转2mG2-epsps基因烟草的草甘膦耐受性分析

利用农杆菌介导法将耐草甘膦基因2mG2-epsps转入烟草,获得87株PCR阳性植株,阳性率为43%。对PCR阳性植株进行Southern杂交、RT-PCR、Western杂交和ELISA分析,结果显示外源基因已经整合到烟草基因组中并高效表达,转基因植株的叶片中2mG2-EPSPS蛋白的最高表达量可达26.03μg/g鲜重。转基因烟草草甘膦耐受性分析显示,其中有15个转化事件表现出较好的草甘膦耐受性,对草甘膦的耐受性可达到1%。转基因植株的种子可以在10 mmol/L草甘膦异丙铵盐浓度下萌发,T1代转基因烟草幼苗可以耐受浓度为0.8%的草甘膦。研究结果表明转2mG2-epsps基因烟草具有较高的草甘膦耐受性,2mG2-epsps基因可以用于耐除草剂转基因作物的培育。

转番茄正义抗坏血酸过氧化物酶基因提高烟草耐盐能力

【目的】探讨叶绿体类囊体膜抗坏血酸过氧化物酶(tAPX)与耐盐性的关系。【方法】从番茄叶片中分离到类囊体膜抗坏血酸过氧化物酶基因(LetAPX),利用农杆菌介导的叶盘法转入到烟草中。Northern杂交分析了LetAPX在盐胁迫(NaCl)下的表达特征。以野生型(WT),转正义LetAPX烟草株系T2-2(+)和T2-6(+)为试材,测定了盐胁迫条件下APX酶活性,过氧化氢(H2O2)含量,种子发芽率,植株的鲜重、干重,光合速率及叶绿素荧光参数。【结果】Northern杂交显示LetAPX已转到烟草基因组中,且基因的表达受盐胁迫的诱导。盐胁迫下转基因烟草的种子发芽率,植株的鲜重与干重,APX酶活性和清除H2O2的能力都显著高于野生型,并且转基因烟草比野生型具有更高的净光合速率(Pn)和PSII最大光化学效率(Fv/Fm)。【结论】LetAPX的过量表达有助于提高烟草的耐盐能力。

3种渗透剂对转基因烟草根系枯草芽孢杆菌纤溶酶(BSFE)分泌的调节

用0.05%～8.00%的甘露醇、山梨醇和聚乙二醇6000等3种渗透调节剂可提高转枯草芽孢杆菌纤溶酶(Bacillussubtilisfibrinolyticenzyme,BSFE)转基因烟草(NicotianatabacumL.)根系BSFE的分泌表达水平,其水培液BSFE活性在15d内基本呈抛物线型变化趋势。经3种渗透剂处理后转BSFE基因烟草水培液的BSFE活性峰值明显高于对照,且出现时间比对照相对延迟1-2d。甘露醇、山梨醇和聚乙二醇6000可作为该转基因烟草根系BSFE分泌表达的有效化学调节剂。

外源SOD和APX基因在转基因烟草中的表达与遗传

分析转超氧化物歧化酶基因(SOD)或抗坏血酸过氧化物酶基因(APX)烟草及其自交和杂交后代的叶片中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性的结果表明:转基因烟草的SOD和POD活性在终花期最强,不同叶位叶中SOD活性差异不明显,POD活性以下部叶为最高;转基因烟草的SOD或POD活性显著高于近等基因的非转基因品系。杂交后代(F1、F2)的SOD活性能保持稳定,略高于亲本;自交后代(S1～S3)与自交亲本的SOD和POD活性相当。

过量表达水稻细胞质型Os7APXs基因提高转基因烟草的耐盐性(英文)

为了验证水稻(Oryza sativa L.)细胞质型APXs与细胞耐盐性的关系,实验分别将OsAPXa和OsAPXb(基因登录号:D45423、AB053297)转化到烟草(Nictiana tabacum,N.plum)植株中。Southern结果表明,二基因分别整合到烟草的基因组;Northern分析表明,外源基因在转基因烟草中得到高效表达;在碳酸盐逆境下,T2代转基因植株与野生型对照相比,其APX活性呈现显著的提高,T2代品系的H2O2含量和叶片受害程度显著低于野生型;T2代品系分别在含有10mmol·L-1NaHCO3、5mmol·L-1Na2CO3的MS培养基上生长,根的生长受到抑制,叶片产生黄化;野生型烟草则难以存活。水稻细胞质型OsAPXs基因的过量表达提高了转基因烟草的耐盐性,揭示出Os-APXa和OsAPXb在碳酸盐逆境应答过程中发挥着重要的作用。

干旱胁迫对转CpHRD基因烟草的影响

HRD基因是AP2/EREBP转录因子家族的一员,过表达HRD基因可以提高水稻的水分利用效率。本文采用同源序列克隆的方法从线果芥中克隆了Cp HRD基因,并转化野生型烟草,测定了干旱胁迫下转CpHRD基因烟草的丙二醛、游离脯氨酸、可溶性淀粉、可溶性糖的含量以及过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性6项生理指标;观察了转基因烟草的形态和气孔的变化。结果显示,除MDA含量外,转CpHRD基因烟草的其余5项指标均显著高于野生型烟草,而转基因烟草的叶表面气孔数和气孔开度均低于野生型,说明CpHRD基因参与了植物逆境应答过程,并可以显著提高转基因烟草的抗旱能力。

过表达硒代半胱氨酸甲基转移酶烟草的硒耐受特性分析

以经鉴定的硒代半胱氨酸甲基转移酶(Selenocysteine methyltransferase,SMT)转基因烟草(Nicotiana tabacum L)和野生型烟草(NC89)为材料,置于添加不同质量浓度(0、20、40和60 mg/L)硒酸钠的MS培养基上进行培养,35 d后分别测定两种处理材料的过氧化物酶活性、叶绿素、鲜质量和株高等生理生化指标.结果表明:在不同质量浓度硒酸钠处理后,SMT转基因烟草和野生型烟草的叶绿素质量分数、鲜质量及株高均较各自对照明显下降,比较而言,野生型烟草的下降幅度明显大于转基因烟草;另一方面,野生型烟草过氧化物酶(Peroxidase,POD)活性表现强烈的应激反应,其活性明显高于转基因烟草.生长生理与表型特性表明SMT转基因烟草具有一定的硒耐受性.