甘蔗磷酸丙糖/磷酸转运蛋白基因ShTPT的克隆与表达分析

磷酸丙糖/磷酸转运蛋白(triose-phosphate/phosphate translocator,TPT)是一种磷酸丙糖转运蛋白,在植物碳代谢途径以及非生物胁迫中发挥重要作用。蔗糖具有广泛的食用价值和重要的经济价值,甘蔗是制糖的主要原料,蔗糖占中国产糖量的80%以上,因此实现甘蔗高产高抗目标至关重要。本研究以甘蔗品种新台糖22号(ROC22)为材料,克隆获得甘蔗磷酸丙糖/磷酸转运蛋白基因ShTPT,利用生物信息学方法对ShTPT进行蛋白理化性质、保守结构域、跨膜结构预测和蛋白序列比对。结果显示:ShTPT基因CDS全长1221 bp,编码406个氨基酸,蛋白分子量为43.63 kDa,等电点(pI)为9.80,富含丙氨酸、亮氨酸,不稳定系数为42.51,亲水系数为0.583,是一种不稳定的疏水性蛋白;ShTPT蛋白不含信号肽并具有9个跨膜结构域;保守结构域预测显示ShTPT含有1个TPT结构域,符合TPT家族特征;进化分析结果显示,ShTPT与高粱SbTPT(XP_002454867.1)、玉米ZmTPT(NP_001105497.1)聚在一起,同源性分别为97.04%和94.13%。进一步对ShTPT进行亚细胞定位分析发现ShTPT定位在叶绿体。甘蔗组织表达模式分析表明,ShTPT主要在叶片中表达,在根部和茎中的表达量极低。在PEG模拟的干旱胁迫条件下ShTPT的表达量表现出升-降-升的趋势,表明其响应干旱胁迫。该研究结果表明ShTPT是一个定位于叶绿体的跨膜转运蛋白,可能参与甘蔗叶片中的原初碳代谢化合物的转运,响应干旱胁迫。本研究初步确定甘蔗ShTPT基因在叶片中碳同化物的转运和非生物胁迫方面发挥重要作用,为进一步研究其功能提供理论依据。

正电子心肌灌注显像剂^(18)F-TPT的合成及生物学分布

采用一步亲核取代法合成18F-(4-氟苯基)三苯基磷(18F-TPT),HPLC(高效液相色谱)分离纯化,研究其在正常NH小鼠体内生物分布,以正常SD大鼠进行Micro PET/CT显像。结果显示,18 F-TPT合成时间约1h,不矫正合成效率为2.5%,放化纯度大于99.5%,体外稳定性良好。小鼠体内分布结果表明,18 F-TPT在心肌浓聚,有较长时间滞留,肝摄取低,血液中清除很快;心与肝放射性摄取比在30、60、90、120min时分别为33.1、14.8、25.7和17.3。Micro PET显像表明,心肌轮廓明显,肺、肝等非靶器官基本不显像。结果提示,18F-TPT是一种较有潜力的心肌灌注显像剂,值得进一步研究。

Topotecan联合顺铂方案治疗非小细胞肺癌脑转移疗效观察

目的评价Topotecan联合顺铂方案治疗非小细胞肺癌脑转移的临床疗效。方法对32例非小细胞肺癌伴脑转移的患者用Topotecan联合顺铂方案进行化疗,观察患者脑部及胸部CT的改变以确定该方案的疗效及毒性反应。结果Topotecan联合顺铂方案治疗组中,脑部病灶客观有效率53.1%,肺部病灶的有效率为56.3%,两者间差异无统计学意义(P>0.05)。结论Topotecan联合顺铂方案是一种有效的治疗非小细胞肺癌脑转移的化疗方案。

TPT-CLSC的协调研究

基于第三方回收商回收模式的闭环供应链(TPT-CLSC)是当前企业界的热点话题,本文构建了TPT-CLSC系统的非合作模型和合作模型,研究了模型的定价策略。研究表明:TPT-CLSC内部成员合作的程度越高,TPT-CLSC渠道获得的利润越大。为促成TPT-CLSC成员的有效合作,文章建立了系统成员之间的协调机制,使得合作之后各方的利润都比非合作时有所增加。最后,通过数值分析证明了协调机制的可行性。

HSV_1-tk/GCV系统联合Topotecan治疗人卵巢癌的动物实验研究

目的探讨Topotecan能否增强HSV1-tk/GCV自杀基因系统对卵巢癌的体内治疗作用。方法先用携带tk基因的重组逆转录病毒上清转染人卵巢癌细胞系SKOV-3,用含G418的培养液筛选抗性克隆(命名为SKOV-3/TK)。PCR方法检测tk基因整合情况。用SKOV-3细胞建立荷瘤鼠模型作为对照组和Topotecan组。用SKOV-3与SKOV-3/TK细胞按8∶2比例混合细胞建立者为HSV1-tk/GCV组和HSV1-tk/GCV联合Topotecan组;从用药第1天开始每5天测量肿瘤体积一次,至用药结束后一周,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,并取瘤组织做病理学检查。结果与对照组比较,HSV1-TK/GCV组和Topotecan组、联合用药组抑瘤率分别为38.8%、25.3%和89.7%,差异均有显著性,P<0.01。组间两两比较差异亦有显著性,P<0.01。病理显示实验组出现不同程度点、片状坏死,以联合用药组为重。结论HSV1-tk/GCV自杀基因系统具有强大的杀伤肿瘤效应及旁观者效应,联合Topotecan化疗将起到协同作用。

人卵巢癌拓扑替康耐药细胞株SKOV3/TPT的建立及生物学特性的研究

目的建立人卵巢癌拓扑替康(TPT)耐药细胞株(SKOV3/TPT),研究其生物学特性和耐药特点。方法模拟临床用药特点,采用大剂量TPT(2160ng/ml)冲击建成人卵巢癌SKOV3/TPT耐药细胞株。MTT法检测多药耐药性,流式细胞仪测定细胞周期、胞内药物的积聚及P糖蛋白(Pgp)表达,从生长曲线、光镜下形态、超微结构等方面比较耐药细胞和SKOV3细胞某些生物学特性的差异。结果成功建立了SKOV3/TPT耐药株,耐药指数为10·67,对喜树碱、米托蒽醌及长春新碱有明显的交叉耐药,对紫杉醇、顺铂、5-氟尿嘧啶、足叶乙甙和甲氨蝶呤敏感。与SKOV3细胞相比,SKOV3/TPT耐药细胞倍增时间延长;G2+M期的比例明显增加(P<0·01);细胞内TPT浓度明显减少(P<0·05);无Pgp过表达。结论SKOV3/TPT细胞株呈中等水平耐药,耐药性稳定,呈非典型的多药耐药特征;对TPT耐药的主要原因可能与细胞内药物浓度降低和细胞周期改变及凋亡有关,与Pgp的过表达无关。

3-TPT型并联机床的精度分析与仿真

为提高3-TPT型并联机床的运动精度，解决杆长误差和铰链间隙误差的影响问题，将3-TPT型并联机床的各条支链作为假想的单开链，利用矩阵法结合从运动学方程微分得到的结论，推导出杆长误差和铰链间隙误差与终端动平台位置误差的映射关系。以东北大学研制的3-TPT型并联机床为模型，在MATLAB下利用蒙特卡洛方法分析了工作空间内杆长误差和铰链间隙误差对终端运动精度的影响规律。仿真结果表明，该机床的终端输出误差较小，约为输入误差的1／15～1／12．5，基于该构型的试验平台可达到较高的运动精度。

基于ANSYS的3-TPT并联机床静刚度有限元分析

利用大型有限元分析软件ANSYS对东北大学研制的3-TPT并联机床在某一工作位置的三种不同受力情况下的机床主体结构进行了线性静态分析,得出了该机床的刚度和应力分布情况,其分析结果和实际情况基本吻合,为机床的局部改进和后续的优化提供了依据。

基于ActiveX技术的3-TPT并联虚轴机床运动仿真

根据最新研制的 3 TPT并联虚轴机床的机构组成 ,对其进行了运动分析 ,建立了虚轴机床的运动模型 ,并得到了并联机构的运动学逆解表达式 ,同时还得到了该并联机构的运动学正解表达式·利用MDT提供的ActiveX操作机制 ,应用面向对象方法和ActiveX技术 ,进行了 3 TPT并联虚轴机床的运动仿真 ,提出了运动仿真的具体实施方法和过程·在VisualBasic开发环境下 ,完成了仿真程序编制工作·通过实际仿真证明 :该并联机构具有运动学正反计算简单。

液相色谱与电感耦合等离子体质谱联用测定海产品中TPT

目的:采用液相色谱与电感耦合等离子体质谱联用分析法(LC-ICP-MS),测定广东沿海海域海产品中三苯基锡含量,探明广东沿海海产品有机锡的污染状况。方法:有代表性地采集广东海域17个海区及部分市售海产品,样品冻干处理制成干粉,加入流动相经超声萃取、离心、过滤等处理后,用液相色谱与电感耦合等离子体质谱联用分析法测定三苯基锡含量。结果:所检测的32种共112个海产品样品中,以湿重计算的三苯基锡含量最高的为324.1 ngSn/g,平均浓度是44.9 ngSn/g。结论:广东沿海海域海产品已受到一定程度的有机锡污染,不同种类海产品中普遍检出三苯基锡。

3-TPT并联机构姿态误差对整体加工精度影响研究

并联机构的误差是影响其精度的重要因素,分析各项误差源对动平台误差的影响,对降低误差、提高并联机构精度有着重要意义。通过分析并联机构姿态误差对整体加工精度的影响,以3-TPT并联机构为例,建立机构运动学方程后进一步建立机构误差的数学模型。在建立误差模型的基础上利用MATLAB软件对机构的误差模型进行仿真分析。对结果分析表明3-TPT并联机构姿态误差对整体加工精度影响在机构工作平面中心点处附近较小且随x轴位置变化精度影响较大。研究对全面分析3-TPT机构工作精度具有重要影响,其结论也可以用于并联机构尺寸优化和误差补偿。

TPT1真核表达载体的构建及在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达

目的:构建TPT1真核表达载体,并转染肝癌细胞系SMMC-7721,为进一步研究奠定基础。方法:通过PCR的方法在TPT1 ORF(open read ing fram e,开放读码框)两侧添加EcoR I和BamH I的识别序列,将其定向插入真核报告表达载体pEGFP-N3中,构成pEGFP-N3TPT1重构体,卡那霉素筛选阳性克隆,碱裂解法抽提质粒,Sanger法测序,VecScreen和BLAST分析测序结果,lipofectAM INE转染肝癌细胞系SMMC-7721,荧光显微镜及RT-PCR方法检测表达效率。结果:成功扩增了带有特异性核酸内切酶识别位点的TPT1 ORF片段,双酶切后连入pEGFP-N3,测序结果证明TPT1正确插入pEGFP-N3中,转导SMMC-7721后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率在30%左右。RT-PCR分析显示,pEGFP-N3TPT1转导的细胞,TPT1mRNA水平较对照高0.78倍(P<0.05)。结论:成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFP-N3TPT1,pEGFP-N3TPT1可在SMMC-7721细胞内高效表达。

3-TPT并联机构模糊PID控制器设计与研究

针对并联机构数学模型不易获得,传统控制方法难以实现精准控制,提出了利用模糊PID控制器对3-TPT并联机构进行控制的方法,克服了简单模糊控制和传统PID控制精度不高的缺点。介绍了PID和模糊控制器各参数的调节作用,分析了模糊PID控制的影响因素,建立了模糊控制规则。通过Simulink建立模糊PID控制模型可以直观了解控制系统结构,操作简便,参数易调节。由仿真结果可知,该方法响应速度快,精度较高,超调较小,可以取得满意的控制效果。这一研究为并联机构的精准控制和优化设计提供了理论基础。

3-TPT平台误差的蒙特卡洛模拟

通过对3-TPT五自由度并联机床机构进行分析,建立了误差分析数学模型,在此基础上,利用蒙特卡洛技术模拟分析了驱动杆杆长误差、虎克铰间隙对运动平台误差的影响.结果表明,该并联机构的输出误差较小,满足精度要求.此研究为实际误差的补偿及机构设计参数的优化奠定了理论基础,同时也为并联机构的误差估计提供了一种方法.

欠秩3-TPT并联角台机构的逆运动力学

针对欠秩3-TPT并联角台机构的结构特点，首先找出了该机构的几何约束，在此基础上建立起了求解机构的反解方程。最后，该机构的移动运动特点被提出和得到证实。

沉默lncRNA TPT1-AS1对非小细胞肺癌生物学行为的影响及机制研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)TPT1-AS1在非小细胞肺癌组织中的表达及对沉默lncRNA TPT1-AS1非小细胞肺癌生物学行为的影响及机制。方法检测非小细胞肺癌组织和癌旁组织lncRNA TPT1-AS1表达情况,做细胞培养及lncRNA TPT1-AS1转染,分为空白组、过表达组、沉默组,过表达组转染si-TPT1-AS1-NC质粒,沉默组转染si-TPT1-AS1质粒,空白组细胞不做任何处理,转染24h后鉴定转染效率。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及PTEN-PI3K-AKT信号通路蛋白表达情况。结果与癌旁组织相比,癌组织TPT1-AS1 mRNA表达量升高(P<0.05)。与空白组相比,过表达组TPT1-AS1 mRNA表达量升高,沉默组TPT1-AS1 mRNA表达量降低(P<0.05),说明转染成功。与过表达组相比,沉默组各时间点细胞增殖率、细胞迁移数、侵袭数、p-PI3K、p-AKT、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,凋亡率、PTEN、Bax蛋白表达量升高(P<0.05)。结论lncRNA TPT1-AS1在非小细胞肺癌组织高表达,沉默lncRNA TPT1-AS1可抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡,其机制可能与调控PTEN-PI3K-AKT信号通路相关。

3-TPT并联机床的误差分析

并联机床作为新一代的数控机床,虽然较传统机床有许多优点,但其精度还不是很好。以3-TPT并联机床为例,分析驱动杆杆长误差以及铰链点位置误差对其运动平台位置误差的影响,建立了误差模型,并用MATLAB软件进行了仿真。从仿真结果可以看出:运动平台的位置误差随着机床结构尺寸的增加而增大,离定平台越远位置误差越大。通过分析仿真结果,为机床机构的进一步优化以及误差补偿奠定了基础。

TPT1表达载体的构建及在肝细胞系L-02中的表达

目的构建肝细胞癌高表达基因TPT1真核表达载体,并转导肝细胞系L-02,为进一步研究其在肝细胞癌发生、发展过程中的作用奠定基础。方法通过PCR方法在TPT1 ORF两侧添加EcoRⅠ和BamHⅠ的识别序列而将其定向插入真核报告表达载体pEGFP-N3中,构成pEGFP-N3TPT1重构体,卡那霉素筛选阳性克隆,碱裂解法抽提质粒,Sanger法测序,VecScreen和BLAST分析测序结果,lipofectAM INE转导肝细胞系L-02,荧光显微镜及RT-PCR方法检测表达情况。结果将TPT1成功插入pEGFP-N3中,转导L-02后,在荧光显微镜下,可见明亮的绿色荧光。pEGFP-N3TPT1转导的细胞,TPT1 mRNA水平较对照高1.59倍(P<0.05)。结论成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFP-N3TPT1,pEGFP-N3TPT1可在L-02细胞内高效表达。