豫中烟区烤烟品种NC89化学成分年度间变化分析

采用统计分析方法,以河南省许昌市为例,对豫中地区2003-2012年烤烟品种NC89的C3F初烤烟叶样品主要化学成分含量变化进行了测试分析。结果表明,NC89的化学成分含量在不同年份间存在广泛的变异,总糖、还原糖、淀粉、蛋白质、烟碱、总氮、钾、氯含量及糖碱比、氮碱比、钾氯比达到了极显著差异,两糖比差异不显著。12个化学成分指标中,钾氯比、糖碱比的变异较大,总氮含量、氮碱比和两糖比的变异较小。两糖比稳定,糖碱比较低,氮碱比低于1,但钾含量偏低,钾氯比不协调。

烟草NC89叶肉细胞原生质体再生植株的遗传稳定性

对烟草 Ｎ Ｃ８９ 叶肉细胞原生质体再生植株的 Ｒ０、 Ｒ１、 Ｒ２ 及 Ｒ３ 代的农艺性状进行了观察比较，测定了各代叶片中蛋白质和可溶性还原糖的含量，比较了各代植株的过氧化物同工酶谱，发现再生植株及其后代在农艺性状、蛋白质含量上均具有较好的遗传稳定性，过氧化物同工酶谱随代数的延长而趋于相同。

褐藻寡糖激发子诱导烟草抗低温作用研究

研究褐藻寡糖在低温下对烟草的保护作用,探讨褐藻寡糖作用机理,将褐藻寡糖溶液均匀喷施到烟草叶面后置于(4±1)℃下进行低温胁迫,间隔不同时间检测相关指标。研究发现,浓度是影响褐藻寡糖抗冻性能的重要因素。0.05%,0.20%和0.30%褐藻寡糖具有诱导激发因子作用,能够诱导烟草CAT、SOD和POD活力提高,清除体内产生的氧自由基,保护细胞膜和叶绿素结构,减少烟草叶片损伤,提高烟草耐低温能力,其中以0.20%褐藻寡糖诱导效果最好;0.10%褐藻寡糖具有抗冻保护剂作用,在24h内烟草各项指标均没有明显变化,可保护细胞免受低温伤害,但48h时冻伤指标增强,其保护作用减弱或者消失;高浓度1.00%褐藻寡糖具有毒副作用,在烟草细胞表面形成较强渗透势,胞内物质外渗严重,烟草细胞结构受到破坏,加速低温下烟草叶片损伤。

诱导子对烟草细胞辅酶Q_(10)生物合成的影响

比较了甘露醇、纤维素酶、果胶酶、水杨酸及茄子黄萎病菌和番茄叶霉病菌菌丝灭活物等几种诱导子对烟草NC89细胞生长和辅酶Q10合成的影响。结果表明:适宜浓度的甘露醇有利于NC89细胞生长,但抑制胞内辅酶Q10合成,当其浓度为5.0mg/L时,NC89细胞干重提高14.6%,辅酶Q10产量仅提高1.9%;水杨酸、果胶酶及番茄叶霉病菌诱导子对NC89细胞生长有一定抑制作用,但可促进胞内辅酶Q10的合成,当水杨酸浓度和番茄叶霉病菌诱导子浓度分别为5.0mg/L和25mL/L时,胞内辅酶Q10含量分别提高25.8%和66.1%,但辅酶Q10产量分别降低7.0%和1.9%,当果胶酶浓度为3U/L时,胞内辅酶Q10含量增加54.0%,辅酶Q10产量增加40.0%;茄子黄萎病菌诱导子及纤维素酶既有利于NC89细胞的生长,又可促进其胞内辅酶Q10的合成,当其浓度分别为25mL/L和2U/L时,辅酶Q10产量分别提高71.1%和36.6%。

抗黄瓜花叶病转基因烟草新品系的对比及示范试验

对同时表达黄瓜花叶病毒外壳蛋白(CMV CP)和卫星RNA的转基因烟草NC89新品系(NC89-B)及单一表达CMV CP的转基因NC89新品系(NC89-T),在大田生产条件下进行了品比及示范试验.结果表明,在抗病性方面,转基因NC89明显高于未转基因NC89,其中B品系对CMV的相对防效达80%左右,T品系对CMV的相对防效达20%左右;在农艺性状方面,转基因NC89较对照有较显著改善,产值、产量、上等烟比例均有提高,但种性未变;在原烟品质方面,转基因NC89与对照基本一致.

抗赤星病烟草的防卫基因的表达与基因组DNA结构的变化

用赤星病菌 (Alternariaalternata)毒性菌株产生的AT毒素诱导烟草 ,可使寄主获得对赤星病 80 .4 %的系统抗性 ,比病菌弱毒株TBA16孢子诱导的效果高约 2 0 %。烟草品种NC89心叶叶碟在含AT毒素 60 %和 75%的MS培养基上经 2轮胁迫筛选和植株再生 ,得到抗病品系NC89 TT。用 5种防卫基因的cDNA探针检测了不诱导、受AT毒素诱导、受病菌弱毒株激发子诱导的NC89和诱导与不诱导的NC89 TT第 4代植株 5种基因的转录活性 ,结果表明 ,苯丙氨酸氨裂解酶(PAL)基因在NC89中不能组成型表达 ,可被AT毒素诱导激活 ,但不受激发子诱导 ;病程相关蛋白(PR蛋白 )PR 1a、查尔酮合成酶 (CHS)、脂氧合酶 (LOX)基因在NC89中表现为诱导转录或诱导后转录活性增强 ;这 4种基因都能在NC89 TT中组成型表达。几丁质酶 (CHT)基因在NC89中组成型表达 ,但受诱导后及在NC89 TT中表达丧失。烟草基因组DNA的随机引物扩增 (RAPD)测定表明 ,AT毒素诱导了DNA结构的明显变化 ;与亲本NC89相比 ,NC89 TT的基因组DNA显示明显的序列重排或核苷酸替换。

转基因烟草的大田抗病性分析

为了尽快地将抗病转基因烟草品种应用于生产，在选育抗病优良株系的同时，进行了转基因株系的大田抗病性鉴定。结果表明：（１）在田间自然发病情况下，转基因烟草的ＮＣ８９各株系的发病率及病情指数显著低于对照ＮＣ８９，对ＣＭＶ的相对防治效果为５５％－７０％，表现较强的抗病性；同时对ＴＭＶ也有一定的抗病力；（２）转基因烟草的产量。

马铃薯Y病毒复制酶基因的转基因烟草对PVY的抗性

将农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＡＬ４４０４、ｐＢｉｎ４３８双元载体上的ＮＩｂ基因正义序列、反义序列、５′－缺失序列及新霉素磷酸转移酶基因（ＮＰＴⅡ）转入烟草品种ＮＣ８９的染色体，获得抗卡那霉素的转化再生烟草植株。经抗性筛选、ＰＣＲ检测、无性扩繁和大量重复抗病鉴定，结果表明，转化烟草植株ＤＮＡ中整合了外源目的基因；ＮＩｂ基因正义序列、５′－缺失序列转化再生植株中，均出现抗１０μｇ／ｍｌＰＶＹ侵染的植株；ＮＩｂ基因反义序列转化再生植株仅部分抗５μｇ／ｍｌＰＶＹ侵染。ＥＬＩＳＡ分析认为抗性植株无病毒累积。

转TMV-cp基因烟草对环境影响的安全性研究

以转TMV-cp烟草品种NC89为试验材料,在温室和隔离圃中进行了转基因烟草对环境的安全性评价。试验结果未发现来自转基因材料中的外源基因飘移或整合到杂草、细菌、真菌和病毒上。

AT毒素胁迫的再生烟草及后代对赤星病的抗性

从4个烤烟品种幼苗心叶叶碟产生的愈伤组织(CA)在含AT毒素的培养基上经两轮筛选,获得的抗毒素CA用于产生了抗病的一次再生植株。用来自抗病性提高50％以上的一次再生株的二代CA产生了抗病的二次再生植株,品种NC89的二次再生抗病植株被称为NC89—TT。获得种子后,NC89—TT二代苗显示出抗毒素损伤、抗病菌侵入、抗病斑扩展的能力,与NC89比,毒素引起的根和叶部病变至少晚8小时、轻64％,病菌孢子侵染率低60％以上,病斑面积减小92％。