TOCP对DFP在鸡脊髓神经细胞膜特异结合的影响

[目的]调查〔3H〕DFP在各脊髓段神经细胞膜上的特异结合。[方法]鸡曝露于Tri-o-cre-sylphosphate(TOCP)后,隔6、24、48h处死,取颈、胸、腰段脊髓,称重后制成匀浆。经超速离心,获得膜蛋白。在脊髓膜蛋白中加入8nM的〔3H〕DFP,或加入80nM的非标记DFP后又加入8nM的〔3H〕DFP,然后培养1h。用nitrocellulosefilter进行快速真空滤过,用Tris-HCl-NaCl液对滤纸冲洗,再加5mL的Aquasol-2后,计数〔3H〕DFP的结合量。[结果]对照组鸡的颈、胸、腰椎段脊髓神经细胞膜上的〔3H〕DFP特异结合量分别为832.0、857.0、864.0fmol/mg,TOCP曝露组为273.5、243.52、71.5fmol/mg。TOCP曝露组各段脊髓神经细胞膜上的〔3H〕DFP特异结合量显著低于对照组,而各段脊髓神经细胞膜之间〔3H〕DFP的特异结合量无显著性差异。随着TOCP曝露后的时间的推移,各段脊髓神经细胞膜上的〔3H〕DFP特异结合量逐渐增高,提示迟发性神经毒性有机磷化合物的特异结合膜蛋白是较均匀地分布在整个脊髓神经细胞膜上。在这些脊髓神经细胞膜上的特异性结合部位,TOCP和DFP之间有竞争性抑制作用。[结论]脊髓神经细胞膜上的特异性结合膜蛋白可能与有机磷化合物的迟发性神经毒性诱发有关。

有机磷酸酯诱导迟发性神经毒性及其对神经毒性酯酶（NTE）活性影响的动态研究

以成年产卵来航母鸡为试验动物，研究了三甲基苯基磷酸酯（Ｔｒｉ－ｏ－ＣｒｅｓｙｌＰｈｏｓ－ｐｈａｔｅ，ＴＯＣＰ）诱导的迟发性神经毒性．试验发现，母鸡口服ＴＯＣＰ（７５０ｍｇ／ｋｇ）后，经过大约８－１０ｄ的潜伏期开始出现中毒症状，其表现为以步态失调为主要特征的运动障碍呈进行性加重，至第２１ｄ开始便发展为瘫痪，对鸡脑神经病损靶标酯酶（ＮｅｕｒｏｐａｔｈｙＴａｒｇｅｔＥｎｚｙｍｅ，ＮＴＥ）活性的测定表明，有机械诱导的迟发性神经毒性（Ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ＩｎｄｕｃｅｄＤｅｌａｙｅｄＰｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ，ＯＰＩＤＰ）与ＮＴＥ活性抑制之间的关系不平行，其毒性症状的轻重与ＮＴＥ活性被抑制的强弱也不呈正相关，很可能，在给药后２４ｈ，体内ＯＰＩＤＰ已被触发，此外，实验观察到给予ＴＯＣＰ后被试鸡的体重明显下降。

三甲基苯基磷酸酯对神经毒性酯酶的抑制及其酶促动力学分析

以可使人和敏感动物产生迟发性神经毒性的有机磷化合物三甲基苯基磷酸酯（TOCP）为测试药物，研究其在体外对成年产卵来航母鸡不同神经组织神经毒性酯酶（NTE）活性抑制的敏感性及其抑制的动力学．结果表明，外周神经NTE对于TOCP的抑制比中枢神经NTE敏感得多．TOCP对鸡脑、脊髓和坐骨神经中NTE抑制的I50值．分别为：1．9323、2．3950和0．0035mmol／L．NTE酶促动力学研究显示，鸡脑NTE催化分解底物戊酸苯酯（PV）的Vmax为62．10nmol·min-1·mg-1，Km为0．92mmol／L．TOCP对鸡脑NTE的抑制属竞争性抑制类型，并有"底物抑制"现象．

牡丹染色体组型分析

牡丹染色体组型分析侯启昌牡丹（ｐ．ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ）同毛英目（Ｒａｎａｌｅｓ）、芍药科（Ｐａｅｏｎｉａｃｅａｅ）、芍药用（Ｐａｅｏｎｉａ），原产我国西北地区，原始种为矮牡丹（ＰａｅｏｎｉａＳｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａＶａｒ．Ｓｐｏｎｔａｎｅａ），...

苯甲基磺酰氟对三邻甲苯磷酸酯暴露母鸡脑组织基因表达谱的影响

[目的]从三邻甲苯磷酸酯(TOCP)暴露母鸡的脑组织中筛选迟发性神经毒性(OPIDN)相关基因,为探讨OPIDN发病机制提供靶基因信息谱。[方法]成年母鸡12只,随机分为1000 mg/kg TOCP暴露组、皮下注射40mg/kg苯甲基磺酰氟(PMSF)后再给TOCP的PMSF干预组及给生理盐水的对照组。染毒第5天处死鸡,取脑称重后制成匀浆,并依次行总RNA提取、纯化、体外转录cRNA探针合成、生物素标记、基因芯片杂交、杂交信号扫描和芯片数据处理分析。[结果]TOCP暴露组与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05),且与PMSF前干预组比较差异无显著性意义(P>0.05)的基因有311个。其中,差异表达3倍以上的36个。[结论]通过PMSF干预,从TOCP暴露母鸡脑组织中筛出与OPIDN诱发相关基因311个。其中,有36个基因可能与OPIDN密切相关。

三邻甲苯磷酸酯污染面粉致中毒性周围神经病暴发的危险因素分析

发生一起农民因食用三邻甲苯磷酸酯（ＴＯＣＰ）污染的面粉，导致中毒性周围神经病暴发事件。总罹患率为６．０５‰，红光村２６．３５‰，潜伏期４０～９４天，具有明显的家庭聚集性。在排除病毒、细菌、重金属、非金属及生物碱作为病因可能后，经对食用不同来源蔬莱、食用油、面粉及小麦使用农药史等危险因素进行逐一分析后，发现食用河道磨房面粉为患病高危险因素，ＲＲ＝１８．２４，Ｐ＜０．００１，并经实验室检测，从该面粉中检出ＴＯＣＰ（０．２６～１．４０ｍｇ／ｋｇ）。证实本次中毒性周围神经病暴发系ＴＯＣＰ中毒所致，受ＴＯＣＰ污染的河道磨房面粉系本次暴发的危险因素。

PMSF对TOCP暴露鸡腰髓组织蛋白表达谱影响

目的从三邻甲苯磷酸酯(TOCP)暴露鸡的腰髓组织中筛选迟发性神经毒性(OPIDN)相关差异表达蛋白点,为进一步质谱分析提供依据。方法成年罗曼鹤母鸡24只,随机分成1 000 mg/kg TOCP组,先给40 mg/kg苯甲基磺酰氟(PMSF)后24 h再投1 000 mg/kg TOCP组(PMSF干预组)和给予生理盐水的对照组,每组8只。染毒后5 d天处死动物,分离腰髓后提取总蛋白;通过双向凝胶电泳获得完整的全蛋白质图谱,运用图像分析软件(ImageMaster2D)对银离子染色的电泳图谱进行分析。结果根据PMSF的作用特点,在TOCP组中选择与对照组比较差异有统计学意义,与PMSF干预组差异无统计学意义的蛋白匹配点,共获得上调点23个,下调点113个,其中>4倍的上调点9个,>4倍的下调点11个。结论 TOCP暴露鸡腰髓组织中9个上调点和11个下调点的差异表达蛋白与其迟发性神经毒性可能密切相关。

磷酸三邻甲苯酯对母鸡中枢神经组织线粒体中ATP含量及ATPase的影响

目的观察磷酸三邻甲苯酯(tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)对母鸡中枢神经组织线粒体ATP含量及ATP合成酶(ATP synthase,ATPase)的影响,探讨有机磷化合物诱导迟发性神经毒性(organophosphorus ester-induceddelayed neurotoxicity,OPIDN)的机制。方法成年罗曼母鸡96只随机分为实验组和对照组。实验组分别按185、375和750 mg/kg经灌胃一次性染毒TOCP,对照组给予等体积玉米油。分别于染毒1、5、15和21 d处死动物,迅速剥离大脑和脊髓,分离提纯其线粒体,生物发光法检测线粒体ATP含量的改变,并分别采用RT-PCR和Western blotting技术检测了ATPase mRNA水平及蛋白水平的改变。结果实验组与对照组相比,母鸡大脑中线粒体ATP含量没有明显改变,脊髓中3个剂量组均从第5天开始即出现明显降低,第21天线粒体ATP含量较第15天有所升高。RT-PCR结果表明,TOCP染毒后母鸡中枢神经组织中ATPase 6 mRNA水平与正常对照组相比均明显降低。Western blotting结果显示大脑和脊髓中均呈现先升高后降低的趋势,脊髓ATPaseβ蛋白含量变化比大脑变化更明显。结论 TOCP能使母鸡中枢神经组织线粒体ATP含量发生改变,并能引起ATPase mRNA水平和蛋白水平的改变。

OPIDN致鸡大脑脑型肌酸激酶差异表达

目的探讨有机磷化合物致迟发性神经毒性(OPIDN)鸡脑组织中脑型肌酸激酶同工酶(CK-BB)表达变化。方法罗曼鹤母鸡24只,随机分成三磷甲苯磷酸酯(TOCP)染毒组(1 000 mg/kg)、苯甲基磺酰氟(PMSF)干预组(在染毒之前给予40 mg/kg PMSF)和对照组(生理盐水),每组8只。染毒第5和第21天,每组分别处死8只动物,分离大脑,提取总蛋白;用双向电泳和质谱分析技术,筛选相关差异表达蛋白。结果蛋白双向电泳结果显示,在染毒第5天,TOCP组与对照组、PMSF干预组与对照组的CK-BB蛋白点灰度比值分别为0.858 3和0.913 3,各组间差异无统计学意义(P>0.05);染毒第21天,TOCP组和PMSF干预组与对照组差异蛋白点CK-BB灰度比值分别为0.327 5与0.675 7,前者表达下调达3.0倍;对该蛋白点的质谱分析结果在Swiss-por数据库中进行比对,其与鸡种属、蛋白序列号为gi|45384340的creatine kinase B-type(CK-BB)蛋白的肽段匹配数为26,序列覆盖率为75%,评分值为1 603(可信度高),显示该蛋白点即为CK-BB蛋白。结论 OPIDN可致鸡大脑组织CK-BB蛋白表达显著下调,其变化可能与OPIDN模型动物神经组织损伤有关。

三邻甲苯磷酸酯染毒的母鸡脊髓中AKT/mTOR/p70S6K信号通路的变化

目的研究三邻甲苯磷酸酯(TOCP)所致迟发性神经病(OPIDN)中AKT/mTOR/p70S6K信号通路的变化,探讨OPIDN发生的分子机制。方法 30只成年罗曼母鸡随机分为5组,每组6只,给予750 mg/kg TOCP一次性灌胃,然后分别在TOCP染毒后0、1、5、10和21 d时间点处死一组动物取脊髓组织,免疫印迹法检测脊髓中AKT、p-AKT、p70S6K、p-p70S6K和mTOR的相对含量。结果 TOCP染毒引起母鸡脊髓中磷酸化AKT、p70S6K和mTOR的含量显著下降(P<0.05),而AKT、p70S6K的含量没有明显变化(P>0.05)。结论 TOCP干扰了AKT/mTOR/p70S6K信号通路的调节机制,这可能与OPIDN的发病机制有关。

三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞内PKC活性及转位的影响

目的研究三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞蛋白激酶C(PKC)活性和转位的影响。方法以TOCP(0、0.25、0.5、1.0 mmol/L)对人成神经瘤细胞系SH-SY5Y细胞进行染毒,染毒时间为12、24和48 h,用PKC活性检测试剂盒检测PKC的活性,间接免疫荧光术检测PKC在细胞内的定位,荧光倒置显微镜观察结果。结果 1.0 mmol/L TOCP作用SH-SY5Y细胞24 h,PKC的活性最强,并能导致PKC由胞质向胞膜转位。结论 TOCP作用SH-SY5Y细胞后,能激活PKC,增加膜转位。