梅毒螺旋体重组蛋白rTpN37为抗原的ELISA的建立与RPR和TPPA血清学检测效果的比较

目的:克隆并构建梅毒螺旋体tpN37基因原核表达系统,建立基于rTpN37的ELISA并对其用于梅毒血清学诊断的敏感性和特异性进行评价。方法:采用PCR扩增tpN37基因,构建tpN37基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rTpN37表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rTpN37,Western blot鉴定rTpN37的免疫反应性。以rT-pN37为包被抗原,建立rTpN37-ELISA并用于检测122例梅毒病人血清,其检测结果与RPR和TPPA进行比较。结果:克隆的tpN37基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rTpN37表达量为细菌总蛋白的20.4%。提纯的rTpN37在SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带。TPPA阳性的梅毒病人血清能有效识别rTpN37并与之结合。rTpN37-ELISA对梅毒病人血清标本检测阳性率为95.9%(117/122),与TPPA检测阳性率(96.7%,118/122)相近(P>0.05),rTpN37-ELISA和TPPA检测阳性率均显著高于RPR(81.1%,99/122)(P<0.01)。结论:本研究中成功地克隆并构建了梅毒螺旋体tpN37基因及其原核表达系统。以rTpN37为包被抗原的rTpN37-ELISA可作为快速、敏感和特异的梅毒血清学筛查方法。