基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4信号通路分析血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗对急性脑梗死患者的机制研究

目的基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4(HMGB1/TLR4)信号通路分析血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗对急性脑梗死(ACI)患者的作用机制。方法将106例ACI患者随机分为对照组(n=53)与研究组(n=53)。对照组进行阿替普酶静脉溶栓治疗,研究组在对照组基础上应用血栓通注射液治疗。比较2组临床疗效与不良反应,治疗前及治疗后7、14 d的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,治疗前后的外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量,以及治疗前后炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平。采用Pearson检验和Spearman检验分析ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与NIHSS评分、疗效总有效率的相关性。结果治疗后7、14 d时,研究组NIHSS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平较治疗前降低,且研究组HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组血清HMGB1、TLR4蛋白含量较治疗前降低,且研究组血清HMGB1、TLR4蛋白含量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组血清TNF-α、IL-6水平低于治疗前,且研究组血清TNF-α、IL-6水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组总有效率为75.47%,研究组总有效率为94.34%,差异有统计学意义(P<0.05);对照组不良反应总发生率为9.43%,研究组不良反应总发生率为15.09%,差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson检验显示,ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与NIHSS评分呈正相关(r=0.431、0.443、0.396、0.375,P均<0.001);Spearman检验显示,ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与疗效总有效率呈负相关(r=-0.536、-0.481、-0.475、-0.506,P均<0.001)。结论血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗能有效改善ACI患者神经功能并降低机体炎症水平,其机制可能与下调HMGB1/TLR4信号通路有关。

Toll样受体激活对间充质干细胞免疫调节功能的影响

目的探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)激活对骨髓和脐带两种不同来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)免疫调节功能的影响,同时比较骨髓MSC与脐带MSC中TLR的表达情况。方法从关节置换术患者废弃的关节中取得骨髓,分离培养骨髓MSC。从健康产妇废弃的脐带中分离培养脐带MSC。采用TLR4激动剂脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、TLR3激动剂聚肌胞苷酸[polyinosinic-polycytidylic acid,Poly(I:C)]分别预处理骨髓MSC或脐带MSC,然后与健康志愿者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)共培养,共培养结束后流式细胞术检测PBMC增殖情况。以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测骨髓MSC和脐带MSC中TLR4、TLR3的基因表达水平。流式细胞术检测骨髓MSC和脐带MSC中TLR4、TLR3的蛋白表达水平。结果骨髓MSC与PBMC共培养实验结果显示,LPS预处理可以明显降低骨髓MSC对PBMC增殖的抑制效应,Poly(I:C)预处理对骨髓MSC免疫调节功能无显著影响。脐带MSC与PBMC共培养实验结果显示,LPS或Poly(I:C)预处理对脐带MSC抑制PBMC增殖的影响均不显著。与骨髓MSC比较,脐带MSC中TLR4、TLR3的基因和蛋白表达水平均明显更低。结论TLR4激活可以干扰骨髓MSC的免疫调节功能,但是TLR4或TLR3激活对脐带MSC免疫调节功能的影响并不显著,可能与脐带MSC中TLR4、TLR3的基础表达量低有关。

Toll样受体4在热射病大鼠心功能损伤及心肌铁死亡中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在高温致热射病大鼠心功能损伤及心肌铁死亡中的作用。方法(1)24只SD大鼠随机分为对照组与热射病(HS)组,每组12只。热打击期间,采用肛温计测量大鼠核心体温,BL-420F生物机能实验系统测量大鼠心率及平均动脉压。(2)24只SD大鼠随机分为对照组、铁死亡抑制剂(Liproxstatin-1)组、HS组与HS+Liproxstatin-1组,每组6只。建模前30 min,Liproxstatin-1组和HS+Liproxstatin-1组腹腔注射Liproxstatin-1(10 mg/kg)。采用免疫荧光染色检测大鼠心肌组织中溶质载体家庭成员7A11(SLC7A11)蛋白表达情况,Western blotting检测大鼠心肌组织中SLC7A11、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)蛋白的表达。(3)48只SD大鼠随机分为对照组、TLR4抑制剂(TAK-242)组、HS组与HS+TAK-242组,每组12只。建模前30 min,TAK-242组和HS+TAK-242组腹腔注射TAK-242(3 mg/kg)。采用免疫荧光染色检测心肌组织中TLR4蛋白表达情况,BL-420F生物功能实验系统检测心脏血流动力学指标[左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室内压最大升高速率(+dp/dtmax)及最大下降速率(±dp/dtmax)],超声检测心功能指标[心输出量(CO)、舒张期左室后壁厚度(LVPWd)和收缩期左室后壁厚度(LVPWs)],Western blotting检测TLR4/NF-κB-p53信号通路蛋白[TLR4、核因子κB(NF-κB)、p53]与铁死亡相关蛋白(SLC7A11、GPX4)的表达。结果与对照组比较,HS组大鼠热打击180 min时核心体温及心率明显升高(P<0.01),平均动脉压明显降低(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,与对照组比较,HS组大鼠心肌组织中SLC7A11表达明显降低(P<0.01);与HS组比较,HS+Liproxstatin-1组SLC7A11表达明显增高(P<0.01)。Western blotting检测结果显示,与对照组比较,HS组大鼠心肌组织中SLC7A11、GPX4表达水平明显下降(P<0.05);与HS组比较,HS+Liproxstatin-1组大鼠SLC7A11、GPX4表达水平明显增高(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,与对照组比较,HS组大鼠心肌组织中TLR4表达明显增高(P<0.01);与HS组比较,HS+TAK-242组TLR4表达明显降低(P<0.01)。与对照组比较,HS组LVEDP升高,LVSP降低(P<0.01);与HS组比较,HS+TAK-242组LVSP、LVEDP、+dp/dtmax及±dp/dtmax明显改善(P<0.05)。与对照组比较,HS组大鼠CO降低,LVPWd、LVPWs增高(P<0.01);与HS组比较,HS+TAK-242组CO增高,LVPWd、LVPWs降低(P<0.05)。Westernblotting检测结果显示,与对照组比较,HS组大鼠心肌组织中TLR4、NF-κB、p53表达水平明显增高(P<0.01),SLC7A11、GPX4表达水平明显降低(P<0.01);与HS组比较,HS+TAK-242组TLR4、NF-κB、p53表达水平明显降低,SLC7A11、GPX4表达水平明显升高(P<0.05)。结论热射病所致大鼠心功能损伤过程中可能存在铁死亡,抑制TLR4可减轻心功能异常,其机制可能与TLR4/NF-κB-p53/SLC7A11信号通路介导的铁死亡相关。

甘草苷通过TLR4/IL-6信号通路改善癫痫幼鼠认知功能及海马神经元损伤

目的探讨甘草苷改善癫痫幼鼠认知功能、海马神经元损伤及对Toll样受体4(TLR4)/白细胞介素-6(IL-6)信号通路的调节作用。方法将60只幼鼠随机分为正常组、模型组、甘草苷组、激动剂组和激动剂+甘草苷组,每组12只。除正常组外,其余组幼鼠腹腔注射氯化锂-匹罗卡品建立癫痫模型。采用水迷宫实验检测幼鼠认知功能,酶联免疫吸附法检测血清IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平,苏木精-伊红染色法观察海马神经元组织病理形态,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP标记测定法检测海马神经元凋亡率,蛋白印迹法检测海马B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、TLR4、IL-6、IL-1β、TNF-α和HMGB1蛋白表达水平。结果模型组和激动剂组幼鼠海马神经元形态不规则,排列紊乱,细胞核固缩、碎裂,细胞数减少,甘草苷组和激动剂+甘草苷组幼鼠海马神经元损伤程度明显改善。与模型组比较,甘草苷组幼鼠逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增加,血清IL-1β、TNF-α和HMGB1表达水平,海马神经元凋亡率以及Bax、TLR4、IL-6、IL-1β、TNF-α和HMGB1蛋白表达水平均降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);与激动剂组比较,激动剂+甘草苷组幼鼠逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增加,血清IL-1β、TNF-α和HMGB1表达水平,海马神经元凋亡率以及Bax、TLR4、IL-6、IL-1β、TNF-α和HMGB1蛋白表达水平均降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论甘草苷可减轻癫痫幼鼠炎症反应,降低神经元损伤程度,改善认知功能和空间记忆能力。甘草苷可能是通过抑制TLR4/IL-6信号通路发挥作用。

雷公藤内酯醇对脑缺血再灌注大鼠小胶质细胞M1/M2型极化的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(TPL)对脑缺血再灌注(CIR)大鼠小胶质细胞M1/M2型极化的影响。方法:选取192只SD大鼠设假手术组、模型组、丁苯酞(6 mg/kg)组和TPL低、中、高(0.2、0.4、0.8 mg/kg)剂量组,每组32只。除假手术组外,其余5组采用线栓阻断大脑中动脉2 h的方法复制CIR大鼠模型。各组均于造模前3 d开始给药,1次/d,再灌注24 h后,检测大鼠神经功能、脑梗死率、脑含水量,观察缺血侧皮层神经元病理学变化;酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测缺血侧皮层组织炎症介质含量,免疫荧光标记法检测小胶质细胞表型M1型标志物CD86/离子钙结合衔接分子-1(Ionized Calcium-binding Adapter Molecule-1,Iba-1)、M2型标志物CD206/Iba-1,蛋白质免疫印迹法检测Toll样受体4(TLR4)、核因子κB、p-核因子κB蛋白表达。结果:与模型组比较,TPL中、高剂量组和丁苯酞组神经功能缺失评分、脑梗死率、脑含水量显著降低(P<0.05);缺血侧皮层神经元病理学变化明显改善,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量显著降低而IL-10含量显著升高,CD86/Iba-1阳性细胞率显著降低,CD206/Iba-1阳性细胞率显著升高(P<0.05);缺血侧皮层组织Toll样受体4(TLR4)、p-核因子κB表达显著下调,p-核因子κB/核因子κB比值显著降低(P<0.05)。除神经功能缺失评分、脑含水量、IL-1β含量外,TPL高剂量组对其他指标的影响均优于丁苯酞组(P<0.05)。结论:TPL可抑制大鼠CIR损伤,可能与促进小胶质细胞M1型向M2型极化,抑制TLR4/核因子κB通路活化及炎症反应有关。

抗生素诱导小鼠肠道菌群失调对免疫功能和Toll样受体2、4基因表达的影响

目的:探讨抗生素诱导小鼠肠道菌群失调后对机体免疫功能和Toll样受体2、4的影响。方法:60只BALB/c小鼠分为2组:抗生素组和对照组,抗生素组连续7天口服头孢哌酮,7天后经口给予白色念珠菌。结果:抗生素组小鼠肠道内肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌较对照组减少,白色念珠菌增加;脾指数、PHA诱导的淋巴细胞转化率、迟发型变态反应、抗体生成细胞数和脾脏的TLR2和TLR4基因表达水平均低于对照组。结论:抗生素诱导肠道菌群失调后小鼠免疫功能和TLR2、TLR4 mRNA表达均降低。

腺肽α辅助治疗重症腹腔感染的临床疗效及对细胞免疫功能和Toll样受体的影响

目的：研究胸腺肽α辅助治疗重症腹腔感染的临床疗效,并探讨其对细胞免疫功能和Toll样受体的影响。方法：2012年1月~2014年12月在我院综合重症监护病房收治重症腹腔感染60例患者随机分为对照组和观察组,两组患者参照2004年国际脓毒症和脓毒症休克治疗指南接受常规治疗,观察组患者在常规治疗基础上接受胸腺肽α1治疗。治疗前及治疗2周抽取患者静脉血采用流式细胞术测定T淋巴细胞水平,并且分离外周血单个核细胞采用荧光实时PCR测定TLR2和TLR4表达水平,记录两组患者入院时及治疗2周时的APACHEⅡ评分和胃肠功能评分,比较两组患者全身炎症反应综合症发生率、肠功能恢复时间、住院病死率及住院时间。结果：（1）治疗2周时观察组患者外周血CD3＋、CD4＋和CD4＋/CD8＋水平均较对照组患者显著升高（P〈0.01）,而CD8＋水平较对照组患者显著降低（P〈0.01）;（2）治疗2周时观察组患者外周血PBMCs TLR2和TLR4 mRNA水平均较对照组患者显著降低（P〈0.01）;（3）治疗2周时观察组患者APACHE II评分和胃肠功能评分均较对照组患者降低（P〈0.01）;（4）观察组患者肠功能恢复时间、SIRS消退时间、住院时间和MODS发生率均较对照组患者显著缩短或减少（P〈0.01）,住院病死率有降低趋势,但是差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：胸腺肽α辅助治疗重症腹腔感染具有较好的临床疗效,并且可改善患者的细胞免疫功能及降低外周血Toll样受体表达。

Toll样受体与益生菌免疫

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是天然免疫反应中重要的细胞表面模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs),而益生菌在动物免疫中起着重要的作用,本文就TLRs的种类、配体类型和信号转导途径、益生菌的免疫作用、Toll样受体信号通路与益生菌的免疫作用的关系作简要综述。

基于过敏性鼻炎免疫途径探讨镰形棘豆总黄酮调控Toll样受体的作用机制

目的基于过敏性鼻炎(AR)免疫途径探讨镰形棘豆总黄酮调控Toll样受体的作用机制。方法将50只Wistar大鼠随机分为5组,分别为空白组、模型组、西替利嗪组及镰形棘豆总黄酮组低、高剂量组。除空白组外,其余4组大鼠采用卵蛋白(OVA)制作过敏性鼻炎模型,西替利嗪组及镰形棘豆总黄酮组低、高剂量组分别给予西替利嗪(1 mg·kg^(-1))、镰形棘豆总黄酮(0.47、1.87 g·kg^(-1),按生药计)灌胃2周。HE、免疫组化染色观察各实验组大鼠鼻黏膜组织变化;ELISA法测定血清中转化生长因子(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2及IL-4含量;Western Blot法检测鼻黏膜中TLR2、TLR4蛋白表达。结果与空白组比较,模型组行为学评分增加(P<0.01),差异有统计学意义;鼻黏膜纤毛及上皮细胞脱落,基底膜增厚,炎性细胞浸润,TLR2、TLR4阳性细胞增多;血清IL-2(P>0.05)、IFN-γ含量降低(P<0.05)、IL-4含量升高(P<0.05);鼻黏膜TLR2、TLR4蛋白的表达增强(P<0.01),差异有统计学意义。与模型组比较,西替利嗪组(P<0.01)、镰形棘豆总黄酮低剂量组(P<0.05)、镰形棘豆总黄酮高剂量组(P<0.01)行为学评分均降低,差异有统计学意义;各药物组鼻黏膜组织结构均改善、炎性浸润减少、TLR2、TLR4阳性细胞减少;西替利嗪组、镰形棘豆总黄酮高剂量组血清INF-γ含量升高(P<0.05)、IL-4含量降低(P<0.05),差异有统计学意义;镰形棘豆总黄酮低剂量组血清IL-2和INF-γ含量升高,IL-4含量降低,但差异无统计学意义(P>0.05);西替利嗪组、镰形棘豆总黄酮高剂量组鼻黏膜TLR2、TLR4蛋白表达减弱(P<0.05),差异有统计学意义。结论镰形棘豆总黄酮对卵清蛋白诱导的过敏性鼻炎具有改善作用且与剂量正相关,可能是通过调节TLR2和TLR4蛋白表达及Th1/Th2平衡影响机体免疫。

Toll样受体在肠黏膜屏障免疫机制的研究进展

Toll样受体(TLR)是先天免疫模式识别受体中最重要的受体家族之一。在人类许多组织和细胞中都有表达,并有重要的生理功能。本综述重点介绍近年来TLR在肠道尤其是肠黏膜屏障中免疫作用机制的研究进展。

阿尔茨海默病患者Ghrelin水平及其与Toll样受体4信号通路的关系

目的探讨阿尔茨海默病(AD)患者的Ghrelin水平及其与Toll样受体4(TLR4)信号通路的关系。方法选择AD患者和健康人群各60例分别作为AD组及对照组。比较两组外周血中Ghrelin水平、外周血单核细胞膜上TLR4阳性表达率及平均荧光强度(MFI)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分。分析AD病患者Ghrelin水平与TLR4阳性率及MFI、MoCA评分的相关性。结果 AD组的外周血Ghrelin水平及MoCA评分均低于对照组(均P<0.05),而TLR4阳性率、MFI均高于对照组(均P<0.05)。AD组患者外周血Ghrelin水平与TLR4阳性率及MFI均呈负相关(均P<0.05),而与MoCA评分呈正相关(P<0.05)。结论 AD患者的外周血Ghrelin水平下降,且认知功能损害越重Ghrelin水平越低,其或可通过抑制TLR4介导的信号通路减轻AD患者的免疫炎症反应。

急性腹腔感染早期大鼠肠黏膜屏障中Toll样受体信号通路的变化及意义

目的:初步探讨在急性腹腔感染时肠上皮细胞Toll样受体(TLR)及其下游信号分子的表达规律及对肠黏膜屏障的作用。方法:将大鼠随机分为对照组和实验组,实验组又按手术后时间分为2 h组、6 h组、12 h组和24 h组。实验组采用盲肠结扎穿孔模型,并检测各组末端回肠黏膜上TLR2、TLR4和TLR9的mRNA表达情况,NF-κB的活性,血清IL-6和TNF-α水平以及肠道的通透性水平。结果:随着腹腔感染时间的延长,TLR2的mRNA表达逐渐增高,至12 h最高,随后略有下降,与对照组相比,自6 h开始其间有极显著性差异(P≤0.01);TLR4的mRNA表达6 h达高峰,与对照组比有极显著性差异(P≤0.01);TLR9的mRNA表达12 h达高峰,与对照组比有显著性差异(P≤0.05)。TLR2与肠道通透性的相关性明显高于TLR4和TLR9。结论:重度腹腔感染早期,肠道中的TLR就可能通过调节促炎因子和炎性因子来调控肠黏膜屏障的通透性,其中TLR2起着更关键的作用。

Toll样受体4信号通路分子与慢性心力衰竭严重程度和预后的关系分析

目的探讨Toll样受体4(TLR-4)信号通路分子变化与慢性心力衰竭(CHF)严重程度和预后的关系。方法选择本院收治的117例CHF患者(病例组)和同期109例健康对照者(对照组),采用流式细胞仪检测其外周血单核细胞中TLR-4、核转录因子kappa B(NF-κB)和髓样分化因子(My D88)的表达情况,分析它们与CHF的心功能分级、浆膜腔积液、再次入院和全因死亡的关系。结果病例组的外周血单核细胞的TLR-4、NF-κB和My D88水平均显著高于对照组(均P<0.05);不同NYHA分级CHF患者的TLR-4(F=4.026,P=0.032)、NF-κB(F=5.152,P=0.025)和My D88(F=7.323,P=0.019)水平具有显著差异;随访期间发生全因死亡患者的TLR-4(t=-2.149,P=0.033)和My D88(t=-2.506,P=0.014)水平显著高于未死亡者;TLR-4作为预测发生全因死亡的灵敏度和特异度分别为83%和77%,而My D88分别为77%和71%。结论 TLR-4信号通路分子与CHF的心功能密切相关,TLR-4和My D88是潜在的全因死亡预测分子。

TACI融合蛋白对免疫球蛋白A肾病大鼠肾脏损害的影响

目的探讨TACI融合蛋白(TACI-Ig)对免疫球蛋白A肾病(IgAN)大鼠肾脏损害的影响。方法将24只SD大鼠随机分为对照组、模型组、TACI-Ig组、药物对照组,每组6只。正常对照组、模型组给予生理盐水,TACI-Ig组给予TACI-Ig(14.36 mg/kg),药物对照组给予醋酸泼尼松(5 mg/kg)。比较各组24 h尿蛋白定量(24h-UP)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、低半乳糖基化IgA1(Gd-IgA1)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核转录因子κB(NF-κB)蛋白及mRNA水平,并分析TACI-Ig对肾脏损害的影响。结果模型组24h-UP水平显著高于正常对照组,而TACI-Ig组、药物对照组24h-UP水平显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。TACI-Ig组血清Scr水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。TACI-Ig组、药物对照组肾组织系膜区沉积免疫复合体的增加受到明显抑制。模型组大鼠血清Gd-IgA1水平高于正常对照组,而低于TACI-Ig组,差异有统计学意义(P<0.01)。药物对照组血清Gd-IgA1水平低于模型组,而高于TACI-Ig组,差异有统计学意义(P<0.01)。TACI-Ig组TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。药物对照组TLR4、MyD88蛋白水平高于TACI-Ig组,差异有统计学意义(P<0.05)。TACI-Ig组TLR4、MyD88、NF-κB mRNA水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TACI-Ig对IgAN有较好的治疗作用,可改善IgAN大鼠肾功能,抑制肾小球系膜基质扩张和系膜细胞增殖。

小鼠骨髓和腹膜腔来源巨噬细胞的功能差异

目的研究骨髓来源巨噬细胞和腹膜腔巨噬细胞的功能差异,为免疫学研究和免疫调节药物评价中巨噬细胞的选择提供依据。方法利用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓单核细胞分化为巨噬细胞,利用巯基乙酸盐培养基诱导腹膜炎获得腹膜腔巨噬细胞,两种巨噬细胞在分别经过酵母多糖(zymosan)、脂多糖(LPS)、雷西莫特(R848)和非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡聚体(CpG)四种Toll样受体(TLR)配体诱导后,实时荧光定量PCR测定巨噬细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA水平,ELISA检测巨噬细胞培养上清液TNF-α、IL-6、MIP-1α、MCP-1含量,流式细胞术分析细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40和主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)的表达。结果两种巨噬细胞在经过不同TLR配体诱导后,炎症因子和趋化因子的mRNA表达水平均有不同程度的增加,腹膜腔巨噬细胞TNF-α、IL-6、MIP-1α、MCP-1分泌水平以及表面CD86和MHCⅡ表达显著高于骨髓来源巨噬细胞。结论骨髓来源巨噬细胞和腹膜腔巨噬细胞均表达炎症因子、趋化因子、共刺激分子和MHCⅡ,腹膜腔巨噬细胞具有更加完整的巨噬细胞功能,在免疫学研究和免疫调节药物评价中可以优选腹膜腔巨噬细胞。

姜黄素对小鼠肝癌细胞体外增殖和凋亡的影响

目的探讨姜黄素对小鼠肝癌Hepa1-6细胞体外增殖和凋亡的影响。方法取处于对数生长期的Hepa1-6细胞,随机分为对照组、10μmol/L组、20μmol/L组和40μmol/L组,分别采用0、10、20、40μmol/L的姜黄素进行干预,通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。RT-qPCR法检测Hepa1-6细胞中凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3及Toll样受体2(TLR2)、IFN-α、IFN-β基因表达。ELISA法检测Hepa1-6细胞培养上清IFN-Ⅰ。对照组、40μmol/L组中Hepa1-6细胞分别与CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞共孵育,流式细胞术检测CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞CD69表达。结果10、20、40μmol/L组Hepa1-6细胞增殖抑制率呈剂量依赖性增加,抑制率依次为(36.45±2.11)%、(46.40±2.08)%、(82.16±3.32)%,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);10、20和40μmol/L组Hepa1-6细胞凋亡比例分别为10.47%、26.66%和49.81%,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。RT-qPCR结果显示,10、20和40μmol/L组中抗凋亡基因Bcl-2转录水平分别是对照组的(0.77±0.06)倍、(0.44±0.06)倍和(0.25±0.08)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);同时,促凋亡基因Caspase-3表达增高,10、20和40μmol/L组中促凋亡基因Caspase-3转录水平分别是对照组的(1.73±0.31)倍、(2.52±0.45)倍和(3.25±0.20)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。随姜黄素浓度的增加,TLR2转录水平逐渐升高,10、20和40μmol/L组TLR2转录水平分别是对照组的(3.56±0.59)倍、(4.93±0.04)倍和(6.60±0.47)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);10、20和40μmol/L组IFN-α转录水平升高,分别为对照组的(4.21±0.22)倍、(5.54±0.39)倍和(8.05±0.93)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);IFN-β转录水平分别为对照组的(3.08±0.51)倍、(5.31±0.55)倍和(8.35±0.59)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-α水平分别为(57.00±8.8)、(82.47±4.42)、(100.37±8.99)pg/mL,对照组为(36.26±6.12)pg/mL,10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-α水平高于对照组(P均<0.01);10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-β水平分别为(60.67±6.81)、(91.33±5.51)、(144.00±10.15)pg/mL,对照组为(44.67±1.15)pg/mL,10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-β水平高于对照组(P均<0.01)。对照组CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞表达CD69水平分别为(24.53±1.39)%、(23.40±2.32)%、(32.33±3.08)%,40μmol/L组CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞表达CD69水平分别为(39.90±3.51)%、(31.47±3.88)%、(50.83±4.74)%,对照组与40μmol/L组CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞CD69水平比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论姜黄素通过调控TLR2分子表达,促进IFN-Ⅰ分泌,从而抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡,同时促进免疫细胞活化。

添加益生菌的肠内营养支持治疗颈动脉狭窄致脑卒中患者的效果评价

目的评价添加益生菌的肠内营养支持治疗颈动脉狭窄致脑卒中患者的临床效果。方法选取2022年1月至2023年7月于河南省第二人民医院就诊的86例脑卒中患者作为研究对象,按随机数表法分为观察组和对照组各43例,对照组患者给予常规肠内营养支持,观察组患者在上述基础上添加益生菌,共治疗14 d。比较两组患者治疗前后的病情恢复情况[美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)、简化巴氏指数量表(BI)]、营养指标[转铁蛋白(TF)、血红蛋白(Hb)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)]、肠道屏障功能[内皮素(ET)、二胺氧化酶(DAO)、血乳酸、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)]、免疫功能[免疫球蛋白A(IgA)、IgG、成熟T淋巴细胞(CD3^(+))、诱导性T细胞(CD4^(+))]和Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路,同时比较两组患者治疗期间的并发症发生情况。结果治疗后,观察组患者的NIHSS评分为(10.14±2.03)分,明显低于对照组的(13.38±2.28)分,BI评分为(67.55±7.33)分,明显高于对照组的(53.80±6.76)分,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患者的TLR4、NF-κB、DAO、ET、血乳酸、I-FABP分别为(2.31±0.54)ng/mL、(104.12±8.76)ng/mL、(13.21±2.14)U/L、(70.55±15.11)ng/L、(1.74±0.56)mg/L、(1.41±0.37)μg/L,明显低于对照组的(3.76±0.67)ng/mL、(128.96±10.19)ng/mL、(16.88±3.37)U/L、(94.36±17.96)ng/L、(2.68±0.73)mg/L、(1.72±0.42)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患者的Hb、Alb、TP、TF、CD3^(+)、CD4^(+)、IgA、IgG分别为(132.87±15.88)g/L、(37.65±3.66)g/L、(69.77±6.52)g/L、(62.38±6.22)g/L、(70.14±5.11)%、(37.86±4.32)%、(1.82±0.38)g/L、(1.58±0.42)g/L,明显高于对照组的(120.74±12.28)g/L、(32.89±3.05)g/L、(61.75±5.86)g/L、(54.88±5.19)g/L、(65.73±4.78)%、(33.28±3.83)%、(1.45±0.30)g/L、(1.26±0.37)g/L,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者的并发症总发生率为6.98%,明显低于对照组的23.26%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论添加益生菌的肠内营养支持可改善颈动脉狭窄致脑卒中患者神经功能、营养状态,提升患者生活自理能力、免疫力,促进肠道屏障功能恢复,调节TLR4/NF-κB信号通路,降低并发症发生风险。

血清ZAG、TLR4及CyPA在癫痫患者中的检测意义及其与癫痫认知功能异常的相关性分析

目的探讨血清锌α2糖蛋白(ZAG)、Toll样受体4(TLR4)及亲环素A(CyPA)在癫痫患者中的检测意义及其与癫痫认知功能异常的相关性。方法回顾性选取2020年10月至2023年10月唐山市人民医院收治的83例癫痫患者作为观察组,根据患者蒙特利尔认知功能评估量表(MoCA)评测结果,将其分为认知功能异常组(n=53)与认知功能正常组(n=30)2个亚组,另选取同期在本院体检的83名健康志愿者作为对照组。比较观察组与对照组血清ZAG、TLR4及CyPA表达水平,采用受试者操作特征(ROC)曲线明确血清ZAG、TLR4及CyPA对癫痫的诊断价值。进一步对比认知功能异常组与认知功能正常组血清ZAG、TLR4及CyPA表达水平的差异,采用Pearson相关性分析对ZAG、TLR4及CyPA与癫痫患者认知功能的相关性进行分析。结果观察组ZAG水平为(34.24±4.26)μg/mL,低于对照组[(48.33±7.21)μg/mL],观察组TLR4、CyPA水平分别为(4.57±1.25)、(5.76±1.35)ng/L,均高于对照组[(1.01±0.23)、(2.15±0.34)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,CyPA、TLR4、ZAG对癫痫的诊断曲线下面积(AUC)分别为0.698、0.721、0.641,3者联合对癫痫的诊断AUC为0.897,AUC明显高于单一指标(P<0.05)。认知功能异常组ZAG水平为(31.45±5.26)μg/mL,低于认知功能正常组[(40.36±5.64)μg/mL],认知功能异常组TLR4、CyPA水平分别为(6.56±1.66)、(7.15±2.47)ng/L,均高于认知功能正常组[(3.64±0.67)、(4.57±1.68)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,ZAG与癫痫患者MoCA评分呈负相关(r=-0.521,P<0.05),TLR4、CyPA与癫痫患者认知功能呈正相关(r=0.483、0.597,P<0.05)。结论血清ZAG、TLR4及CyPA 3者联合对癫痫的诊断及预测具有重要价值,且其与癫痫患者认知功能具有密切关系。

Toll样受体8及其免疫学功能研究进展

Toll样受体8(toll-like receptor8,TLR8)不但能识别某些人工合成的具有抗病毒和抗肿瘤作用的小分子化合物,还可识别单链RNA病毒、鸟嘌呤核苷酸衍生物、特定合成的单链寡核苷酸(oligoribonucleotide,ORN)及双链小干扰RNA序列。活化TLR8启动髓系分化因子88(myoloid differentiation factor 88,MyD88)依赖的信号通路,介导相应免疫应答。对TLR8及其免疫学功能深入系统的研究将对机体抗病毒感染和肿瘤治疗开辟新途径。本文对TLR8及其免疫学功能近年研究进展做了简要总结。

Toll样受体对T细胞功能及代谢的影响

Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)在先天免疫系统中广泛表达,可通过促进抗原提呈细胞(antigen presenting cells,APC)共刺激分子的表达从而间接导致T细胞活化。然而研究发现,TLR也可在T细胞中表达,并可在没有APC的情况下直接调节T细胞的代谢与功能。本文综述了TLR信号对不同T细胞亚群代谢和免疫功能的直接调控作用,为T细胞介导的癌症及自身免疫病等疾病的预防和治疗提供了新的思路。