transgelin基因在幽门螺杆菌感染胃癌细胞及人胃癌组织中的表达

目的研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,HP）感染胃癌细胞及人胃癌、淋巴结组织中转凝蛋白基因（transgelin）的表达水平,探讨HP感染、transgelin基因与胃癌发生、发展的相关机制。方法用HP感染胃癌细胞系AGS和SGC-7901,同时收集胃癌患者手术切除的胃癌组织、切缘组织和淋巴结组织,提取及纯化总RNA。实时荧光定量PCR检测transgelin mRNA的表达水平,分析其与临床病理参数的关系。结果 transgelin mRNA在HP感染的AGS、SGC-7901细胞中的表达量增加,分别为对照细胞的11.39倍（t=30.025,P=0.000）、3.41倍（t=5.677,P=0.005）;transgelin mRNA在胃癌组织、淋巴结组织中的表达增加,分别是切缘组织的6.48倍（t=2.290,P=0.026）、2.64倍（t=2.043,P=0.046）;Ⅳ期胃癌组织transgelin mRNA表达量增加,是Ⅰ~Ⅱ期的2.32倍（t=2.111,P=0.049）;淋巴结转移组是无淋巴结转移组的2.93倍（t=2.123,P=0.043）。结论HP可上调transgelin基因的表达,transgelin基因可能参与胃癌的发生、发展,且与p TNM分期及淋巴结转移相关。

子宫肌瘤组织Transgelin基因表达及其临床意义的研究

目的:检测Transgelin基因mRNA及蛋白在子宫肌瘤中的表达,探讨Transgelin基因与子宫肌瘤发生、发展的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法,检测30例子宫肌瘤组织、30例子宫肌瘤包膜外2 cm子宫肌层组织和10例正常子宫肌层组织中Transgelin基因mRNA及蛋白的表达。结果:Transgelin基因mRNA在子宫肌瘤组织中阳性表达率及相对含量分别为23.3%和50.57±20.16,均低于子宫肌瘤包膜外2 cm子宫肌层组织的100.0%和84.62±6.12以及正常子宫肌层组织的100.0%和85.99±6.99,P<0.001。子宫肌瘤包膜外2 cm子宫肌层组织和正常子宫肌层组织中Transgelin基因mRNA的相对含量差异无统计学意义,P>0.05。Transgelin蛋白在子宫肌瘤组织中阳性表达率及相对含量分别为16.7%和23.46±16.54,均低于子宫肌瘤包膜外2 cm子宫肌层组织的100.0%和61.08±8.73以及正常子宫肌层组织的100.0%和67.19±7.62,P<0.001。子宫肌瘤包膜外2 cm子宫肌层组织和正常子宫肌层组织中Transgelin蛋白的相对含量差异无统计学意义,P>0.05。结论:Transgelin基因可能是子宫肌瘤发生过程中的抑制因素,与子宫肌瘤的发生、发展可能有关。

中华大蟾蜍TAGLN2 cDNA的克隆与其组织分布

为研究蟾蜍旧ufo）基原的中药材中的多肽类有效成分，开展从日本蟾蜍（B．japonicus for-moslAs）皮肤cD—NA质粒文库中筛选蛋白编码基因的工作．由于后续拓展蟾蜍药用价值的研究中需要大量的实验材料，开始以中华大蟾蜍（B．gargarizarts）皮肤第一链cDNA为模板，克隆其相关基因的工作．通过DNA聚合酶链式反应获得编码转胶蛋白-2（transgelin2，TAGLN2）的转录子（GenBank登录号为KF432856）．该cDNA全长1207bp，其5’、3’端非翻译区域和开放阅读框分别为16bp、597bp和594bp，编码由197个氨基酸残基组成的蛋白质，与日本蟾蜍的TAGLN2（GenBank登录号为AGQ03775．1）相比，仅一个氨基酸发生替换，与人的同源性为82％，与其他动物的同源性介于70％～75％．RT—PCR组织分布检测表明TAGLN2在所检测的中华大蟾蜍各器官中均有表达．在肺、肝和肾中表达量较多．这些研究结果为后续中华大蟾蜍TAGLN2的生物学功能研究以及相关药物研发提供基础数据．

Transgelin基因真核表达载体的构建及其对胃腺癌AGS细胞增殖的影响

目的 构建人肌动蛋白凝胶蛋白（Transgelin）基因编码区序列（cDNA）的真核表达载体,并观察其对胃腺癌细胞增殖的影响.方法 从健康人肠组织中提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增TransgelincDNA的全长序列后克隆入pcDNA3.1/myc-His（-）A质粒中,构建成Transgelin基因的真核表达载体,然后转染入AGS细胞中,新霉素筛选稳定转染细胞克隆,通过MTT实验,研究转染Transgelin基因后细胞增殖的变化.结果 重组载体经酶切鉴定和测序证实目的 基因正确尤误,Western印迹检测结果显示Transgelin融合蛋白在AGS细胞中具有良好的表达,而转染空载体及未转染细胞对照则未见有此融合蛋白质条带;RT-PCR结果显示Transgelin基因在其稳定转染的AGS细胞克隆中表达上调,与空载体稳定转染及未转染细胞比较,差异具有统计学意义（P＜0.05）.Transgelin表达上调的稳定克隆组,AGS细胞的增殖活性明显降低,MTT结果显示其增殖活性显著低于空载体稳定转染组及未转染亲代细胞组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,而后两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 Transselin表达上调可导致胃腺癌细胞增殖降低.

日本蟾蜍TAGLN2 cDNA的克隆与生物信息学分析

为研究蟾蜍皮肤中多肽类有效成分,通过菌落PCR(polymerase chain reaction)对日本蟾蜍(Bufojaponicus formosus)皮肤cDNA质粒文库进行筛选,对测序结果进行分析及同源性比较,获得转胶蛋白-2(transgelin-2,TAGLN2)的5′端缺失的部分cDNA序列(GenBank登录号为JX197456),长为997 bp,包括348 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)、5'端31 bp及3'端618 bp的非翻译区(untranslated region,UTR),编码由115个氨基酸残基组成的蛋白质。推导的氨基酸序列含有一个调宁蛋白同源性结构域(calponin homology,CH)、两个可形成二硫键的半胱氨酸残基、3个α螺旋区域和5个潜在的磷酸化位点。氨基酸序列同源性分析显示,本文获得的日本蟾蜍N-端截短型TAGLN2与热带爪蟾(Xenopus(Silurana)tropicalis)和非洲爪蟾(Xenopus laevis)相对应部分的同源性分别为90%和89%,与其他7种动物的同源性介于71%～85%之间。