新型妥曲珠利均质混悬液在鸡体内药代动力学研究

为评价新型妥曲珠利均质混悬液在鸡体内的吸收和代谢情况,试验将16只35日龄健康青脚麻鸡随机分成2组(公母各半),其中对照组经口灌服常规妥曲珠利混悬液,受试药物组经口灌服新型妥曲珠利均质混悬液,剂量均为20 mg/kg(以妥曲珠利计)。给药后在设定时间段经翅静脉采血,分析血浆中妥曲珠利血药浓度。结果显示:新型妥曲珠利均质混悬液平均消除半衰期(T_(1/2β))约为11.13 h,达峰时间(T_(max))为2.0 h,达峰值浓度(C_(max))为26.26μg/mL,均与妥曲珠利混悬液差异不显著(P>0.05),新型妥曲珠利均质混悬液平均药时曲线下面积(AUC)和平均滞留时间(MRT)分别为325.70μg/mL·h和13.04 h,与妥曲珠利混悬液差异显著(0.01<P<0.05),新型妥曲珠利均质混悬液相对生物利用度(F)为105.54%。研究表明,新型妥曲珠利均质混悬液具备与妥曲珠利混悬液相同的药动学特征,并且使用更方便。

托曲珠利对断乳奶犊牛亚临床球虫病的防治效果

为观察托曲珠利(TOL)对断乳奶犊牛亚临床球虫病的临床预防和治疗效果,本试验将30头断乳犊牛根据球虫感染情况分为A组(治疗对照组,n=10)、B组(TOL治疗组,n=10)、C组(预防对照组,n=5)和D组(TOL预防组,n=5),其中,A组和B组犊牛均为球虫阳性,C组和D组犊牛均为球虫阴性,所有犊牛饲养在同一圈舍。B组和D组按15 mg/(kg·bw)口服5%TOL混悬液,A组和C组不给药。记录用药后84 d内犊牛粪便样品评分、平均每克粪便卵囊数(OPG)、增重和平均日增重(ADG),评估TOL对犊牛亚临床球虫病的防治效果。结果显示,与A组相比,B组犊牛粪便样品评分在用药后23、28、35和45 d显著降低(P<0.05),14~32 d的粪便样品OPG极显著降低(P<0.01),ADG无显著差异(P>0.05),增重显著提高(P<0.05)。与C组相比,D组犊牛粪便样品评分在用药后19、21、25和35 d显著降低(P<0.05),14~30 d的粪便样品OPG显著降低(P<0.05),首次检出卵囊平均时间推迟了34 d, ADG无显著差异(P>0.05),增重显著提高(P<0.05)。结果表明,使用TOL可有效治疗和预防犊牛亚临床球虫病,并改善因球虫感染对犊牛体重增长造成的不良影响。

托曲珠利混悬液对人工感染仔猪球虫病的临床预防效果试验

为了研究托曲珠利混悬液对仔猪等孢球虫感染的预防效果,试验对猪源球虫卵囊进行分离纯化及扩繁,建立了人工感染仔猪球虫病模型,通过测定仔猪增重、腹泻情况及克粪便球虫卵囊数(OPG)确定最佳感染剂量,然后将90头3日龄仔猪随机分为感染对照组、参比品组和受试品组,每组30头,仔猪6日龄时对参比品组和受试品组分别灌服5%托曲珠利混悬液受试品和参比品,24 h后3组分别口服最佳感染剂量的孢子化卵囊,测定各组仔猪球虫卵囊阳性率与感染量,计算粪便性状评分、腹泻率、料重比、死亡率、肠道黏膜病变得分等。结果表明:最佳感染剂量为1×10^(4)个孢子化卵囊。受试品组与参比品组粪便中球虫卵囊阳性率在第3~11天极显著低于感染对照组(P<0.01),受试品组与参比品组之间差异不显著(P>0.05),受试品组与参比品组粪便中球虫克卵囊减少率均达100%。受试品组与参比品组第7,14天腹泻率和粪便性状评分差异不显著(P>0.05),均显著低于感染对照组(P<0.05)。受试品组与参比品组仔猪8~14天平均日增重差异不显著(P>0.05),均显著高于感染对照组(P<0.05)。受试品组与参比品组料重比均低于同时期的感染对照组,受试品组死亡率为3.3%,参比品组死亡率为0。受试品组和参比品组小肠黏膜无明显病变,接种卵囊后第7,14天黏膜病变评分差异不显著(P>0.05),均显著低于感染对照组(P<0.05)。说明5%托曲珠利混悬液受试品可有效预防猪等孢球虫病,其临床效果与市售5%托曲珠利混悬液参比品相当。

高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中地克珠利、妥曲珠利及其代谢物残留量

目的建立高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中地克珠利和妥曲珠利及其代谢物残留量的方法。方法样品经0.1%甲酸乙腈提取,提取液用50 mg N-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA)粉末、50 mg C_(18)粉末和150 mg无水硫酸镁进行净化,以5 mmol/L乙酸铵-乙腈作为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾负离子模式扫描,多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)技术进行定性分析,内标法定量。结果地克珠利和妥曲珠利及其代谢物在2~50 ng/mL线性范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99;检出限为0.2~3.0μg/kg,定量限为0.3~6.0μg/kg;回收率范围为80.4%~117.9%,相对标准偏差为1.0%~4.8%。采用该方法对市售的20批次鸡蛋样品进行检测,未在样品中检出地克珠利和妥曲珠利及其代谢物,同时做质控样品,回收率等指标符合分析要求。结论该方法具有快速、选择性好、重现性好等优点,有效提高了检测质量和效率,降低了检测成本,并且易于实现批量化操作;为抗球虫药物残留检测、风险评估提供了科学依据。

高效液相色谱法测定鸡血浆中帕托珠利和托曲珠利含量研究

为建立一种测定鸡血浆中帕托珠利和托曲珠利含量的高效液相色谱法,试验采用C18色谱柱,分别以0.2%乙酸水-乙腈(47∶53)和0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH 3.0)-乙腈(40∶60)为流动相,柱温分别为35℃和30℃,流速为1 mL/min,紫外检测器检测,检测波长分别为250 nm、240 nm,外标法定量建立检测方法。结果显示,帕托珠利和托曲珠利的浓度与色谱峰面积在0.10~20.00μg/mL浓度范围内线性关系良好(R2>0.999),帕托珠利平均加样回收率为89.65%~96.12%,托曲珠利平均加样回收率90.84%~94.27%,批内和批间变异系数均小于5%。结果表明,建立的高效液相色谱法简便、有效、重现性良好,可用于鸡血浆中帕托珠利和托曲珠利含量的测定。

10株柔嫩艾美耳球虫对四种药物的抗药性检测

从4省市10个鸡场分离到10株柔嫩艾养耳球虫，使用AA肉鸡按每只鸡接种10万卵囊，对马杜霉素、百球清、盐霉素和拉沙里菌素的敏感性进行了测试。依照最适抗球虫活性百分率、相对卵囊产量和病变记分减少率3项指标，检测结果显示：30％虫株对马杜霉素和百球清有抗药性，40％虫株对拉沙里菌素有抗药性，70％虫株对盐霉素有抗药性，80％虫株对两种或两种以上的药物有抗药性。虫株的抗药谱带有明显的地方性。此外，对抗药虫株的鉴定标准进行了讨论。

高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中的阿维菌素类、地克珠利、妥曲珠利及其代谢物残留

建立了猪肉中阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素、莫西菌素、乙酰氨基阿维菌素等5种阿维菌素类药物以及地克珠利、妥曲珠利、妥曲珠利砜、妥曲珠利亚砜等4种均三嗪类药物及其代谢物残留的高效液相色谱-串联质谱分析方法。样品采用乙腈提取,ODS粉分散固相萃取净化,经Venusil ASB C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,3.0μm)分离,电喷雾串联四极杆质谱多反应离子监测方式测定。9种分析物在0.005～0.2 mg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.990。猪肉基质中9种分析物在0.005、0.01、0.02 mg/kg加标水平下,回收率为73.2%～91.5%,相对标准偏差为12%～17%。该方法稳定、可靠,可满足猪肉中阿维菌素类、均三嗪类药物残留的检测与确证。

鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留HPLC检测方法的建立

建立了同时检测鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留的高效液相色谱。经乙腈提取，正己烷脱脂，旋转蒸发浓缩后，以0．05mol／L磷酸／三乙胺（pH3．0）：乙腈（40：60）作为流动相，反相高效液相色谱-紫外检测法检测，检测波长240nm。鸡组织中地克殊利和妥曲珠利的回收率分别为92．0％～102．0％和83．4％～89．0％，变异系数为5．9％～12．2％，地克珠利和妥曲珠利的检测限分别为0．012mg／kg和0．010mg／kg，在0．05～110mg／L质量浓度范围内呈良好的线性相关。该法样品处理简单，可同时检测地克珠利和妥曲珠利的残留，且准确度和精密度均符合残留分析的要求。

基质固相分散萃取-高效液相色谱法检测鸡组织中均三嗪类药物残留

本研究建立了基于基质固相分散萃取（MSPD）-高效液相色谱紫外检测法（HPLC／UVD）的同步检测鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留的快速、高效和经济的新方法。正交试验优化后的基质固相分散萃取的最佳条件如下，预混有地克珠利和妥曲珠利混合标准溶液的0．5g鸡组织匀浆在研钵中与2gC18填料研匀，静置2～5min后装萃取柱；萃取柱自底层到上层依次装入玻璃棉、1．5g无水Na2SO4、样品混合物、0．5g无水Na2SO4；压紧后依次用8mL正己烷、8mL甲醇水溶液（1：4，V／V）淋洗，8mL甲醇洗脱，收集洗脱液，50℃旋转蒸发，0．5mL流动相溶解，过0．22μm滤膜后进样检测。最佳色谱条件为C18分析柱（250mm×4．6mmi．d．，5μm）；流动相：0．05mol／L H3PO4-三乙胺（pH3．0）-乙腈（40＋60）；流速：1．0mL／min；检测波长：240nm，AUFS=0．05；进样体积：20μL；柱温：20℃。该检测方法的定量线性范围为50～1000μg／L。在50、500和1000ng／g的添加水平，地克珠利和妥曲珠利从鸡组织中的回收率范围为71．1％～84．0％，相对标准偏差的范围为3．8％～12．1％；同时方法的日内和日间相对标准偏差范围为3．70％～6．77％。地克珠利的检出限为8ng／g（肌肉）和10ng／g（肝、肾），妥曲珠利的检出限为7ng／g（肌肉）和10ng／g（肝、肾）；地克珠利的定量限为12ng／g（肌肉）和15ng／g（肝、肾），妥曲珠利的定量限为10ng／g（肌肉）和15ng／g（肝、肾）。

液质联用方法测定鸡血浆中妥曲珠利及其代谢产物

初步建立肉鸡血浆中抗球虫药物妥曲珠利及其代谢产物妥曲珠利砜的液质联用（LC／MS）定性定量的测定方法。血浆样品加乙腈混匀后离心。取上清液进行液质联用（LC／MS）分析。色谱分析采用C18反相柱，流动相为乙腈-水溶液（体积比为55：45），质谱分析采用ESI离子源、二级串联质谱、负离子检测方式进行检测，妥曲珠利定量分析采用分子离子峰。该方法可以准确测定妥曲珠利的变化并判断代谢物的产生，在1次进样中实现同时检测妥曲珠利及其代谢物，妥曲珠利检测的线性范围为1—500ng·mL^-1，定量检测下限为0．5ng·mL^-1。此方法与液相色谱法相比灵敏度高、可靠、快速，该方法的建立为今后同类药物的定性定量分析提供基础。

在线净化液相色谱-高分辨质谱法快速测定动物源性食品中均三嗪类药物及其代谢产物的残留量

基于在线净化液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术建立了快速测定动物源食品中地克珠利、妥曲珠利、妥曲珠利砜和妥曲珠利亚砜残留的分析方法。样品采用乙腈提取,经Cyclone在线净化柱净化后,将富集的目标物洗脱转至C_(18)分析柱,经色谱分离后,采用四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱以Full Scan/dd MS2模式进行检测。4种化合物在0.5~50 ng/m L范围内呈良好线性,相关系数均大于0.999 4,方法的定量下限(LOQ)为2μg/kg。待测物在4种基质中的加标回收率为80.2%~110.5%,相对标准偏差为2.8%~9.7%。该方法简化了前处理过程,消除了基质干扰。利用精确质量数、保留时间、同位素峰比、二级碎片多个定性信息能够实现快速确证测定。

同时检测2种均三嗪类抗球虫药物残留的样品前处理方法的比较

以均三嗪类抗球虫药物地克珠利和妥曲珠利的鸡组织残留样品为研究对象,采用高效液相色谱(HPLC)分离,紫外(UV)检测,采用乙腈萃取-蒸发浓缩、乙腈萃取-固相萃取(SPE)、基质固相分散萃取(MSPD)和MSPD-SPE4种方法对鸡组织中含地克珠利和妥曲珠利残留的样品的前处理效果进行了比较。前3种方法的平均回收率均达到70%以上,能满足残留分析的要求。其中MSPD方法与其他方法相比,节约时间60%以上,节约溶剂也达60%。鉴于此,采用基质固相分散萃取作为鸡组织样品的前处理方法,建立了鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留的MSPD-HPLC/UV同时分析检测方法。在优化的色谱条件下,方法的线性范围为50～1000μg/L;在50,500,1000μg/kg的添加水平下,地克珠利和妥曲珠利在鸡组织中的回收率为71.13%～84.02%,相对标准偏差(RSD)为3.76%～12.11%;方法的日内和日间测定的RSD范围为3.70%～6.77%。地克珠利和妥曲珠利的检出限均小于10μg/g,定量限均小于20μg/kg。该方法在准确度、精密度上均达到了残留分析的要求。

妥曲珠利在健康和球虫感染肉鸡体内的药动学研究

以高压液相色谱(HPLC)法为定量手段研究了妥曲珠利在健康和柔嫩艾美尔球虫感染肉鸡体内的药动学特征。30日龄艾维茵肉鸡30只,随机分为健康组和柔嫩艾美耳球虫感染组和感染对照组。健康组和柔嫩艾美耳球虫感染组灌服2.5%妥曲珠利溶液(8 mg.kg-1)后,血浆药物浓度-时间数据符合一级吸收二室开放模型,健康组和感染组主要动力学参数分别为:t1/2α为(4.31±0.85)和(4.29±1.03)h,t1/2β为(23.81±2.81)和(23.76±3.31)h,Vd为(0.39±0.09)和(0.40±0.07)L.kg-1,CL(s)为(0.05±0.01)和(0.05±0.01)L.h-1,AUC为(174.15±34.09)和(165.14±23.71)μg.h.mL-1。该结果表明球虫感染肉鸡单次灌服2.5%妥曲珠利溶液后药动学特征与健康鸡比较无显著差异,说明柔嫩艾美耳球虫感染对妥曲珠利在肉鸡体内的药动学过程无明显影响。

妥曲珠利对仔猪生长及球虫感染的影响

为研究抗球虫药物妥曲珠利50g/L悬浮液对仔猪生长和对球虫病防控效果的影响,选取30窝新生仔猪,随机分成2组,即试验组(妥曲珠利50g/L悬浮液组)和对照组,每组15窝。测定仔猪初生重、第14日龄体重、断奶重和第42日龄空腹体重;采集第1周、第2周、第3周、第4周和第5周仔猪粪样,检测猪等孢球虫卵囊。结果显示,第42日龄时,试验组仔猪平均体重显著高于对照组(P<0.01),平均体重高于对照组1.10kg,试验组仔猪均匀度优于对照组。试验组仔猪最大日增重比对照组提高0.033kg。试验组未检出猪等孢球虫卵囊,对照组从第3周开始检出猪等孢球虫卵囊,一直持续到第5周,在第3周时阳性率最高,达到33.33%;个体感染强度(OPG)最高16 000,平均感染强度(OPG)为4 469。试验组仔猪球虫卵囊阳性率和平均感染强度(OPG)均显著低于对照组(P<0.01)。说明妥曲珠利50g/L悬浮液能够有效控制猪等孢球虫感染,提高仔猪体重和均匀度。

百球清对仔猪等孢球虫病治疗效果观察

为了研究百球清(Toltrazuril)对猪等孢球虫病的治疗效果,用15mg/(kg.bw)和7.5mg/(kg.bw)2个剂量的百球清口服治疗感染猪等孢球虫(Isosporasuis)的7日龄仔猪,用粪便性状及腹泻持续时间、OPG值及排卵囊持续时间、增重率、死亡率及剖检病变等指标来判定百球清治疗效果。结果显示,首次给药后第5—6天给药组(Ⅰ、Ⅱ组)仔猪粪便性状全部恢复正常,首次给药后第3—4天Ⅰ、Ⅱ组仔猪粪便卵囊转阴率达100%,仔猪精神、食欲等明显好转,除Ⅰ组死亡1头外,组其余仔猪全部存活。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组仔猪2周内增重率分别为65.1%、61.9%和34.7%,Ⅰ、Ⅱ组仔猪增重率提高显著(P<0.01)。而感染不给药组(Ⅲ组)仔猪首次给药后1周仍有少量卵囊排出,死亡2头,存活仔猪明显消瘦。表明百球清对仔猪等孢球虫病具有良好的治疗效果。

妥曲珠利-地克珠利复方溶液对鸡球虫病的疗效和安全性评价

妥曲珠利-地克珠利复方溶液设高、中、低3个剂量组,其中妥曲珠利使用浓度分别为20、10、5 mg/L,同时以百球清、妥曲珠利、地克珠利为对照药物,对鸡人工感染地克珠利耐药的柔嫩艾美耳球虫株进行临床抗球虫疗效试验。为评价妥曲珠利-地克珠利复方溶液对靶动物(鸡)的安全性,对试验鸡只连续30 d在饮水中按推荐剂量的5、10、20倍给药,分别在第15、30 d通过对增重、饲料报酬、器官系数、血液生化指标、病理组织学等方面进行观察和检测,与不给药对照组比较,以评价复方溶液的使用安全性。结果表明,复方溶液的低、中、高剂量组及百球清组的抗球虫指数(ACI)分别为112.1、182.5、193.9和178.8。鸡只对妥曲珠利-地克珠利复方溶液的耐受性好,有较宽的安全使用范围。

盐酸氯苯胍等4种抗球虫药物对林麝球虫的抑杀效果观察

球虫是危害林麝仔麝的一种肠道原虫,筛选有效的抑杀药物是防控圈养林麝球虫病的关键措施之一。对四川省某林麝养殖场内65只感染球虫的林麝使用盐酸氯苯胍片剂(20 mg/kg体重,1次/d,连喂3 d)、百球清(妥曲珠利)口服液(15 mg/kg体重,只喂1次)、地克珠利粉剂(1 mg/kg体重,连喂3 d)、球威(妥曲珠利可溶性粉剂,10 mg/kg体重,连喂3 d)进行抑杀试验。在投药前1天、投药后第7天和第14天采集粪样进行球虫卵囊数量测定,通过计算卵囊减少率评估其抑杀效果。结果表明:给药后7 d、14 d盐酸氯苯胍组的平均卵囊减少率分别为83.12%、80.56%;百球清组的平均卵囊减少率分别为69.16%、62.24%;地克珠利组的平均卵囊减少率分别为96.91%、74.91%;球威组的平均卵囊减少率分别为13.36%、84.68%。驱虫试验结果表明:盐酸氯苯胍和地克珠利对林麝球虫抑杀效果较好,而妥曲珠利(百球清、球威)对林麝球虫抑杀效果较差。

饲料中妥曲珠利高效液相色谱检测方法的建立

建立妥曲珠利检测的高效液相色谱法,以检测饲料中妥曲珠利。饲料经乙腈提取、硅胶固相萃取柱净化后,以乙腈与0.2%冰乙酸混合溶液(体积比为30:70)为流动相,紫外检测器240 nm测定。结果表明:妥曲珠利的平均回收率为87.82%~105.06%,RSD小于10%;检测限为0.015μg·mL^(-1),配合饲料的定量限为0.25 mg·kg^(-1)。该方法灵敏度高,准确性和重现性良好,适用于配合饲料、浓缩饲料和预混饲料中妥曲珠利的检测。

柔嫩艾美耳球虫对地克珠利和百球清的交叉耐药性检验

分别采用地克珠利和百球清饮水剂对 3株来源和特性不同的柔嫩艾美耳球虫株进行了交叉耐药性检验。结果表明 ,从未接触过百球清的敏感株和由敏感株诱导而成的地克珠利耐药株均表现出对百球清高度敏感 ;而曾使用过二种药物的野外分离虫株 ,则表现出对两种药物高度耐药。由此可见 ,两种药物并不存在必然的交叉耐药性。

妥曲珠利的合成研究

对妥曲珠利(1)的合成工艺进行了改进。4-三氟甲硫基苯酚和2-甲基-4-硝基氯苯通过芳香亲核取代、催化氢化反应后,用安全、无污染的固体光气代替原来剧毒的光气与得到的3-甲基-4-(4-三氟甲硫基苯氧基)-苯胺(3)进行光气化反应,制得3-甲基-4-(4-三氟甲硫基苯氧基)-苯基异氰酸酯(4)。化合物4与甲基脲反应得到异构的缩二脲衍生物(5和6),无需分离,在甲醇钠催化下与碳酸二甲酯环合,制得目标产物,总收率71%。