测
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新型恒温核酸扩增法快速检测副溶血性弧菌的研究 被引量:12
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作者 王丽 李琳 +1 位作者 山崎伸二 石磊 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第7期382-385,共4页
利用DNA环介导恒温核酸扩增法(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP)设计一对外引物和一对内引物,通过引物特异性识别tlh基因上的六个独立区域来快速检测副溶血弧菌。同时将检测结果与PCR方法进行比较。结果表明,LAMP... 利用DNA环介导恒温核酸扩增法(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP)设计一对外引物和一对内引物,通过引物特异性识别tlh基因上的六个独立区域来快速检测副溶血弧菌。同时将检测结果与PCR方法进行比较。结果表明,LAMP反应在65℃恒温条件60min内完成,凝胶电泳呈现梯型条带;肉眼观察阳性结果出现白色混浊现象,添加1×SYBRGreenI荧光染料后,绿色的阳性结果很明显区别于橙色阴性结果;LAMP方法的最低检出限为10CFU/ml,PCR方法为103CFU/ml,LAMP方法检测灵敏度是PCR方法的100倍。因此,LAMP方法用于快速检测副溶血弧菌具有检测过程简单、反应结果肉眼即辨别并且灵敏度高特异性强的特点。实验装置简便,能够提供稳定热源即可,所以LAMP方法特别适合于现场快速诊断。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 DNA介导恒温核酸扩增法 tlh基因
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