重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB对人体肠上皮细胞层功能的影响

利用Transwell小室体外建立人结肠细胞T84上皮细胞层,分析不同质量浓度重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB(1 000、100、10ng/mL)对上皮细胞层跨膜电阻(TER)的影响;通过免疫荧光染色分析TcdB对上皮细胞层结构的影响;运用荧光标记葡聚糖作为指示剂,检测毒素作用后上皮细胞层的旁通路渗透情况;通过细胞毒性分析,检测上皮细胞层功能受损情况下,TcdB的跨膜渗透。结果发现:重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB能引起剂量依赖性单层上皮组织跨膜电阻降低和渗透性增加,在24h内质量浓度为1 000、100、10ng/mL的TcdB能导致上皮细胞层分别丧失100%、70%、50%电阻力,同时分别引起30%、20%、10%的葡聚糖渗透;上皮细胞层受损后,大分子毒素通过旁通路的非正常跨膜渗透也增加。共聚焦分析显示上皮细胞层的细胞间紧密连接结构受损。综上所述,艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB介导的体外培养人T84肠上皮细胞层功能损伤主要表现为电生理学功能异常,旁通路渗透性增加,细胞间紧密连接结构破坏。

艰难梭菌引起抗感染免疫的主要致病因子及其基因功能的研究进展

艰难梭菌是医院感染性腹泻中最常见的病原菌之一,在过去10年中,由于ribotyping 027型等高毒菌株的出现,全球艰难梭菌感染相关性疾病发病率显著上升,已经成为欧美许多国家法定传染病必报的监测病原。致病艰难梭菌的毒力因子主要包括A毒素和B毒素,刺激机体发生免疫应答。除外A、B毒素,少数艰难梭菌还产生二元毒素。本文对近年来艰难梭菌引起机体抗感染免疫的相关致病因子及其基因功能的最新研究进展进行了回顾和总结,并重点探讨了主要致病因子A毒素和B毒素结构功能及基因表达调控特征,包括构建A、B毒素分子模型,致病基因编码区多态性特征,以及负向调控因子tcdC的变异及影响,对未来疫苗靶位点的筛选以及艰难梭菌致病机制中信号转导研究具有指导意义。

临床分离艰难梭菌毒素携带特征研究

目的对医院细菌室送检粪便标本中分离出的艰难梭菌,进行毒素基因以及耐药基因的初步分析。方法将细菌室收集到的112份粪便标本,经选择性厌氧培养,谷氨酸脱氢酶(GDH)以及API 20A生化条鉴定后,分离出12株艰难梭菌,分别采用PCR的方法检测tcdA和tcdB基因、二元毒素基因,克林霉素抗性基因(ermB)。结果12株艰难梭菌中8株为毒素基因阳性,其中tcdA+tcdB+为5株,占62.5%;tcdA-tcdB+为3株,占37.5%;二元毒素基因均为阴性;耐药基因ermB阳性为4株,占50%。结论艰难梭菌tcdA-tcdB+毒株所占比例增加,临床单独检测A毒素易造成漏检;艰难梭菌耐药现象值得关注。