Advances in Researches of Extraction Processes of Total Saponins of Pnanx Notoginseng

Traditional extraction methods of total saponins of Panax notoginseng include cold soaking method,water decoction method,alcohol reflux method,percolation method,macroporous resin adsorption method,and accelerated solvent extraction( ASE) method. Modern extraction methods include ultrasonic extraction,microwave assisted extraction,supercritical CO_2 extraction,microbial fermentation assisted extraction,neural network model optimized extraction method,and multi-stage countercurrent extraction method. This paper discussed principles of these methods and compared their advantages and disadvantages.

基线等比增减设计法优选PNS/TGCO组分对实验性气虚血瘀型冠心病的影响研究

目的:初步探索三七总皂苷(PNS)和山茱萸总苷(TGCO)配伍治疗气虚血瘀型冠心病的作用及特点。方法:采用基线等比增减设计法拟定PNS/TGCO组合配比,观察不同比例组合的有效组分对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血的影响以及对正常小鼠耐缺氧时间的影响。结果:处方1、2、3及血塞通有一定改善大鼠心肌缺血程度的作用,处方4、5、6与对照组比较无显著性差异;处方3、4、5、6有一定抗小鼠缺氧的作用,处方1、2及血塞通组与对照组比较无显著性差异。结论:处方3既有一定改善大鼠心肌缺血的作用又有一定抗小鼠缺氧的作用,为PNS/TGCO治疗气虚血瘀型冠心病有效组分的最佳配比。

三七皂苷PNS-5的溶血性及生物免疫活性研究

目的:研究三七皂苷PNS-5的溶血性及生物免疫活性。方法:常规方法提取PNS,大孔树脂柱层析分离纯化得PNS-5。溶血试验测定红细胞溶血率,脾淋巴细胞增殖反应测定PNS-5的生物免疫活性。结果:PNS-5溶血性较小,其HD50大于8mg/ml;PNS-5(0.1μg/ml)显著促进了ConA和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应。结论:PNS-5安全性好,能促进细胞和体液免疫。

三七总皂苷对心肌缺血再灌注中中性粒细胞核因子-κB活化及其粘附的影响

目的 研究三七总皂苷对心肌缺血 -再灌注时中性粒细胞 (PMN)内核因子 κB(NF κB)活性变化、细胞间粘附分子 (ICAM 1)表达及中性粒细胞粘附的影响。方法 新西兰兔 2 4只分为①缺血 -再灌注组 (I R) :结扎兔左冠状动脉前降支造成心肌缺血 4 5min后再开放 ;②三七总皂苷 (PNS)预处理组 (IR +PNS) :在心肌缺血前 10min静脉注射PNS(10 0mg·kg-1) ;③假手术对照组 (Sham) ;每组又分缺血前(0 )、再灌注后 30、6 0、90、12 0、2 4 0、36 0min时相点。用流式细胞仪检测中性粒细胞ICAM 1的表达 ,凝胶电泳迁移率分析检测NF κB的活性 ,测定中性粒细胞与脐静脉内皮细胞(EC 340 )的粘附率。结果 在缺血 -再灌注组中心肌再灌注 30min后NF κB活性开始增高 ,12 0min达到高峰 ,之后活性下降 ;中性粒细胞ICAM 1的表达在心肌再灌注 12 0min开始增高 ,并与并与中性粒细胞粘附率升高有相关性 ;在三七总皂苷预处理组 ,PNS能抑制NF κB的活化及中性粒细胞ICAM 1的表达和中性粒细胞粘附。结论 心肌缺血 -再灌注时刺激NF κB的活化 ,启动中性粒细胞ICAM 1的表达而参与缺血 -再灌注损伤的发生过程 ;三七总皂苷能抑制中性粒细胞内核因子 κB的活化 。

三七总皂苷含量测定方法及超声提取工艺研究

[目的]确定三七总皂苷含量测定方法,优化其超声提取工艺。[方法]香草醛-高氯酸法测定总皂苷的含量,正交试验优化其提取工艺。[结果]含量测定检测波长为560nm。人参皂苷Rg1在0.0083-0.0496mg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.9994),平均回收率为99.3%(n=4),RSD=3.4%。最佳提取工艺条件为:超声时间50min,温度40℃,料液比为1∶12,提取2次。[结论]含量测定方法简便、准确、重现性好;提取工艺经济、合理,值得进一步推广。

三七总皂苷对心肌缺血再灌注损伤保护作用的分子机制

目的 :研究心肌缺血再灌注时心肌组织细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达、中性粒细胞浸润与核因子 κB(NF κB)活性变化的关系及三七总皂苷的心肌保护作用。方法 :新西兰兔 15 2只分为 :①缺血再灌注组 (IR组 ) :结扎兔左冠状动脉前降支造成心肌缺血 4 5min后再开放 ;②三七总皂苷 (PNS)预处理组 (IR +PNS组 ) :在心肌缺血前 10min静脉注射PNS(10 0mg/kg) ;③假手术对照组 (Sham组 )。每组又分缺血前 (0 ) ,再灌注后 30 ,6 0 ,90 ,12 0 ,2 4 0 ,36 0min时相点。用免疫印迹法 (Westernblot)检测心肌组织ICAM 1的表达 ,凝胶电泳迁移率分析检测心肌组织NF κB的活性 ,髓过氧化酶法 (MPO)定量测定心肌组织中浸润的中性粒细胞。结果 :与缺血前比较 ,在缺血再灌注组中心肌再灌注 30min后NF κB活性开始增高 ,12 0min后达到高峰 ,之后活性有所下降 ,但仍明显高于缺血前 (P <0 .0 5 ) ;心肌ICAM 1的表达在心肌再灌注 12 0min后开始增高(P <0 .0 5 ) ,并与中性粒细胞浸润升高有相关性 (r =0 .94 3,P <0 .0 5 ) ;在三七总皂苷预处理组 ,PNS能抑制NF κB的活化及中性粒细胞浸润 ,与IR组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :心肌缺血再灌注能刺激心肌NF κB的活化 ,活化的NF κB启动ICAM 1的表达而参与缺血再灌注损?

三七总皂苷对烫伤后核因子-κB及肿瘤坏死因子的影响

目的 :观察不同剂量的三七总皂苷对严重烫伤小鼠腹腔巨噬细胞内核因子 κB(NF κB)活性及肿瘤坏死因子(TNF α)mRNA的影响 ,阐明三七总皂苷对巨噬细胞分泌TNF α影响的机制 ,探索体外运用该药的最佳剂量。方法 :以 15 %体表面积Ⅲ度烫伤小鼠为模型 ,收集腹腔巨噬细胞 ,电泳迁移率改变分析法测NF κB的活性 ,反转录PCR测TNF αmRNA的表达。结果 :烫伤后巨噬细胞内NF κB活性与TNF αmRNA的表达均显著升高 ,三七总皂苷在一定的浓度范围内呈剂量依赖性的抑制NF κB活性与TNF αmRNA的表达 ,以 0 .8mg·mL-1的剂量最明显 ,两者变化趋势相类似。结论 :三七总皂苷可能通过抑制NF κB活性而降低TNF αmRNA的表达。

三七总皂甙对心肌缺血-再灌注中中性粒细胞浸润的影响及其核转录机制的实验研究

目的 研究三七总皂甙对心肌缺血 -再灌注时中性粒细胞 (PMN)内核因子 -kB (NF -kB)活性变化、细胞间粘附分子 (ICAM - 1)表达及中性粒细胞浸润的影响。方法 新西兰兔 12 4只随机分为以下 3组 :①缺血 -再灌注组 (IR) :结扎兔左冠状动脉前降支造成心肌缺血 4 5min后再开放 ;②三七总皂甙 (PNS)预处理组 (IR +PNS) :在心肌缺血前 10min静脉注射PNS (10 0mg/kg) ;③假手术对照组 ;每组又分缺血前、再灌注后 30、 6 0、 90、 12 0、 2 4 0、 36 0min时相点。用流式细胞仪检测中性粒细胞ICAM - 1的表达 ;用凝胶电泳迁移率分析检测NF -kB的活性 ;用髓过氧化酶法 (MPO)定量测定心肌组织中浸润的中性粒细胞。结果 在缺血 -再灌注组中心肌再灌注 30min后NF -kB活性开始增高 ,12 0min达到高峰 ,之后活性下降 ;中性粒细胞ICAM - 1的表达在心肌再灌注 12 0min开始增高 ,并与中性粒细胞的心肌浸润增加有相关性 ;在三七总皂甙预处理组 ,PNS能抑制NF -kB的活化及中性粒细胞ICAM - 1的表达和中性粒细胞心肌浸润。结论 心肌缺血 -再灌注时能刺激中性粒细胞内NF -kB的活化 ,活化的NF -kB启动中性粒细胞ICAM - 1的表达而参与心肌缺血 -再灌注损伤的发生过程 ;三七总皂甙能抑制中性粒细胞内核因子 -kB的活化 。

三七总皂甙对骨髓基质细胞成骨分化及成骨作用的调节

目的探讨三七总皂甙对骨髓基质细胞体外成骨分化及成骨作用的影响。方法分离、纯化大鼠骨髓基质细胞（bone marrow strowal cells,BMSCs）,采用常规培养液、成骨诱导液及含100 mg/L PNS的成骨诱导液培养,对各组细胞进行形态学观察,采用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、茜素红染色方法及ELISA法观察各组细胞增殖、ALP活性、矿化结节的形成及RANKL的表达。结果骨诱导组、PNS组较培养液组细胞增殖明显（P〈0.05）,而PNS组高于骨诱导组（P〈0.05）;骨诱导组、PNS组ALP活性、钙结节形成高于培养液组（P〈0.01）,PNS组高于骨诱导组（P〈0.05）;骨诱导组、PNS组RANKL表达低于培养液组（P〈0.05）,PNS组低于骨诱导组（P〈0.05）。结论BMSCs成骨诱导过程中,PNS可促进其成骨分化、下调其RANKL表达从而具有抑制破骨细胞生成的潜能。

三七总皂苷/山茱萸总皂苷组分对犬冠状动脉结扎缺血心肌的保护作用研究

目的观察三七总皂苷/山茱萸总苷组分(PNS/TGCO)不同剂量对犬冠状动脉结扎造成心肌梗塞模型的保护作用。方法杂种犬随机分为模型对照组,PNS/TGCO大(40 mg/kg)、中(20 mg/kg)、小(10 mg/kg)剂量组、血塞通胶囊组(20mg/kg)。采用结扎麻醉犬冠状动脉左前降支造成急性心肌缺血梗塞损伤,十二指肠给药后,可显著减少冠脉结扎所致的∑-ST、N-ST抬高,用硝基四氮唑蓝染色,观察心脏梗塞范围,检测血清中肌酸磷酸激酶(CPK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化。结果 PNS/TGCO组分大、中组可显著降低犬冠脉结扎后心肌缺血的程度,缩小心肌缺血的范围;显著降低犬冠脉结扎后血清LDH、CPK活性。结论 PNS/TGCO组分对急性心肌缺血犬具有明显的保护作用。

三七总皂苷对人脐静脉内皮细胞的促血管新生作用

目的:研究三七总皂苷(PNS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖作用。方法:采用体外培养HUVEC的方法,通过XTT法以及细胞计数法观察对细胞的增殖作用;细胞侵入实验观察细胞迁移的能力。结果:PNS对HUVEC有促增殖作用,XTT实验中100μg/ml浓度增殖率为(33.58±2.41)%;在细胞计数实验100μg/ml浓度增殖率为(94.15±10.96)%;在细胞侵入实验中100μg/ml浓度侵入率为(42.64±9.50)%。结论:PNS能够促进HUVEC的增殖与侵入。

三七总皂甙对大鼠骨髓基质细胞向神经样细胞增生、分化的影响

目的研究三七总皂甙对大鼠骨髓基质细胞增生及向神经细胞分化的影响。方法实验将分离、纯化的大鼠骨髓基质细胞(bone marrow strowal cells,BMSCs)分为3组——对照组、诱导组和PNS组,分别采用常规培养液、常规培养液加入二甲亚砜(DMSO)和丁羟回醚(BHA)的诱导分化液以及含100mg/LPNS的诱导分化液进行培养,然后对各组细胞分别进行形态学观察,应用MTT法检测BMSCs增生及免疫组织化学方法检测BMSCs的Nestin表达。结果诱导6h后,少数BMSCs呈锥形,细胞突起增多伸长,类似神经元。继续诱导培养后细胞突起增多,突起相互连接成网状。诱导分化后细胞Nestin免疫染色阳性,PNS组阳性率>诱导组>对照组(P<0.05)。诱导组、对照组细胞增生良好,二者比较无显著差异(P>0.05),PNS组细胞增生明显,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论三七总皂甙可明显促进骨髓基质细胞向神经细胞的分化和增生。

大孔吸附树脂富集三七总皂苷的工艺研究

目的:建立三七总皂苷的大孔吸附树脂吸附纯化的工艺条件及参数。方法:以三七总皂苷的含量为考察指标,对树脂吸附容量、洗脱溶酶及其用量进行了考察。结果:通过大孔吸附树脂富集与纯化后三七总皂苷洗脱率达80%以上,70%乙醇洗脱液干燥后的总固形物中三七总皂苷纯度可达81.6%。结果:三七提取物上D101大孔吸附树脂,以水洗脱后,以70%乙醇洗脱可以达到理想的结果。

三七总皂甙治疗胫腓骨骨折的临床观察

目的:探讨三七总皂甙对胫腓骨骨折的治疗作用。方法:将84例闭合性胫腓骨骨折患者随机分为治疗组44例、对照组40例,所有均行钢板内固定术。治疗组予以三七总皂甙450mg溶于0.9%氯化钠注射液250ml日一次静脉滴注持续45天,其它治疗与对照组相同。对病人的疼痛、肿胀、关节活动度及骨折的愈合进行评估。结果:PNS能明显减轻疼痛,促进骨折愈合及功能康复,提高总有效率。结论:三七总皂甙能明显减轻肿胀、疼痛等胫腓骨骨折症状,促进骨折愈合。

利用大孔树脂吸附法分离纯化三七总皂苷的工艺研究

研究了大孔树脂吸附法分离纯化三七总皂苷的工艺,利用3种不同类型的树脂对三七总皂苷的静态吸附-洗脱性能的效果进行了试验,确定选用洗脱率高达89.5%的D101型树脂。再根据选用的D101型树脂对洗脱溶媒的选择、吸附容量的确定、洗脱溶媒的用量等纯化工艺条件参数进行了研究和验证试验,最后确定了最佳工艺条件。

三七总皂甙对大鼠骨髓基质细胞分化为神经样细胞中NGF表达的影响

目的研究三七总皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对大鼠骨髓基质细胞(bone marrow strowal cells,BMSCs)分化为神经样细胞中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)表达的影响。方法分离、纯化大鼠骨髓基质细胞(BMSCs),实验分对照组、诱导组、PNS组,分别采用常规培养液,常规培养液加入二甲亚砜(DMSO)、丁羟回醚(BHA)的诱导分化液及含100mg/LPNS的诱导分化液培养;观察细胞形态学变化,采用免疫组化及ELISA法了解细胞Nestin及NGF的表达。结果骨髓基质细胞体外诱导分化6h即出现形态学变化,表现为细胞胞体呈球形,突起增多,形态类似神经元。免疫组化显示Nestin染色阳性;诱导组、PNS组NGF表达明显低于对照组(P<0.01),PNS组高于诱导组(P<0.05～P<0.01)。结论骨髓基质细胞在体外可以定向诱导为神经细胞,诱导分化后NGF表达下降,PNS可以促进其神经诱导后NGF的表达。

三七总皂甙促进骨折愈合作用的实验研究

目的探讨三七总皂甙(total saponins of panax notoginseng)在骨折愈合中的作用,为其临床应用提供实验依据。方法在36只雄性SD大鼠左桡骨形成骨折模型,后随机分成对照组和PNS组,予以PNS100mg/(kg.d)腹腔内注射,对照组予以等量盐水。在骨折后7天、14天、21天X线观察骨折愈合及骨痂形成情况;HE染色了解骨痂形成情况;评价全血黏度和血浆黏度水平。结果X线显示PNS组骨痂形成明显加快;HE染色显示PNS组骨折断端成骨细胞数目及骨痂增多;PNS组全血黏度和血浆黏度降低。结论PNS可低全血黏度及血浆黏度,改善血液流变性和骨折部位的血供,从而利于骨折愈合。

三七总皂甙对实验性骨折愈合过程中低氧诱导因子-1αmRNA表达的影响

目的:探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在骨折愈合过程中的表达及三七总皂甙(total saponins of panax notoginseng,PNS)的干预作用。方法:在36只雄性SD大鼠左桡骨形成骨折模型,后随机分成对照组和PNS组,予以PNS100mg/kg/d腹腔内注射,对照组予以等量盐水。在骨折后7,14,21天X线观察骨折愈合及骨痂形成情况;HE染色了解骨痂形成情况;RT-PCR方法检测骨痂组织HIF-1αmRNA的表达。结果:X线显示PNS组骨痂形成明显加快,HE染色显示骨折断端成骨细胞数目及骨痂增多;对照组HIF-1αmRNA7天表达较低、14天达峰值、21天下降;PNS组7天、14天时点表达高于对照组(P<0.05),21天低于对照组P<0.05)。结论:PNS可上调骨折愈合过程中骨痂组织HIF-1α的表达,改善骨折部位的血供,促进骨折愈合。

三七总皂甙对颅脑外伤术后深静脉血栓形成的防治作用

目的探讨三七总皂甙对颅脑外伤患者术后深静脉血栓形成的防治作用。方法回顾性分析我科2011年1月至2013年12月颅脑外伤手术患者173例,于术后第3天使用三七总皂甙防治深静脉血栓形成,使用凝血全套及下肢深静脉彩色超声评价患者有无深静脉血栓形成,并与文献资料相比较。结果所有患者仅6例出现深静脉血栓,使用血栓通注射液后复查彩色超声血栓消失。结论使用三七总皂甙可降低颅脑外伤术后深静脉血栓形成发生率,并对深静脉血栓具有良好的治疗作用。

三七总皂苷对小鼠肝脏谷胱甘肽-S-转移酶的抑制作用及其动力学分析

目的:研究三七总皂苷(total saponins of Panax notoginseng,PNS)对小鼠肝脏谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GST)的抑制作用及其酶动力学。方法:采用差速离心法制备小鼠胞质液酶,用半数效量概率单位法及Lineweaver-Burk双倒数作图法求得小鼠肝脏GST的米氏常数(Km)、最大反应速度(Vmax)和三七总皂苷对小鼠肝脏GST的半数抑制浓度(IC50)以及判断三七总皂苷对GST的抑制类型和抑制常数(KI,KIS)。结果:三七总皂苷对小鼠肝脏GST有抑制作用,其IC50是189.54 mg.L-1;对底物还原型谷胱甘肽(GSH),GST的Km是0.456 3 mmol.L-1,Vmax是476.19 U.mg-1;对底物1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB),GST的Km是0.109 7 mmol.L-1,Vmax是400.00 U.mg-1。对底物GSH,三七总皂苷对小鼠肝脏GST属于混合性抑制,其抑制常数KI是0.27 mg.L-1,KIS是0.68 mg.L-1;对底物CDNB,三七总皂苷对小鼠肝脏GST属于混合性抑制,其抑制常数KI是0.21 mg.L-1,KIS是0.66 mg.L-1。结论:三七总皂苷对小鼠肝脏GST的活性有明显抑制作用。