脂肪来源干细胞诱导分化为成牙本质样细胞的体外培养研究

目的:探讨大鼠脂肪来源干细胞(ADSCs)向成牙本质样细胞分化的可能性。方法:SD仔4只,处死后取腹股沟处脂肪组织。采用细胞体外共培养的方法,在牙胚细胞条件培养液(TGC-CM)的诱导下,通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法,观察脂肪来源干细胞向成牙本质样细胞分化的过程。结果:大鼠脂肪来源干细胞在诱导培养基中生长良好。培养7d,在诱导组中细胞出现核极化,有很长的突起,细胞平行排列。抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应。RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP)和牙本质基质蛋白(DMP-1)。结论:含有多种细胞因子的TGC-CM能提供较好的微环境,诱导大鼠脂肪来源干细胞向成牙本质样细胞分化,能为组织工程牙体再生提供种子细胞来源和微环境选择。

牙胚细胞条件培养液诱导大鼠胚胎面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化

目的:探讨牙胚细胞条件培养液(TGC-CM)在诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用。方法:取妊娠12.5dSD大鼠胎鼠第4代下颌突外胚间充质细胞,在牙胚细胞条件培养液(TGC-CM)的诱导下,通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法,探索牙胚细胞条件培养液诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的可能。结果:面突外胚间充质细胞在诱导培养基中生长良好。培养7d,在诱导组中细胞出现核极化,有很长的突起,细胞平行排列。抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应。RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP)和牙本质基质蛋白-1(DMP-1)。结论:面突外胚间充质细胞在含有多种细胞因子的TGC-CM的作用下能分化为成牙本质样细胞,能为研究牙齿的分化和发育提供良好的模型和实验依据。

胎盘间充质干细胞牙向分化的体外研究

目的探讨胎盘间充质干细胞牙向分化的可能性。方法双酶(胶原酶和胰蛋白酶)消化法获得SD大鼠胎盘间充质干细胞,免疫细胞化学鉴定其表型、成脂成骨诱导鉴定其多向分化能力。SD大鼠胎鼠牙胚细胞条件培养基诱导胎盘间充质干细胞14 d,免疫细胞化学检测DSP和DMP-1,RT-PCR及凝胶电泳检测DSPP和DMP-1基因。结果胎盘间充质干细胞表达CD29、CD44和CD105,而不表达CD31、C34和CD45。成骨和成脂诱导后形成钙结节以及脂滴。牙向诱导后的胎盘间充质干细胞形态无明显改变,表达成牙本质细胞特异性相关蛋白-DMP-1、DSP和特异性基因-DMP-1和DSPP。结论胎盘间充质干细胞具有牙向分化的潜能。

骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的体外实验研究

目的:观察骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的能力。方法:分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞、胎鼠牙胚细胞,制备牙胚细胞条件培养液;用牙胚细胞条件培养液诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞7d,通过免疫荧光染色和RT-PCR方法,观测其表达成牙本质细胞特异性标志物—牙本质涎蛋白(DSP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)的情况,明确骨髓间充质干细胞能否向成牙本质样细胞分化。结果:大鼠骨髓间充质干细胞在诱导体系中生长状态良好。培养7d后,部分细胞抗牙本质涎蛋白(DSP)、抗牙本质基质蛋白1(DMP-1)免疫荧光染色呈阳性;RT-PCR显示mRNA水平表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)和牙本质基质蛋白(DMP-1)。结论:大鼠骨髓间充质干细胞在牙胚细胞条件培养液的诱导下可以分化为成牙本质样细胞。

鼠根端乳头条件培养基诱导下的牙周膜细胞膜片与牙本质管和煅烧骨间的牙周膜再生

目的利用鼠根端乳头条件培养基(APTG-CM)与牙周膜细胞(PDLCs)建立间接共培养体系,探讨牙周组织再生的研究。方法胶原酶联合组织块法获得人PDLCs,用波形蛋白和角蛋白鉴定PDLCs的来源。APTG-CM诱导PDLCs 28 d,通过免疫细胞化学法检测PDLCs中骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)、骨涎蛋白(BSP)的表达;观察细胞外部形态。体外构建牙本质管与牙周膜细胞膜片和煅烧骨(CBB)颗粒移植体,植入裸鼠皮下8周,观察牙周组织再生情况。结果体内实验结果显示:经过APTG-CM诱导后,PDLCs在牙本质和CBB表面均有牙骨样基质形成,且在CBB表面有纤维组织的黏附和垂直嵌入。对比而言,PDLCs的生长在CBB的表面要好于在牙本质管。而对照组无纤维的垂直嵌入。结论经过APTG-CM孵育的PDLCs有向成牙骨质细胞谱系转化的功能,APTG-CM有利于牙周组织再生。

2种不同成牙本质诱导液对大鼠脂肪干细胞增殖凋亡的影响

目的探索2种不同的成牙本质诱导液——牙胚条件培养液(TGC-CM)和牙本质非胶原蛋白(DNCPM)对大鼠脂肪干细胞增殖和凋亡的影响。方法 (1)取出生4d的SD乳鼠4只,分别取腹股沟脂肪组织,用酶消化法进行脂肪干细胞分离和培养,免疫细胞化学法对细胞进行鉴定。(2)2种诱导液作用细胞后,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖情况,Annexin/PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果 (1)细胞培养至第2代时表型分子CD44和CD105表达呈阳性。(2)经TGC-CM及DNCPM培养3d后形态上发生极性改变。培养6d后,TGC-CM培养的细胞数量未见明显改变,而DNCPM培养的细胞密度明显降低。(3)MTT结果显示DNCPM组OD值低于对照组及TGC-CM组(P<0.05),流式细胞凋亡检测仪检测DNCPM组细胞凋亡率高于TGC-CM组和对照组(P<0.05)。结论作为大鼠脂肪干细胞向成牙本质样细胞方向分化的诱导液,TGC-CM可能更具优势。