儿童肺炎支原体肺炎肺泡灌洗液CARDS TX、HMGB1、TLR2表达及临床意义

目的研究肺炎支原体肺炎(MPP)患儿肺泡灌洗液中社区获得性呼吸窘迫综合征毒素(CARDS TX)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)、Toll样受体2(TLR2)表达,探讨其在MPP发病中的临床意义。方法回顾性分析55例MPP病例组及20例对照组临床资料,同时检测两组支气管肺泡灌洗液(BALF)中CARDS TX、HMGB1、TLR2、TLR4、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)及髓样分化因子88(MyD88)表达,体外检测不同浓度CARDS TX刺激下HMGB1、TLR2的表达并进行比较。结果与对照组相比,MPP组LYM绝对值计数、PA、CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、CD3-CD19^(+)、NK cell、CD19^(+)CD23^(+)明显下降,CRP、LDH、D-二聚体、IgA、IgG、IgM、CARDS TX、HMGB1、TLR2、MyD88均升高,差异有统计学意义(P<0.05或0.001)。CARDS TX刺激后HMGB1、TLR2的表达升高,且呈正相关,差异有统计学意义(P<0.001)。结论CARDS TX可能通过HMGB1-TLR2-MyD88途径参与肺炎支原体(MP)的致病。

基于多交叉置换扩增和纳米生物传感技术快速检测肺炎支原体方法的建立

目的建立一种简单、灵敏、快速的肺炎支原体(MP)检测方法,并对其应用性进行验证和评价。方法利用多交叉置换扩增(MCDA)技术对肺炎支原体特异基因CARDS毒素基因进行扩增,利用侧流免疫层析生物传感(LFB)技术读取扩增结果,命名该方法为MP-MCDA-LFB。分析扩增反应在60~67℃(间隔1℃)的扩增效率,筛选最适反应温度;分析分别扩增10、20、30、40 min时能够检测到的最低核酸浓度,筛选最佳反应时间。利用10倍系列稀释的肺炎支原体核酸分析MP-MCDA-LFB方法的灵敏度和检测限,利用35株非肺炎支原体菌株分析MP-MCDA-LFB方法的特异性。利用MP-MCDA-LFB方法检测80份疑似MP感染的临床样本,并与RT-PCR法检测结果进行比较,分析MP-MCDA-LFB方法的临床应用性。结果MP-MCDA-LFB能够实现对肺炎支原体CARDS毒素基因的快速检测。其最佳反应温度为63℃,最短反应时间为40 min,整个检测过程可在1 h内。MP-MCDA-LFB方法具有较高的灵敏度和特异性,其检测限低至45 ng/L,与其他临床表现相似的病原体无交叉反应,特异性为100%。MP-MCDA-LFB方法从80份临床样本中检出45份阳性样本(56.3%),检出率与RT-PCR方法一致。结论本研究建立的以CARDS毒素基因为靶标的MP-MCDA-LFB检测方法具有简单、快速、灵敏度高、特异性强的优点,在基层医疗机构和现场检测具有较好的应用潜力。

肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的表达及鉴定

目的探讨肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的免疫反应活性。方法对CARDS毒素蛋白的抗原表位进行分析,选取10个重要的表位进行拼接,反向翻译后合成并克隆,插入pET28a表达载体构建pET-CARDS表达质粒并转入受体菌。经IPTG诱导表达的多表位拼接CARDS蛋白使用6×His单克隆抗体和人阳性血清进行了免疫印迹的检测。结果 CARDS毒素蛋白的多表位拼接抗原表达载体构建成功,诱导后表达大小为30KDa的重组蛋白,Western blot测定其能与6×His单克隆抗体和人阳性血清发生反应。结论本研究选取的CARDS毒素蛋白抗原表位具有较强的免疫活性,可为Mp感染的诊断提供新的候选抗原。

社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS)肺炎支原体毒素促进THP-1细胞自噬并激活NLRP3炎性体

目的研究社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS)肺炎支原体(Mp)毒素诱导THP-1细胞自噬以及活化含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)炎性体的能力和机制。方法采用原核表达技术获得重组CARDS(rCARDS)Mp毒素,5μg/mL和10μg/mL rCARDS Mp毒素作用THP-1细胞20 min、40 min、1 h、2 h和3 h。Western blot法检测THP-1细胞自噬相关蛋白beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)和P62表达水平,实时定量PCR检测THP-1细胞NLRP3、胱天蛋白酶1(caspase-1)和白细胞介素1β(IL-1β)的mRNA水平,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯染色检测THP-1细胞活性氧(ROS)水平。结果与正常细胞对照组相比,rCARDS毒素作用1 h内,THP-1细胞beclin-1、LC3和P62表达量随着作用时间延长明显增加;rCARDS毒素作用2 h和3 h时,beclin-1、LC3和P62表达量降低。rCARDS Mp毒素作用THP-1细胞20 min和40 min时,5μg/mL、10μg/mL rCARDS Mp毒素组细胞NLRP3表达量无显著差别,但在各时间点,rCARDS Mp毒素处理的THP-1细胞NLRP3 mRNA水平均显著高于正常对照组,且作用1 h和2 h时,10μg/mL组细胞NLRP3 mRNA水平显著高于5μg/mL组,而3 h时5μg/mL组和10μg/mL组细胞NLRP3 mRNA水平均低于2 h时。rCARDS Mp毒素作用40 min、1 h和2 h时,不同剂量rCARDS Mp毒素组细胞caspase-1 mRNA水平均高于正常细胞对照组,作用40 min、1 h、2 h和3 h时,10μg/mL组细胞caspase-1 mRNA水平均显著高于5μg/mL组。与正常细胞对照组相比,rCARDS Mp毒素作用20 min和40 min时,不同剂量rCARDS Mp毒素组细胞IL-1βmRNA水平变化不明显,rCARDS Mp毒素作用1 h^3 h时,各组细胞IL-1βmRNA和ROS水平显著增加并呈剂量依赖性。结论CARDS肺炎支原体毒素可以激活THP-1细胞NLRP3炎性体活化并诱导细胞自噬。

缺血性中风毒邪证候特点的回顾性研究

目的总结急性缺血性中风毒邪证的临床基本特征,为中风解毒疗法合理应用提供理论依据。方法通过回顾我院2006-2011年急诊科就诊的缺血性中风急性期病例的证候类型区分痰邪证、火邪证、瘀邪证,对这些证型进行神经功能缺损评分,并对上述指标进行整理,统计学处理。结果缺血性中风急性期毒邪证型各占一定的比例,以痰瘀邪证发生的比例较高,所致的神经功能损害往往较重。结论缺血性中风急性期毒邪证型较为多样化,与神经功能缺损程度有一定相关性,临床解毒疗法须辨证应用。

涂料中原材料毒性及国际化学品安全卡(ICSC)问题

对毒理学中的几个基本概念作了介绍,对涂料中原材料的毒性问题,举例作了说明,通过对化学品安全卡(ICSC)和化学品安全技术说明书(MSDS)的简单叙述,说明重视涂料工业中使用的化学物品的基本信息和相关毒性的重要性。

胶体金免疫快速检测卡与酶联免疫法检测小麦中呕吐毒素的技术比较

以2016年新上市小麦为检测对象,采用胶体金免疫快速检测卡法和酶联免疫法对小麦中呕吐毒素含量进行测定,比较2种方法的符合率。结果表明:2种方法测定结果符合率达到93.4%。胶体金免疫快速检测卡操作简便快速,成本低,适用于新粮上市现场入库把关大量样品的快速初筛;而酶联免疫法检测时间较长,成本更高,更适合经胶体金免疫快速检测卡初筛后呈阴性样品的确证以及呕吐毒素含量的准确定量。

重组肺炎支原体CARDS毒素蛋白临床检测应用的初步研究

目的初步探讨肺炎支原体CARDS毒素蛋白在检测肺炎支原体感染中的应用价值。方法 PCR扩增CARDS毒素基因并连接到PMD-19-T载体,经酶切、PCR及核苷酸测序分析后,将CARDS毒素基因片段克隆到pGEX-6p-1表达载体内并转入受体菌。IPTG诱导大肠埃希菌BL21重组株(pGEX-6p-1-CARDS)的表达。GST柱层析纯化重组CARDS毒素蛋白,以该重组蛋白和重组P1蛋白为抗原建立间接ELISA方法,检测85份感染肺炎支原体的血清标本,并与重组P1蛋白的ELISA结果进行比较。结果 CARDS毒素蛋白表达载体构建成功并表达大小为43kDa的重组蛋白,Western blot测定其能与兔抗Mp多价抗血清发生反应。ELISA结果显示,CARDS毒素蛋白的阳性率为70.59%(60/85),重组P1蛋白的阳性率为63.53%(54/85)。结论本研究成功构建了CARDS毒素蛋白表达载体并获得了稳定表达的重组菌株;在诊断肺炎支原体感染的血清学ELISA试验中,重组CARDS毒素蛋白的敏感性高于重组P1蛋白,为Mp感染的诊断提供了新的可用抗原。

肺炎支原体CARDS毒素对小鼠IgE反应的影响及机制

目的通过肺炎支原体产生的特异性CARDS毒素对血清总IgE的作用,研究其对机体过敏反应的影响。方法 60只SPF级BALB/c小鼠分为对照组和感染组,采用CARDS毒素暴露小鼠模型,评价CARDS毒素特异性反应;肥大细胞脱颗粒研究确定CARDS毒素特异性IgE的功能;Western blot检测JAK3及STAT6的表达;给予热灭活毒素以及STAT6抑制剂检测二者对血清IgE的影响。结果单次暴露于CARDS毒素即可增加小鼠血清总IgE,并持续较长时间;给予CARDS毒素二次暴露的小鼠总IgE仍显著升高,诱导肥大细胞脱颗粒,诱导JAK3和STAT6表达增加,血清IgE的升高需要CARDS毒素的酶活性和STAT6共同作用。结论肺炎支原体CARDS毒素特异性IgE在小鼠体内的存在导致IgE依赖性介质的释放,导致肥大细胞脱颗粒,与哮喘发病及恶化密切相关。