HMGN1激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导小鼠BV2小胶质细胞活化上调其促炎介质表达

目的 探究高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)对小鼠BV2细胞炎症反应的影响并探究其可能的机制。方法使用(0、 100、 200、 500、 1000、 2000)ng/mL的重组HMGN1孵育BV2细胞6 h。用显微镜观察细胞形态变化,实时定量PCR检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、 IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA水平。随后把小胶质细胞随机分成对照组、模型组、抑制剂组和拮抗剂组。模型组用500 ng/mL的HMGN1处理BV2细胞,拮抗剂组在模型组的基础上加入瑞沙托维(resatorvid)/TAK-242进行干预,使用实时定量PCR和免疫荧光细胞化学染色检测细胞中的M1/M2型标志物的表达情况,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、 Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)和NF-κB抑制物激酶β(IKK-β)的蛋白表达。结果 HMGN1处理后,BV2细胞形态发生明显变化,呈阿米巴样;与0 ng/mL HMGN1组相比,TNF-α、 IL-6、 IL-1β、 MCP-1的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高;M1型标志物iNOS的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高,M2型标志物CD206的水平随HMGN1剂量的升高而降低。与模型组相比,拮抗剂组M1型标志物iNOS的mRNA水平显著降低,M2型标志物CD206的水平显著升高。免疫荧光细胞化学染色结果也显示MI型标志物iNOS在拮抗剂组中的表达降低。Western blot的结果提示,拮抗剂组iNOS、 TLR4、 MyD88、 NF-κB p65和IKK-β的蛋白表达显著降低。结论 HMGN1可能通过激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导BV2小胶质细胞活化来上调其促炎介质的水平。

沙棘黄酮通过调控TLR4/NF-κB信号通路改善大鼠多囊卵巢综合征的作用

目的:探究沙棘黄酮改善大鼠多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)的作用及机制,为PCOS的防治提供新的思路。方法:采用高脂饲料联合灌胃来曲唑法复制PCOS模型,并随机分为模型组、低、高剂量沙棘黄酮组(200、400 mg/kg)及二甲双胍组(100 mg/kg),灌胃21 d后检测相关指标变化。结果:与模型组比较,低、高剂量沙棘黄酮组大鼠卵巢指数、发情间期时像百分率、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)含量、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血清促黄体生成素(LH)活性及睾酮(T)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)含量显著降低(P<0.05,P<0.01),促卵泡刺激素(FSH)活性极显著增加(P<0.01);低、高剂量沙棘黄酮组大鼠卵巢组织病理形态有所改善,Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核转录因子κBp65(NF-κBp65)mRNA及TLR4、MyD88、p-NF-κBp65蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:沙棘黄酮可以改善PCOS大鼠症状,减轻胰岛素抵抗,调节性激素水平,修复卵巢组织病理改变,其机制与抑制TLR4/NF-κB信号通路介导的炎症反应有关。

黄芪糖蛋白干扰lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴抑制细胞焦亡改善佐剂性关节炎大鼠心肌损伤

目的基于长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5/微小RNA 21/Toll样受体4(lncRNA GAS5/miR-21/TLR4)信号轴探究黄芪糖蛋白(HQGP)对佐剂性关节炎(AA)大鼠心肌损伤的作用及机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、HQGP组,每组6只。复制AA模型,第19天开始给药,连续4周。检测各组AA大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(AI),HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构的变化及焦亡小体情况,ELISA检测血清白细胞介素6(IL-6)、IL-18、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测心肌组织LDH释放量,实时荧光定量PCR检测心肌组织核因子κB p65(NF-κB p65)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)的mRNA以及lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴分子的表达,Western blot法检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3和GSDMD蛋白水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠足趾肿胀度、AI显著升高;大鼠心肌纤维溶解、断裂,肌节结构模糊,心肌纤维排列紊乱,组织间有炎性细胞浸润,线粒体嵴明显断裂稀疏,焦亡小体数量增加;血清促炎细胞因子IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著升高;心肌组织中GAS5表达显著降低,miR-21表达显著升高,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3、GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著升高。与模型组比较,HQGP组大鼠足趾肿胀度、AI和心肌组织病理状态明显改善;血清IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著降低;心肌组织中GAS5表达显著升高,miR-21表达显著降低,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3的mRNA和蛋白表达水平显著降低,GSDMD的mRNA表达降低且蛋白水平显著降低。结论HQGP通过上调lncRNA GAS5抑制miR-21/TLR4信号传导,抑制细胞焦亡,减少促炎细胞因子表达,改善AA大鼠心肌损伤。

苦豆碱通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路改善香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤

目的探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法16HBE人支气管上皮细胞经100 mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、100、200)μmol/L Alo共处理后,CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、Western blot法检测细胞凋亡,ELISA检测炎性因子水平;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平。16HBE细胞经100 mL/L CSE和200μmol/L Alo共处理后,采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响。结果CSE暴露可降低16HBE细胞活力,增加LDH释放和细胞凋亡,增强炎症反应和氧化应激水平,且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路;经Alo处理后,细胞活性升高,LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降,且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活;TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用。结论Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤。

白藜芦醇调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对急性脑梗死大鼠神经元损伤的影响

目的探讨白藜芦醇调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路对急性脑梗死(ACI)大鼠神经元损伤的影响。方法大鼠随机分为空白组、梗死组、白藜芦醇组、HMGB1激活剂(重组大鼠HMGB1蛋白,rRHMGB1)组、白藜芦醇+rRHMGB1组,每组18只。除空白组外,其它组大鼠均采用大脑中动脉闭塞法构建急性脑梗死模型,建模成功后1 h开始给药处理,每日给药1次,持续7 d。检测神经功能损伤评分、脑梗死体积比率变化;ELISA法检测梗死区脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平;尼氏染色检测梗死区脑组织存活的神经元数量;TUNEL染色检测梗死区脑组织的神经元凋亡;Western Blot法检测脑组织中Bcl2相关X蛋白(Bax)、TLR4、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、HMGB1、p-NF-κB p65蛋白。结果与空白组比较,梗死组神经功能损伤评分、脑梗死体积比率,梗死区脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,神经元凋亡率及Bax、TLR4、Cleaved Caspase-3、HMGB1、p-NF-κB p65蛋白均升高(P<0.05);梗死区脑组织中存活的神经元数量降低(P<0.05)。与梗死组比较,白藜芦醇组及白藜芦醇+rRHMGB1组神经功能损伤评分,脑梗死体积比率,梗死区脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,神经元凋亡率及Bax、TLR4、Cleaved Caspase-3、HMGB1、p-NF-κB p65蛋白均降低(P<0.05);梗死区脑组织中存活的神经元数量升高(P<0.05)。rRHMGB1组上述对应指标变化趋势均比梗死组升高(P<0.05)。与白藜芦醇组比较,白藜芦醇+rRHMGB1组神经功能损伤评分,脑梗死体积比率,梗死区脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,神经元凋亡率及Bax、TLR4、Cleaved Caspase-3、HMGB1、p-NF-κB p65蛋白均升高(P<0.05);梗死区脑组织中存活的神经元数量降低(P<0.05)。结论白藜芦醇改善急性脑梗死大鼠神经元损伤的机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。

银杏叶提取物基于TLR4/NF-κB通路对骨质疏松大鼠的干预效果及作用机制

目的分析银杏叶提取物基于TLR4/NF-κB通路对骨质疏松大鼠的干预效果及作用机制。方法选取周龄在4~6周的SPF健康雌性SD大鼠40只,随机分对照组(A组)、骨质疏松组(B组)、阳性药物己烯雌酚组(C组)和银杏叶提取物(D组),适应性饲养1周后,第2周进行建模,饲养3个月后起给予药物干预,C组大鼠每日给予己烯雌酚0.05 mg·kg^(-1)·d^(-1),D组大鼠给予银杏叶提取物,以200 mg·kg^(-1)·d^(-1)的剂量给药,给药方式均采用灌胃给药。C组、D组进行药物干预6周,与此同时,A组、B组给予10 mL·kg^(-1)·d^(-1)0.9%氯化钠溶液灌胃。给药周期满6周后,麻醉大鼠成功,处死大鼠,取出股骨组织,检测并观察各组大鼠碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、25-羟基维生素D 3(25-hydroxyvitamin D_(3),25OHD)、抗酒石酸盐酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRACP)、钙离子(calcium ion,Ca^(2+))、镁离子(magnesian ion,Mg^(2+))、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)水平及toll样受体4(toll-like receptoR4,TLR4)、核因子κB(nucleaRfactoRkappa-B,NF-κB)蛋白表达。结果与A组比较,B组、C组、D组ALP、TRACP、MDA、TLR4、NF-κB水平升高,OPG、25OHD、Ca^(2+)、Mg^(2+)、SOD、GSH-Px、CAT水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C组、D组ALP、TRACP、MDA、TLR4、NF-κB水平降低,OPG、25OHD、Ca^(2+)、Mg^(2+)、SOD、GSH-Px、CAT水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与C组比较,D组ALP、TRACP、MDA、TLR4、NF-κB水平降低,OPG、25OHD、Ca^(2+)、Mg^(2+)、SOD、GSH-Px、CAT水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论银杏叶提取可能会通过抑制TLR4/NF-κB通路活化来改善骨质疏松大鼠骨代谢水平及氧化应激反应,影响破骨细胞吸收,同时会调节机体Ca^(2+)、Mg^(2+)水平,未来对临床骨质疏松的治疗有重要意义。

天麻素对缺血缺氧诱导的小胶质细胞中TLR4表达的影响

目的:探究天麻素(GAS)对缺血缺氧性损伤(HIBD)后小胶质细胞toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法:体内创建新生大鼠HIBD模型,将30只3 d龄SD大鼠随机组成3组:假手术组(sham)、HIBD模型组、HIBD模型+GAS干预组(HIBD+G);体外创建BV2细胞氧糖剥夺(OGD)模型,实验随机设置对照组(control)、OGD组、OGD+GAS干预组(OGD+G)。Western Blot和免疫荧光双标染色技术均检测体外各组细胞及体内大鼠模型左侧大脑胼胝体区TLR4的表达。结果:OGD诱导的小胶质细胞中TLR4表达显著增加;GAS干预后TLR4表达显著减少(P<0.05)。结论:GAS激活的小胶质细胞TLR4的表达具有抑制效应,从而对HIBD发挥神经保护作用。

达原饮对Hp感染模型大鼠胃组织和口周皮肤TLR4/NF-κB/NLRP3通路的影响

目的:观察达原饮对幽门螺杆菌(Hp)感染模型大鼠胃组织和口周皮肤Toll样受体4/核因子-κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子的影响,探讨达原饮治疗Hp感染的机制。方法:选取44只雄性SD大鼠,随机分为空白组8只及造模组36只,造模组予以Hp菌液灌胃造模,造模成功后,将造模组随机分为模型组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组、西药组,每组各8只,分别予以相应药物灌胃,空白组、模型组予以等量生理盐水灌胃,灌胃2周。观察大鼠造模前后一般情况改变,苏木精-伊红(HE)染色观察口周皮肤和胃组织病理学变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠口周皮肤和胃组织TLR4、NF-κB、NLRP3表达以及血清中TNF-α、IL-1β表达水平。结果:给药干预后,与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠皮毛柔顺光泽,饮食水量增加,大便逐渐成型,胃黏膜上皮细胞层次基本分明,排列较整齐,炎症细胞浸润减少,口周皮肤角化过度、棘层增厚、毛囊周围轻度炎症细胞浸润等情况均有不同程度改善。与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠胃组织和口周皮肤TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达水平均有不同程度的下调(P<0.05或P<0.01),血清炎症因子TNF-α、IL-1β表达明显下降(P<0.01)。结论:达原饮可能通过干预TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,抑制TLR4、NF-κB、NLRP3及下游炎症因子的表达,减轻Hp感染模型大鼠胃组织和口周皮肤炎症损伤。

Effects of Propofol on The mRNA Expression of Toll-like Receptor 4 in BV-2 Cells During Mimic Ischemia-Reperfusion Injury In Vitro

This study investigated the effects of propofol on the mRNA expression of Toll-like receptor-4 （TLR4） in BV-2 cells during mimic ischemia-reperfusion （I/R） injury in vitro. BV-2 cells, a mouse microglia line, were cultured and divided into 4 groups at random： control group （group C）, ischemia/reperfusion group （group I/R）, low-dose propofol （25 μmol/L） intervention group （group PF25） and high-dose propofol （100 μmol/L） intervention group （group PF100）. The mRNA expression of TLR4 and NF-κB was measured by means of RT-PCR. TNF-α levels in the supernatants of BV-2 cells were detected by ELISA. The results showed that the mRNA expression of TLR4 and NF-κB was significantly higher in groups I/R, PF25 and PF100 than in group C （P〈0.01）. And the TNF-α level in the supernatants was elevated in groups I/R, PF25 and PF100 as compared with that in group C （P〈0.01）. After pre-treatment with propofol, the mRNA expressions of TLR4 and NF-κB and the TNF-α level were significantly decreased in groups PF25 and PF100 in comparison to those in group I/R （P〈0.01）. And the decrease in those indicators was more significant in group PF100 than in group PF25 （P〈0.01）. It was concluded that propofol exerted brain-protecting effects during I/R injury by suppressing the mRNA expressions of TLR4 and NF-κB and deceasing the TNF-α level.

Effect of remifentanil on toll-like receptor 4, NF-κB and IL-6 in rabbit myocardial ischemia/reperfusion model

Objective： To investigate whether remifentanil induced cardioprotecting effect is associated with expression of toll-like receptor 4 （TLR4）, nuclear factor rB （NF-r.B） and serum interleukin -6 （IL-6）. Methods： Fifty rabbits were randomly divided into 5 groups （n=10） according to the treatment： sham operation group （group A）, ischemla-reperfusion group （group B）, low-dose remifentanil group （group C）, mediate-dose remifentanil group （group D）, and high-dose remlfentanil group （group E） Myocardial TLR4 mRNA levels, NF-r.B protein expression and serum levels of IL-6 were observed in 120 min after reperfusion. Results： The myocardial expressions of TLR4 mRNA, NF-rd3 protein and IL-6 level in sera of groups B, C, D and E were elevated compared with group A. However, remifentanil significantly reduced the levels of TLR4 mRNA, NF- r.B protein expression and serum IL-6 in groups C, D and E compared with group B. There were remarkable differences between the groups （P〈O.O1）. Conclusion： Intravenous remifentanil has protective effect against rabbit myocardial ischemia/reperfusion injury. This effect may be associated with TLR4, NF-r.B expressions on myocytes and serum level of IL-6 in a dose-dependent manner

右美托咪定抑制单肺通气兔肺组织炎性细胞TLR4、NF-κB和ICAM-1mRNA的表达

目的观察右美托咪定对兔单肺通气期间肺组织损伤及Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA表达的影响。方法 30只新西兰白兔随机分为3组:双肺通气组(T组)、单肺通气组(O组)、右美托咪定联合单肺通气组(D-O组),每组10只。T组行双肺通气3.5 h,O组、D-O组于双肺通气30 min后行右单肺通气3 h。D-O组于气管切开前静脉泵注右美托咪定1μg/kg(10 min泵注完毕),随后以1μg/(kg·h)的速度持续泵注;T组、O组则持续泵注等容量的生理盐水。各组于实验结束后处死动物,取下左侧肺组织,进行肺组织湿/干(W/D)质量比测量;采用HE染色,光镜下观察双侧肺组织病理学改变;并采用实时定量PCR法检测左侧肺组织TLR4、NF-κB p65、ICAM-1 mRNA的表达。结果与T组比较,O组和D-O组左肺W/D比均显著增加;与O组比较,D-O组左肺W/D比显著降低。与T组比较,O组、D-O组肺组织病理学损伤程度均明显加重,但D-O组肺损伤程度明显较O组减轻。与T组比较,O组肺组织中TLR4、NF-κB p65、ICAM-1 mRNA的表达均显著升高,而D-O组肺组织中TLR4、NF-κB p65、ICAM-1 mRNA表达则显著低于O组。结论右美托咪定通过抑制TLR4、NF-κB p65 mRNA的水平,减轻炎症和兔单肺通气所致的肺组织损伤。

肥胖症伴糖尿病患者血清对人源单核细胞TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨肥胖及伴糖尿病患者血清对人源单核细胞Toll样受体4/转录因子-κB(Toll-like receptor 4/nuclear factor-κB p65,TLR4/NF-κB p65)信号通路的活化作用,了解炎症性免疫反应在肥胖症中的可能作用机制。方法:正常对照组、单纯性肥胖组、肥胖伴糖尿病组每组20例,分离受试者血清,分别用各组血清干预THP-1细胞48 h后,Western印迹和免疫荧光检测THP-1细胞内NF-κB p65蛋白表达;RT-PCR检测TLR4 mRNA的表达;ELISA检测外周血血清干预后细胞培养上清单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)浓度。结果:单纯性肥胖组、肥胖伴糖尿病组血清干预THP-1细胞后,细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白、TLR4 mRNA表达水平较正常对照组均有增高,且肥胖伴糖尿病患者高于单纯性肥胖患者(P<0.05),肥胖症患者NF-κB p65的表达存在核转移现象。正常对照组、单纯性肥胖组和肥胖伴糖尿病组血清孵育THP-1细胞48 h后,培养液上清中MCP-1的浓度分别为(26.4±3.9),(45.8±10.0),(58.0±15.3)pg/mL,肥胖症患者患者明显高于正常对照组,且肥胖伴糖尿病患者明显高于单纯肥胖患者(P<0.05)。结论:单纯性肥胖及肥胖的糖尿病患者的血清可不同程度地诱导单核细胞功能紊乱,这种功能紊乱可能与TLR4/NF-κB信号通路的激活有关。

脑络欣通降低局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质TLR4及TRAF6和TNF-α蛋白的表达

目的观察脑络欣通对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达的影响。方法采用改良线栓法建立大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)大鼠右侧脑缺血模型,SD大鼠随机分为假手术组、模型组、通心络组和脑络欣通组,每组30只;再分为3、7、14 d三个亚组,灌胃给药。Western blot法检测缺血侧额顶叶皮质TLR4、TRAF6的蛋白水平,免疫组织化学染色法检测缺血侧额顶叶皮质缺血半暗带TNF-α的表达。结果与假手术组比较,模型组3、7、14 d,TLR4、TRAF6蛋白水平显著升高;与模型组比较,各治疗组3、14 d的TLR4、TRAF6蛋白水平显著降低,脑络欣通组7 d显著降低;与通心络组比较,脑络欣通组3、7 d的TLR4的蛋白水平降低,14 d的TLR4蛋白水平升高。与假手术组比较,模型组3、7 d的TNF-α蛋白表达的阳性面积显著升高;与模型组比较,脑络欣通组和通心络组7、14 d的TNF-α蛋白表达的阳性面积显著降低,脑络欣通组3 d的TNF-α蛋白表达的阳性面积显著降低;与通心络组比较,脑络欣通组各时间点TNF-α蛋白表达的阳性面积均无明显差异。结论脑络欣通通过降低TLR4、TRAF6、TNF-α蛋白表达,减轻炎症反应,减轻脑缺血再灌注损伤。

三硝基苯磺酸/乙醇灌肠液诱导大鼠溃疡性结肠炎TLR4/NF-κB和PI3K/AKT/NF-κB信号通路的表达及电针的干预作用

目的探讨三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠液诱导大鼠溃疡性结肠炎TLR4/NF-κB和PI3K/AKT/NF-κB信号通路的表达及电针的干预作用。方法雄性Wistar大鼠240只,随机分为正常对照组、模型组、电针组、TLR4单克隆抗体(TLR4mAb)组、LY294002组和TLR4mAb-LY294002联合治疗(T&L)组。以TNBS/乙醇溶液灌肠诱导大鼠溃疡性结肠炎模型,电针组造模同时给予电针足三里穴治疗,TLR4mAb组给予TLR4mAb腹腔注射,LY294002组则予LY294002注射液腹腔注射,T&L组则同时给与上述TLR4mAb和LY294002腹腔注射,共4周,每日行疾病活动指数(DAI)评分。造模4周后处死大鼠取结肠组织标本,评价结肠黏膜损伤指数(CMDI)和组织学损伤指数(TDI);免疫印迹法测定结肠黏膜磷酸化AKT(P-AKT)和活化NF-κB含量;RT-PCR法检测结肠组织中TLR4mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA、NF-κB mRNA、TNF-αmRNA及IL-1βmRNA表达。结果与正常对照组比较,模型组结肠组织TLR4mRNA、PI3K mRNA、P-AKT、活化NF-κB、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达和DAI、CMDI及TDI均显著升高(P<0.01);与模型组比较,TLR4mAb组TLR4mRNA表达显著下降(P<0.01),LY294002组PI3K mRNA、P-AKT表达显著下降(P<0.01),而在电针组和T&L组TLR4mRNA、PI3K mRNA及P-AKT表达均明显降低(P<0.01);与上述变化相对应,与模型组相比,各治疗组活化NF-κB、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达和DAI、CMDI及TDI均明显降低(P<0.05或P<0.01),电针组和T&L组上述6指标优于TLR4mAb组和LY294002组,活化NF-κB与TNF-αmRNA及IL-1βmRNA表达呈正相关(r1=0.579,P<0.05;r2=0.561,P<0.05)。结论电针足三里穴能显著降低实验性溃疡性结肠炎大鼠的NF-κB活性及TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达,从而减轻结肠组织损害程度,这与其阻断TLR4/NF-κB和PI3K/AKT/NF-κB信号通路有密切关系。

苍附导痰汤对肥胖型PCOS-IR模型大鼠卵巢TLR4/NF-κB p65信号通路的影响

目的 探讨苍附导痰汤对肥胖型PCOS-IR (polycystic ovarian syndrome-insulin resistance, PCOS-IR)模型大鼠卵巢Toll受体4(TLR4)/核转录因子κB p65(NF-κB p65)信号通路的调控作用。方法 48只♀大鼠随机分为正常组8只和模型组40只。来曲唑(1 mg·kg^(-1))联合高脂饮食建立肥胖型PCOS-IR大鼠模型,快速革兰染色法观察动情周期,挑选24只模型大鼠随机分为:模型组、阳性药(二甲双胍135 mg·kg^(-1))组、苍附导痰汤高、低剂量(57.96、14.49 g·kg^(-1))组,每组各6只,药物干预21 d。观察动情周期、卵巢和子宫指数变化;血液生化仪测定空腹血糖(FBG)和血脂(甘油三酯TG和总胆固醇TC)变化;酶联免疫吸附(ELISA)法测定空腹胰岛素(FINS)水平;免疫组化法和荧光定量PCR法检测卵巢中TLR4和NF-κB p65蛋白及基因的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,卵巢多囊性改变明显,FBG、TG、TC含量和FINS、HOMA-IR水平上调,卵巢中TLR4和NF-κB p65蛋白及mRNA表达均增加(P<0.05);与模型组比较,苍附导痰汤高剂量组大鼠排卵周期得到改善,卵巢多囊性改变减轻,上述指标出现明显逆转(P<0.05)。结论 苍附导痰汤能有效改善肥胖型PCOS-IR大鼠卵巢排卵和糖脂代谢功能,作用机制可能与调控卵巢TLR4/NF-κB p65信号通路有关。

没食子酸通过拮抗脂多糖诱导的TLR4/NF-κB活化抑制RAW264.7巨噬细胞炎性反应

目的观察没食子酸对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路的影响。方法将巨噬细胞分为空白对照组、LPS组、LPS联合没食子酸组、LPS联合NF-κB抑制剂吡咯二硫代甲酸(PDTC)组和LPS联合地塞米松(DM)组。处理后的细胞培养24 h,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、IL-6水平,实时定量PCR检测TLR4、NF-κB mNRA水平,Western blot法检测p65、p-p65、TLR4、磷酸化的NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的蛋白表达水平。结果 LPS诱导RAW264.7巨噬细胞后TNF-α、IL-1、IL-6水平升高,没食子酸可降低LPS诱导引起的TNF-α、IL-1和IL-6表达水平升高。LPS刺激后TLR4 mRNA及蛋白表达增加,NF-κB活化,没食子酸可拮抗以上作用,阻止NF-κB活化。结论没食子酸可通过TLR4/NF-κB通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应。

TLR4/NF-κB信号通路在同型半胱氨酸致内皮细胞损伤中的作用研究

目的:Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)/核因子-κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)在同型半胱氨酸(Homo-cysteine,Hcy)致动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)过程中损伤内皮细胞的作用机制。方法:体外培养原代人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),用0、50、100、200、500μmol/L Hcy和100μmol/L Hcy+30μmol/L(维生素B12+叶酸)分别与HUVECs培养72 h后,采用MTT法观察Hcy对HUVECs活性的影响;用分光光度比色法检测各组HUVECs中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD);酶免法检测NF-κB;荧光定量PCR和Westernblot分别测TLR4 mRNA和蛋白表达。结果:Hcy可抑制HUVECs的活性,各Hcy干预组与对照组比较细胞活性均降低,其中100、200、500μmol/L Hcy组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而其他组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);随Hcy浓度增加MDA和NF-κB含量和TLR4 mRNA和蛋白表达明显增加,而各实验组SOD活性明显降低,其中,100、200、500μmol/L Hcy组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),其他组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TLR4/NF-κB可能是Hcy致HUVECs损伤的重要机制之一,其中MDA和SOD起了重要的作用。

TLR2 mAb和TLR4 mAb对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜炎症因子IFN-γ、IL-4及IL-17表达的影响

目的探讨TLR2单克隆抗体(toll-like receptor 2 monoclonal antibodies,TLR2 mAb)和TLR4单克隆抗体(toll-like receptor 4 monoclonal antibodies,TLR4 mAb)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性期溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠结肠黏膜的炎症因子IFN-γ、IL-4及IL-17表达的影响。方法50只雄性BALB/c小鼠分为5组(每组10只):对照组(A)、模型组(B)及TLR2 mAb干预组(C)、TLR4mAb干预组(D)、TLR2 mAb和TLR4 mAb联合干预组(E)。A组小鼠饮用蒸馏水7 d;B-E组小鼠仅饮用5%DSS水溶液7 d以产生急性期溃疡性结肠炎模型。造模开始的同时,每隔48 h分别给予C、D、E干预组小鼠以TLR2 mAb(10μg)、TLR4 mAb(10μg)、TLR2 mAb(10μg)+TLR4 mAb(10μg)腹腔内注射,A、B组给予腹腔内注射生理盐水,以观察TLR2 mAb和TLR4 mAb的干预作用。观察指标包括疾病活动指数(disease activityindex,DAI)、结肠组织病理学评分(histopathological score,HS)。造模及干预7 d后处死小鼠,Real-ti me PCR法检测各组结肠黏膜TLR2、TLR4、IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达。结果(1)与A组相比,B组小鼠肠道DAI及HS明显增高(P<0.01)。与B组相比,E组小鼠肠道DAI(P<0.05)和HS(P<0.01)均明显降低。与D组相比,E组小鼠肠道HS明显降低(P<0.05)。(2)与A组相比,B组小鼠结肠黏膜TLR2、TLR4表达明显增高(P<0.01,P<0.05)。与B组相比,C、D、E组小鼠结肠黏膜TLR2、TLR4表达均有不同程度的降低。(3)与A组相比,B组小鼠结肠黏膜IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达明显增高(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。与B组相比,C、D、E组小鼠结肠黏膜IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达均有不同程度的降低。结论TLR2 mAb和TLR4 mAb可能通过下调小鼠结肠黏膜的炎症因子IFN-γ、IL-4、IL-17的mRNA表达而发挥其干预作用。

泼尼松联合阿奇霉素序贯疗法治疗儿童重症肺炎支原体肺炎的疗效及对血清TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白和下游炎性因子水平的影响

目的探讨泼尼松联合阿奇霉素序贯疗法治疗儿童重症肺炎支原体肺炎的疗效及对血清Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白和下游炎性因子水平的影响。方法招募2019年1月至2022年6月唐山市妇幼保健院收治的儿童重症肺炎支原体肺炎患者120例,采用随机数字表法将其分为对照组(采用阿奇霉素治疗,60例)和观察组(采用泼尼松联合阿奇霉素治疗,60例)。治疗4周后,比较两组治疗效果、临床肺部感染量表(CIPS)评分、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白以及下游炎性因子的水平。结果观察组患者的体温恢复时间、咳嗽缓解时间、咳痰缓解时间、喘息缓解时间、肺部啰音消失时间较对照组更快,住院时间更短,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组的体温、白细胞计数、气道分泌物、氧合情况、胸部X射线、痰培养等CIPS项目评分以及总分均较治疗前降低,且观察组评分较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组TLR4、MyD88、NF-κB、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)水平均降低,且观察组水平较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论泼尼松联合阿奇霉素序贯疗法对人体血清TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白及下游炎性因子水平有显著下调作用,可提高儿童重症肺炎支原体肺炎患者的临床疗效。

丹参川芎嗪联合尤瑞克林治疗对老年急性缺血性脑卒中患者脑血流动力学及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨丹参川芎嗪联合尤瑞克林治疗对老年急性缺血性脑卒中(ACI)患者脑血流动力学及Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法选取2017年10月至2019年12月西安市第四医院神经内科收治的126例老年ACI患者为研究对象,按随机数表法分为观察组、对照A组和对照B组,每组42例。在常规治疗基础上,对照A组给予丹参川芎嗪治疗,对照B组给予尤瑞克林治疗,观察组患者则给予丹参川芎嗪联合尤瑞克林治疗,均治疗两周。比较三组患者的临床疗效以及治疗前后的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、日常生活能力评分量表(ADL)、血清氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)]、细胞凋亡有关因子[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Livin、可溶性细胞凋亡因子(sFas)、可溶性细胞凋亡因子配体(sFasL)]、脑血流动力学指标[平均血流速度(Vmean)、平均血流量(Qmean)、脑血管特征性阻抗(ZCV)、动态阻抗(DR)]和TLR4/NF-κB信号通路水平。结果观察组患者的治疗总有效率为92.86%,明显高于对照A组的74.43%和对照B组的73.81%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗后的NIHSS评分明显低于对照A组、对照B组,ADL评分明显高于对照A组、对照B组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗后的血清SOD水平明显高于对照A组、对照B组,血清MDA水平明显低于对照A组、对照B组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗后的血清Bcl-2、Livin水平明显高于对照A组、对照B组,血清sFas、sFasL水平明显低于对照A组、对照B组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗后的Vmean、Qmean水平明显高于对照A组、对照B组,ZCV、DR水平明显低于对照A组、对照B组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗后的TLR4、NF-κB水平明显低于对照A组、对照B组,差异均有统计学意义(P<0.05);除DR外,对照A组和对照B组患者治疗后的上述各项指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论丹参川芎嗪联合尤瑞克林治疗老年ACI能改善患者脑血流动力学,抑制氧化应激,减少神经功能缺损,提高日常生活能力,疗效显著;抑制TLR4/NF-κB信号通路激活、调控凋亡分子可能是两者发挥疗效的一个作用机制。