生物靶标光敏剂对鸭乙肝病毒的特异结合及杀灭作用研究

目的 :利用生物靶标效应的原理 ,探索一种特异灭活病毒的光化学方法。方法 :将针对鸭乙肝病毒 (DHBV)设计并人工合成的两条三螺旋结构寡核苷酸 (TFO)分别标记 8-甲氧基补骨脂素 (8-MOP) ,并将这种复合物 (TFO -P)与长波紫外线 (UVA)共同作用于血液中的DHBV ,通过原代细胞感染、酶联免疫测定、DNA斑点杂交等试验 ,观察在一定作用条件下 ,TFO -P对DHBV-DNA的特异结合及其所产生的特异光敏效应对DHBV的灭活程度。结果 :DHBV -DNA样品斑点印迹随TFO -P含量的增加明显增强 ,而同时处理的血液中的白细胞DNA样品斑点印迹无明显增强 ;在TFO -P的加入量为 0 1nmol/ml,UVA照射强度为180 0 μW /cm2 时 ,5～ 2 0min的UV照射可灭活DHBV 1 90～ 6 4个对数级 ,灭活病毒的效率显著高于UVA和 8-MOP的单独作用时的效果。结论 :TFO -P与血液中DHBV -DNA能特异结合 ,在适宜的处理条件下 ,所产生的光敏效应能有效灭活血液中的DHBV ,灭活滴度可达

抗乙型肝炎病毒基因治疗的若干进展

随着分子生物学特别是基因工程技术的发展 ,抗乙型肝炎病毒基因治疗有较深入的研究 ,利用基因重组、转基因及反义核酸等技术 ,在细胞水平或通过动物实验阶段的研究 ,基因有关治疗在抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制中的作用已被证实。本文对转基因干扰素、DNA疫苗 (DNA免疫 )、反义寡核苷酸、三螺旋形成寡核苷酸 (反基因寡核苷酸 )。

8-MOP的光敏反应对DNA特定位置的致损伤作用

目的:探讨末端标记8-甲氧基补骨脂素(8-MOP)的三螺旋结构寡核苷酸(TFO)对鸭乙肝病毒(DHBV)-DNAX/C区一目标基因的特异结合及定位损伤作用。材料方法:在一定条件下,将人工合成的3’末端标记有8-MOP的TFO与目标双链基因片断反应,用电泳转移杂交印迹和PCR法观察设计的复合物(TFO-P)对目标基因的结合以及在长波紫外线(UVA)的照射下8-MOP所致DNA交联及引起的PCR扩增阻止效应。结果:所设计合成的TFO-P能与细胞外DHBV-DNA的目标基因双链直接结合,随TFO-P含量的增加,TFO-P与目标双链形成的三聚体分子的产量明显增加;TFO-P与目标基因的反应物经一定剂量的320～380nmUVA照射后,目标序列的PCR扩增出现阻断现象。结论TFO-P能直接与目标DNA特异结合,形成三聚体产物,在UVA的进一步作用下,TFO-P能在目标序列的设定位置发生光敏反应,使DNA形成共价交联结构。