APPEARANCE PATTERN OF TOOTH GERMS WITH DEVELOPMENTAL PROCESS IN MYLOPHARYNGODON PICEUS

The pharyngeal dental formula of Mylopharyngodon piceus is 4-5 as a rule, and the dentition isasymmetrical. It is difficult to identify each tooth in the larval dentition. In this paper the appearancepattem of tooth germ with developmental process in this fish is described in detail. The formationpattern of the left dentition is contrasted with that of the right one. In the developmental process,the left pharyngeal dentition lacks teeth at position An3. Thus the left dentition is D-type as designatedby Nakajima(1984), while the right one is A-type.

间充质干细胞在小型猪重组牙胚同种异体移植中的免疫调节作用

目的 探索在小型猪重组牙胚同种异体移植实现颌骨内牙再生过程中,间充质干细胞BMMSCs的免疫调节作用。方法 将胚胎小型猪帽状期牙胚解离重组后,移植至成年小型猪拔牙区,BMMSCs经分离鉴定后,单独或与他克莫司FK506联合应用,进行同种异体移植免疫干预;评估受体小型猪的免疫状况和牙再生小型猪百分比。结果 BMMSC组受体小型猪CD3^(+)细胞和CD3^(+)CD8^(+)细胞比例均显著下降(P<0.05),Tregs细胞比例显著上调(P<0.05),有牙再生的小型猪百分比为75%;而BMMSC^(+)FK506组CD3^(+)和CD8^(+)T细胞比例均显著下调(P<0.05),但Tregs比例与空白对照组无显著差异,该组25%小型猪有牙再生;空白对照组的免疫排斥相关指标上调,未发现牙再生。结论 相对于与FK506合用,单独使用BMMSCs更有利于同种异体重组牙胚移植。

替牙列早期上颌慢速扩弓对上颌中段牙及牙槽嵴的影响

目的:研究替牙列早期患儿使用上颌慢速扩弓(slow maxillary expansion,SME)对上颌中段恒前磨牙牙胚、乳磨牙及牙槽嵴的影响。方法:根据纳入、排除标准,选择上颌骨横向发育不足行SME治疗的患儿17例,平均年龄(7.41±0.80)岁。治疗前后均基于锥形束CT(CBCT)并使用Dolphin Imaging软件对上颌前磨牙牙胚位置、上颌乳磨牙位置、上颌中段牙弓及牙槽嵴形态进行矫治疗效分析。采用SPSS 21.0软件包对结果进行统计学分析。结果:扩弓后,上颌第一、二前磨牙牙胚未见明显的相对于上颌牙槽骨骨皮质的颊舌向移动及倾斜变化(P>0.05)。扩弓后,上颌中段牙槽嵴顶有明显扩弓效果(P<0.05);在上颌第二乳磨牙段的牙槽嵴底有扩弓效果(P<0.05),而在上颌第一乳磨牙段的牙槽嵴底治疗前后无统计学差异。扩弓后,上颌第一及第二乳磨牙颊尖间宽度增加(P<0.05),且无相对于牙槽嵴的倾斜(P>0.05)。结论:替牙列早期使用SME扩弓对前磨牙牙胚于牙槽骨内的位置无影响。SME能扩宽及颊倾上颌中段牙槽嵴及牙弓,其牙性扩弓及颊倾的效应大于骨性扩弓及颊倾的效应。替牙列早期SME中,牙位越靠近第一磨牙,其扩弓的骨性效应越大。SME是临床早期扩弓矫治的有效手段。

小鼠早期牙胚发育的三维结构重建研究

目的:三维重建小鼠牙发育早期牙胚的形态结构,对比无牙区发育不全的牙胚(rudimentary bud 2,R2)与磨牙区第一磨牙(the first molar,M1)牙胚的形态差异。方法:选取胚胎12.5 d(E12.5)及胚胎13.5 d(E13.5)小鼠胚胎头部标本,经冠状面连续石蜡切片、苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色后,获取组织学图像数据。图像经Photoshop CC 2018软件处理并配准,用Fiji软件再配准与赋予虚拟CT值后,导入Mimics Research 19.0软件进行三维重建和分析。结果:在重建的三维图像中观察到无牙区R2上皮可向间充质内陷形成蕾状,但其下方无明显的间充质细胞团形成。赋予无牙区R2和磨牙区M1虚拟CT值后,对重建图像进行半定量测量,发现凝聚在无牙区R2蕾状上皮周围的间充质细胞密度较低,凝聚面积较小。此现象可能与无牙区细胞增殖不如磨牙区活跃有关。结论:基于组织学切片的三维重建结果提示,发育早期小鼠无牙区丧失了形成间充质细胞团的能力。

Prrx2对小鼠磨牙胚发育的影响研究

目的:探究配对相关同源框2(paired related homeobox 2,Prrx2)在小鼠磨牙胚不同发育时期的表达及其对磨牙胚发育的影响。方法:利用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)分析配对相关同源框1(paired related homeobox 1,Prrx1)和Prrx2在小鼠胚胎12.5 d(E12.5)至E18.5,出生后1、3、7 d(P1、P3、P7)磨牙牙胚中的表达,以及其在E13.5磨牙、毛发、脑、心脏、结肠、肾、肺、唾液腺等组织中的相对表达情况;使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默Prrx2基因的表达,通过对牙胚行体外器官培养,观察牙胚发育情况;并利用CCK8实验、细胞划痕实验观察牙胚间充质细胞的增殖和迁移能力。结果:RT-qPCR结果显示,相比其他组织,Prrx2在E13.5小鼠胚胎的磨牙、毛发、唾液腺中的表达量更高;相比于Prrx1,Prrx2磨牙胚发育后期(E16.5~E18.5)的表达水平仍高于初始阶段(E13.5);牙胚体外培养结果显示,沉默Prrx2后,牙胚宽度、高度及牙尖高度分别减少了(21.11±3.49)%、(12.08±5.30)%和(22.34±7.56)%(均P<0.05);CCK8实验、细胞划痕实验结果显示,沉默Prrx2后,牙胚间充质细胞增殖能力无变化(P>0.05)、迁移能力降低(P<0.05)。结论:Prrx2在牙胚形态成形的过程中,承担着重要的作用;Prrx2通过促进磨牙胚间充质细胞的迁移能力,进而影响磨牙胚生长和牙尖发育的进程。

氟化物对体外器官培养人牙胚细胞增殖及相关调控蛋白表达的影响

目的 观察氟对牙胚细胞增殖及相关调控蛋白表达的影响。方法 采用人牙胚体外器官培养模型 ,组织学观察低浓度 (10mg·L- 1 )和高浓度 (2 5mg·L- 1 )氟对细胞增殖的影响 ;免疫组织化学及图像分析技术检测氟对细胞周期蛋白D1 (cyclinD1 )和细胞增殖核抗原 (PCNA)表达的影响。结果 氟处理组细胞增殖受抑 ,cyclinD1 和PCNA的表达显著降低 (P <0 .0 1)。结论 氟化物可能通过抑制cyclinD1 和PCNA的表达引起细胞增殖抑制 。

成都地区12岁青少年第三磨牙发育的X线分析

目的通过全景片分析成都地区12岁青少年第三磨牙(M3)的发育情况。方法随机抽取四川大学华西口腔医院影像资料库12岁青少年的全景片449张,根据观察的结果将M3的发育状况进行分级统计,分析不同性别以及上下颌骨和两侧颌骨M3的发育情况。结果 12岁青少年M3的发育情况为:大部分牙冠已钙化,牙冠呈帽状,而且男性与女性的发育情况差别不明显。大部分下颌M3较上颌M3发育得更早,左右两侧M3分别占60.69%和64.25%。上颌M3以垂直向生长为主,下颌M3以近中向生长为主。结论 12岁青少年M3牙冠大部分已经钙化,下颌发育早于上颌。

碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚中表达的免疫组化定位

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）表达与人牙胚发育和分化的关系。方法：采用免疫组化方法观察ｂＦＧＦ在人牙胚发育中的定位。结果：钟状期牙胚中前成釉细胞为ｂＦＧＦ强阳性，星网层可疑；成牙本质细胞为强阳性，牙乳头组织中阳性分布不均，靠近成牙本质细胞的牙乳头细胞为阳性；牙囊细胞阳性，血管内皮细胞呈强阳性；骨组织为阴性。结论：ｂＦＧＦ与成釉细胞、成牙本质细胞的分化和成熟有关。

小鼠牙胚的鸡胚培养模型的建立

目的 采用鸡胚建立一种新的小鼠牙胚体内培养模型。方法 取 15d龄的昆明胎鼠下颌第一磨牙牙胚 ,将其用钨丝固定于孵化 4～ 5d(翼芽期 )的鸡胚内 ,继续孵化 10d后 ,终止培养并取材 ,进行苏木精 -伊红染色 ,常规组织学观察。结果 小鼠牙胚在鸡胚内可继续生长发育 ,从帽状期进入到钟状末期 ,镜下可见分化成熟的成牙本质细胞、成釉细胞和分泌的基质。结论 以翼芽期鸡胚作为小鼠牙胚体内培养的宿主 ,可以保持其发育 ,再现牙齿形成过程中的细胞分化、形态发生的生理过程。

碱性成纤维细胞生长因子对体外大鼠牙胚分化的影响

目的：观察外源性ｂＦＧＦ对体外培养牙胚发育和分化的作用。方法：采用体外培养１７ｄＳＤ胎鼠第一磨牙牙胚，培养液中加入１０ｎｇ／ｍｌ人重组ｂＦＧＦ（ｈｂＦＧＦ），分别培养３、６、９ｄ，组织学观察。结果：外源性ｈｂＦＧＦ可使大鼠牙胚的细胞分化和牙本质基质分泌加快。结论：外源性ｂＦＧＦ可以促进大鼠牙胚的发育，加速牙齿发育。

人牙胚发育过程中Smad 2分子的表达与分布变化

目的 观察转化生长因子 β(transforminggrowthfactor β ,TGF β)特异的细胞内信号转导分子Smad 2在人牙胚发育过程中的表达与分布变化 ,探讨Smad 2在牙发育过程中的作用。方法 制备人牙胚发育各期标本 ,免疫组化方法检测Smad 2分子的表达。结果 Smad 2在牙胚发育的各个时期存在特异的时空分布模式 ,其分布与TGF β有相似之处。结论 首次观察到Smad 2信号分子在人牙胚发育过程中的表达 ,Smad 2作为TGF β细胞内信号分子 ,可能参与上皮 -间充质的信号诱导 。

人牙本质涎蛋白在人牙胚发育过程中的表达和意义

目的 :探讨人牙本质涎蛋白 (humandentinsialoprotein ,hDSP)在人牙胚发育过程中的表达和意义。方法 :用免疫组化方法检测人牙本质涎蛋白在人牙胚不同发育阶段中的表达。结果 :hDSP在蕾状期、帽状期釉上皮以及钟状早期内釉上皮有弱阳性表达 ,钟状中期正在分泌基质的成牙本质细胞、牙本质小管有强阳性表达 ,钟状晚期 ,牙本质小管仍有强阳性表达 ,而成牙本质细胞转为弱阳性表达。前成釉细胞、成釉细胞有一过性表达。前期牙本质始终无阳性表达。牙胚周围骨组织、软骨组织和口腔软组织无阳性表达。结论 :提示hDSP可能参与了牙本质的形成。另外前期牙本质阴性表达 ,表明hDSP蛋白由成牙本质细胞分泌后 ,可能通过成牙本质细胞突起穿过前期牙本质分泌至矿化前沿 。

体外成牙环境对牙髓干细胞和外胚间充质干细胞分化的影响

目的利用牙胚细胞(TGC)作为诱导成牙环境,将牙髓干细胞(DPSC)、外胚间充质干细胞(EMSC)分别与其共培养,观察DPSC和EMSC的分化能力。方法利用出生后4 d的大鼠TGC作为诱导成牙环境,将培养的DPSC、EMSC使用BrdU标记及鉴定后与其共培养,免疫荧光双标检测标记细胞表面抗原牙本质涎蛋白(DSP)的表达和碱性磷酸酶(ALP)活性的变化,免疫组化染色鉴定及图像分析DPSC、EMSC在成牙环境中的分化能力。结果共培养7 d后,EMSC共培养组DSP阳性细胞的转化率高于DPSC共培养组(P<0.05)。免疫组化染色图像分析结果表明共培养7 d后,共培养组与TGC单独培养组差异显著(P<0.05)。共培养组3、7 d后ALP活性明显增高,EMSC共培养组较DPSC共培养组ALP活性高。结论混合培养的TGC作为诱导细胞分化的微环境与DPSC、EMSC共培养后,能够诱导细胞向成牙本质细胞分化,EMSC分化能力高于DPSC。

转化生长因子β1和E-钙黏附分子在人牙胚发育过程中的表达及意义

目的：观察转化生长因子β1（TGF-β1）和E-钙黏附分子（E—cadherin）在人牙胚发育过程中的表达，探讨其对牙齿发育的作用及意义。方法：胎龄8～34周胎儿尸体36例，取连牙胚的下颌骨，制成4μm厚的连续石蜡切片。采用SABC免疫组化方法，观察TGF-β1和E—cadherin在人牙胚中的分布。结果：TGF-β1和E-cadherin在人牙胚发育的不同时期均有表达。TGF-β1在蕾状期和帽状期的牙蕾上皮、牙板、内釉细胞和外釉细胞均呈阳性表达，钟状期在内釉细胞、釉结、中间层、牙板、成釉细胞、成牙本质细胞呈强阳性表达，靠近成牙本质细胞的牙乳头细胞和牙囊呈阳性表达。E—cadherin在蕾状期和帽状期的牙蕾上皮、牙板上皮、钟状早期的成釉细胞、外釉细胞中呈阳性表达，在钟状中期成釉细胞、成牙本质细胞中呈强阳性表达，外釉上皮和靠近成牙本质细胞的牙乳头细胞中呈阳性表达，在钟状晚期接近硬组织处的成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘呈强阳性表达。结论：TGF-β1是参与牙胚细胞分化及形态发生的重要调节因子，E—cadherin与牙釉质和牙本质的发育、分泌及矿化密切相关。

氟对体外器官培养人牙胚骨形成蛋白表达的影响

目的 通过研究氟对牙胚发育早期骨形成蛋白 (BMP)表达的影响 ,初步探讨氟在早期牙胚发育中的可能作用机制。方法 4个月的人胚胎 ,取乳牙胚用RPMI16 4 0培养液进行器官培养 8d。免疫组化法研究 2 5mg·L-1和 5 0mg·L-1的氟对分泌前期牙胚的影响 ,观察培养第 2、4、6、8天时BMP表达的变化。采用图像分析仪对免疫组化染色结果进行灰度分析。结果 BMP的表达主要在造釉器。成釉细胞 ,中间层细胞和星网状层细胞均有BMP表达 ,牙乳头细胞或成牙本质细胞不表达BMP。 2 5mg·L-1氟时从培养第 6天开始BMP表达增强 ;5 0mg·L-1氟时从培养第 2天到第 6天BMP的表达增强 ,培养第 8天时BMP的表达降低。

釉蛋白在大鼠牙胚釉质发育中的表达特征

目的：观察釉蛋白（enamelin，En）在大鼠牙胚发育过程中的表达，探讨其可能的生物学功能。方法：采用免疫组织化学方法，检测出生后第1，3，7，10，14天SD大鼠第一磨牙牙胚中釉蛋白的表达特征。结果：大鼠出生后第1～14天釉蛋白在成釉细胞中的表达随细胞的分化、基质分泌而变化。釉蛋白在出生后第1天的成釉器前成釉细胞中表达为阴性，但在沿牙尖斜面的进入分泌期成釉细胞中表达阳性；在出生后3天的分泌期成釉细胞胞浆中表达阳性，在刚分泌形成的釉牙本质界呈强阳性表达；在出生后第7天的分泌期成釉细胞胞浆中表达阳性，在未矿化完全的釉质基质中为强阳性表达，且釉蛋白随矿化的程度不同而表达强弱不同；在出生后第10天的大鼠牙胚中釉蛋白仅在成熟期成釉细胞中有较弱的阳性表达，在矿化变薄的剩余釉质基质中仍有阳性表达；在出生后第14天的大鼠牙胚中，釉蛋白表达阴性。结论：釉蛋白由成釉细胞分泌，最初分布于釉牙本质界，位于发育中的釉质全层，随釉质成熟而逐渐减少，至釉质完全形成后而表达停止，提示釉蛋白在釉质形成中可能有重要作用。

鼠牙胚的体外培养的实验观察

目的：组织学观察鼠牙胚的体外发育．方法：１７天大鼠（ＳＤ）胚胎的下颌第一磨牙置于微孔滤膜上培养，培养液为ＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ，５０μｇ／ｍｌＶｉｔＣ．结果：体外牙胚可进一步发育，间质细胞分化为成牙本质细胞和形成前期牙本质．

骨形成蛋白-2、4在胎鼠牙胚蕾状期的表达

目的 :观察生长因子骨形成蛋白_2、4 (BMP_2、4 )在牙胚蕾状期的表达 ,探讨二者的作用及其关系 ,为牙组织工程研究打下基础。方法 :选取 14dSD胎鼠下颌第一磨牙牙胚做石蜡切片 ,HE染色光镜观察证实牙胚处于鼠胚胎第 14天蕾状期后 ,则取其前后 2～ 3张切片用免疫组化LsAB法检测BMP_2、4在鼠牙胚蕾状期的分布与表达。结果 :BMP_4在蕾状期牙上皮和牙间质均有表达 ;BMP_2在牙上皮有表达而在牙间质表达不明显。结论 :BMP_2、4在牙胚蕾状期表达模式相似 ,但BMP_2的表达比BMP_4晚 。

钙粘附分子在小鼠牙胚发育中的时空表达

目的 观察钙粘附分子 (cadherins)在小鼠牙胚发育表达的时空顺序及分布 ,揭示钙粘附分子对牙齿发育的形态发生和细胞分化的作用及意义。方法 采用免疫组织化学方法 ,观察钙粘附分子在牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状早期、钟状中期、钟状晚期的表达。结果 钙粘附分子在牙胚发育的不同时期均有表达 ,尤其在钟状中期的成釉细胞、成牙本质细胞染色强阳性。结论 钙粘附分子参与牙齿形态发生及细胞的分化 ,推测钙粘附分子与牙釉质、牙本质的发育、分泌。

细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达

目的:研究细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达,探讨其在牙胚发育中的可能作用。方法:取13.5、14.5、16.5和18.5d(E13.5、E14.5、E16.5和E18.5)的小鼠胚胎以及出生后1和5d(PN1和PN5)的小鼠,分离头部,固定、脱钙、脱水、石蜡包埋、切片,HE染色观察牙胚的组织形态表现,采用免疫组织化学染色方法观察CDC42及PAR3在牙胚发育过程中的表达。结果:HE染色观察,E13.5~E18.5分别为小鼠牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状早期和钟状晚期,PN1小鼠的牙胚中可见分化成熟的成牙本质细胞和成釉细胞,PN5小鼠牙胚可见牙冠部发育完成。免疫组织化学染色,CDC42在E13.5、E14.5和E16.5小鼠牙胚中有广泛表达,在E18.5小鼠牙胚中表达较E13.5、E14.5和E16.5减少,在PN1和PN5小鼠牙胚中主要表达于成牙本质细胞和成釉细胞的分泌端;PAR3弱表达于E13.5和E14.5小鼠牙胚,在E16.5和E18.5小鼠牙胚上皮处表达明显增强,在PN1和PN5小鼠牙胚中表达较E18.5减弱。结论:CDC42和PAR3参与小鼠牙发育的过程,在牙胚发育早期可能参与小鼠牙胚的增殖及迁移,在牙胚发育晚期可能参与了成牙本质细胞和成釉细胞的分化,尤其在成牙本质细胞和成釉细胞极性的形成与维持中可能具有重要作用。